ES打靶和CRISPR／Cas9如何选择？
近年随着生物医药技术快速迭代，靶向药物、免疫疗法、基因治疗等个性化治疗方式成为生物药创新的主要方向。国内企业亦纷纷向生物药领域挺进或转型，生物药市场愈发火热。 其中，基因编辑婴儿事件虽然近日被《科学》杂志列入2018年度十大科学突破的负面事件，但从一年前的ZL之争，到年底基因编辑公司Editas人类基因编辑的临床试验获FDA批准可知，基因编辑技术的发展备受期待。 两大技术PK 就药物研发而言，目前基因编辑技术运用最为频繁的莫过于动物模型的制备。 由于普通小鼠的免疫检查点基因与对应人类基因的同源性只有60%左右，一般作用于人源蛋白的抗体并不能识别小鼠体内的蛋白，因此无法使用普通小鼠来进行抗体药物的药效评价，需要通过一定的技术把作为基因靶点的小鼠基因换成人的同源基因——即人源化小鼠来研究靶向药物，让小鼠表达人蛋白或抗体，用于开发新的治疗手段和药物。因此有行业人士预期，2019年，人源化动物模型的需求将继续增加。 目前动物模型基因编辑......阅读全文
ES细胞打靶技术介绍
你听说过喀迈拉兽（chimera）吗？没错，就是古希腊神话故事中一只会喷火的怪兽，这种怪兽拥有狮头、羊身、蛇尾，像是由几种动物拼成的。或许你知道喀迈拉兽，但你是否知道在生物遗传学中也有一种名为喀迈拉的动物吗？那这神奇的怪兽与我们生物领域中的ES细胞基因打靶到底有什么关系呢？本期话题，咱们就一起来聊聊
ES打靶和CRISPR/Cas9如何选择？
近年随着生物医药技术快速迭代，靶向药物、免疫疗法、基因治疗等个性化治疗方式成为生物药创新的主要方向。国内企业亦纷纷向生物药领域挺进或转型，生物药市场愈发火热。 其中，基因编辑婴儿事件虽然近日被《科学》杂志列入2018年度十大科学突破的负面事件，但从一年前的ZL之争，到年底基因编辑公司Editas人类
ES打靶和CRISPR/Cas9如何选择？
近年随着生物医药技术快速迭代，靶向药物、免疫疗法、基因治疗等个性化治疗方式成为生物药创新的主要方向。国内企业亦纷纷向生物药领域挺进或转型，生物药市场愈发火热。 其中，基因编辑婴儿事件虽然近日被《科学》杂志列入2018年度十大科学突破的负面事件，但从一年前的ZL之争，到年底基因编辑公司E
ES打靶和CRISPR/Cas9如何选择？
近年随着生物医药技术快速迭代，靶向药物、免疫疗法、基因治疗等个性化治疗方式成为生物药创新的主要方向。国内企业亦纷纷向生物药领域挺进或转型，生物药市场愈发火热。 其中，基因编辑婴儿事件虽然近日被《科学》杂志列入2018年度十大科学突破的负面事件，但从一年前的ZL之争，到年底基因编辑公司E
CRISPR/Cas9和ES打靶选择的优劣比较
近年随着生物医药技术快速迭代，靶向药物、免疫疗法、基因治疗等个性化治疗方式成为生物药创新的主要方向，这其中离不开基因编辑技术的发展。从一年前的ZL之争，到基因编辑公司Editas人类基因编辑的临床试验获FDA批准可知，基因编辑技术的发展备受期待。 目前动物模型基因编辑技术大抵分为两类：ES细胞打靶
如何鉴定CRISPR/Cas9点突变小鼠转基因鼠以及ES打靶技术...
如何鉴定CRISPR/Cas9点突变小鼠转基因鼠以及ES打靶技术构建鼠？ 基因工程小鼠基因型PCR鉴定的基本原则是利用基因工程小鼠基因组与野生型小鼠基因组的序列差异，以小鼠基因组DNA为模板进行PCR，并以凝胶电泳对比不同基因型特异产物的大小，根据条带大小来区分小鼠的不同基因型。上期我们讲述了CRI
TetraOne－KO——基因敲除技术进展
TetraOne KO——基因敲除技术的重大突破 近日，赛业生物科技（Cyagen Biosciences）宣布推出其全球ZL技术TetraOne基因敲除，一种不仅在速度上媲美TALEN、CRISPR/Cas9（把ES打靶基因敲除/敲入鼠的定制周期降低至6个月），而且避免了TALEN、CRISP
如何选择基因敲除动物模型制备技术？
动物模型是现代生命科学研究的重要工具，特别是基因工程小鼠和大鼠，在基因功能研究、人类生理病理机制研究及新药研发中起着不可替代的作用。近几年来，制 备动物模型的基因修饰技术层出不穷，这不仅包括传统ES打靶、TALEN、CRISPR/Cas9， 还有TetraOne基因敲除新技术。如此繁 多的技
TetraOne－KO——基因敲除技术的重大突破
近日，赛业生物科技（Cyagen Biosciences）宣布推出其全球ZL技术TetraOne基因敲除，一种不仅在速度上媲美TALEN、CRISPR/Cas9（把ES打靶基因敲除/敲入鼠的定制周期降低至6个月），而且避免了TALEN、CRISPR/Cas9脱靶效应困扰的革命性技术。TetraO
TetraOne－KO——基因敲除技术的重大突破
TetraOne KO——基因敲除技术的重大突破 近日，赛业生物科技（Cyagen Biosciences）宣布推出其全球ZL技术TetraOne基因敲除，一种不仅在速度上媲美TALEN、CRISPR/Cas9（把ES打靶基因敲除/敲入鼠的定制周期降低至6个月），而且避免了TALEN、
条件基因打靶的定义
中文名称条件基因打靶英文名称conditional gene targeting定 义一种位点特异的基因重组技术，将带有可调控序列的外源基因替代受体细胞基因组中与该外源基因有同源序列的基因,从而可通过外界因素人工调节该目的基因的表达。应用学科免疫学（一级学科），概论（二级学科），免疫学相关名词（三
基因打靶技术的研究
基因打靶技术是从20世纪80年代发展起来的，是建立在对同源重组不断了解的基础之上。首先是以酵母这种较为简单的真核模式生物为基础，来对相关技术进行研究。随着外源DNA导入酵母细胞方法的建立、标记基因有效选择的利用、同源重组转化子筛选系统的建立、载体同源序列DNA（靶标）双链断裂提高同源重组效率的利用，
基于胚胎干细胞的同源重组技术介绍
基因改造（包括敲除和敲进）小鼠已经成为现代生命科学基础研究和药物研发领域不可或缺的实验动物模型，在生命科学、人类医药和健康研究领域中发挥着重要的作用。今天呢，就给大家介绍最传统最稳定的基因改造技术：基于胚胎干细胞的同源重组技术。Capecchi和Smithies早在在1989年根据同源重组（homo
KARYOTYPING－ES－CELLS
An actively growing culture of cells is required, i e 2 - 3 d ES cell culture. The total number of cells needs to be between 106 - 107 cells.N B Read
Electroporation－of－ES－cells
Cells are routinely passaged two days prior to electroporating. Usually one 10 cm plate at approximately 80% confluency will provide enough cells for
Human－Embryonic－Stem－(ES)－Cell－Protocols——Thawing－Human－ES－cells
Remove Human ES cells from liquid nitrogen storage tank. Fill out a freeze/thaw form.Thaw cryovial by gently swirling in waterbath until only a small
Human－Embryonic－Stem－(ES)－Cell－Protocols——Freezing－Human－ES－Cells
Collagenase cells for approximately 7 minutes at 37 °C (until edges of colonies are curling up).With a 5 ml pipet, gently pipet and scrape colonies f
同源重组技术原理
同源重组技术原理：基因敲除鼠技术是上世纪80年代中后期基于DNA同源重组的原理发展起来的，Capecchi和Smithies在1987年根据同源重组（homologous recombination）的原理，首次实现了ES的外源基因的定点整合（targeted integration），这一技术称为
基因捕获技术的优点缺点
用常规方法进行基因打靶研究需耗费大量的时间和人力。研究者必须针对靶位点在染色体组文库中筛选相关的染色体组克隆，绘制相应的物理图谱，构建特异性的打靶载体以及筛选中靶ES细胞等。通常一个基因剔除纯合子小鼠的获得需要一年或更长的时间。面对人类基因组计划产生出来的巨大的功能未知的遗传信息，传统的基因剔除方法
Human－Embryonic－Stem－(ES)－Cell－Protocols——Splitting－Human－ES－cells－on－MEFs
based on splitting onto one plateWarm collagenase IV split media to 37 °C in a water bath.Aspirate media off of cell culture plate.Add the following a
Human－Embryonic－Stem－(ES)－Cell－Protocols——General－notes－on－ES－cell－culture
hES media has a two week shelf life.hES cells should be cultured in 4, 6, 24, 48, 96 well plates. Growing cells in flasks is not recommended because i
ES细胞分化培养实验——培养皿ES细胞集落
实验材料ES 细胞单一胚胎样体仪器、耗材细菌培养皿ES 分化培养基实验步骤1. 准备下列试剂和材料：悬滴培养的 ES 细胞单一胚胎样体100 mm 细菌培养皿ES 分化培养基2. 在 100 mm 细菌培养皿中加 10 ml 预热的分化培养基。3. 从温箱中取出培养 2 天的悬滴培养物。小心翻转培养
Human－Embryonic－Stem－(ES)－Cell－Protocols—Splitting－Human－ES－cells－onMatrige
based on splitting onto on plateWarm collagenase media to 37°C in a water bath.Aspirate media off of cell culture plate.Add the following amount of co
基因打靶技术的原理方法
将外源DNA导入靶细胞后，利用基因重组，将外源DNA与靶细胞内染色体上同源DNA间进行重组，从而将外源DNA定点整合入靶细胞基因组上某一确定的位点。对于不同的生物体，所使用的基因打靶的方法也不用。对于小鼠来说，大致的流程如下：从小鼠胚胎上提取干细胞；同时，构建靶载体，靶载体中含有与靶基因同源的DNA
胚胎中细胞基因打靶方法
胚胎中细胞基因打靶方法置换型设计物的制备1．选择靶基因的一个部分作为设计物的组成，还包括有靶基因的另一个部分作为Southern杂交探针，以鉴定细胞中是否已发生同源重组之用。2．在质粒载体中构建一个克隆；neo基因能阻断靶基因的表达，在neo的两侧保持保留同源区；在同源区外的置换型设计物中包含一个胸
FACS－Analysis－of－ES－Cells
Isolate cells and dissociate to single cell suspension (can use Gibco Cell Dissociation Buffer, Accutase or Trypsin)Wash with 10% FBS/DMEM:F12For surf
Counting－ES－cell－Chromosomes
(original reference: "tissue culture made easy" by Christian LaMantia from the Magnuson lab)1) Plate cells onto gelatinized plates (35 or 60 mm) witho
Routine－Culturing－of－ES－Cells
Cell are normally passaged every 2-3 days, this is important to avoid differentiation.Signs of differentiation are:-i) colonies are surrounded by flat
ES－Cell－Culture－and－Manipulation
MediaHigh glucose DMEM (-pyruvate, -glutamine)20% Heat-inactivated Fetal calf serum (can vary by cell type, be sure!!)1X l-glutamine1X Penicillin/stre
研究中常用的两种小鼠背景品系的选择C57BL/6与Balb/C
基因编辑鼠的种类很多，在实际应用中，要根据研究的内容和目的来选择合适的基因编辑鼠才能取得良好的实验结果。我们通常会根据研究内容从背景品系、修饰的基因、修饰的方式以及构建技术这几个方面进行考虑来选择合适的基因编辑鼠。今天我们就先来聊一聊研究中常用的两种背景品系及构建技术的选择。 研究中常用的两种背景品