应用MD微孔板读板机和双报告系统检测NFκB活性(三)
荧光素酶检测设定试剂盒中的试剂使用前需在室温下孵育。向装有2 . 2 m g 冻干底物的小瓶中加入220μL水混匀后即为萤火虫酶底物。向装有440μg冻干底物的小瓶中加入220μL水混匀后即为水蛭素肠杆菌素。用萤火虫检测缓冲液按1:50比例稀释萤火虫酶底物后即为萤火虫工作液。用海肾荧光素酶缓冲液按1:50比例稀释水蛭素肠杆菌素后即为海肾工作液。对一个96孔板来说,每种工作液(working solution)我们需要11mL,其中包含220μL各自的底物(substrate)。SoftMax® Pro Software中预配置的程序可以帮助执行实验操作和结果分析,这需要以下的参数设置:1、使用注射器1向孔中加入100μL萤火虫工作液2、等2秒钟使反应充分3、设置integration time 5秒检测萤火虫荧光4、使用注射器2向孔中加入100μL海肾工作液5、等2秒钟使反应充分6、设置integration tim......阅读全文
应用MD微孔板读板机和双报告系统检测NFκB活性(三)
荧光素酶检测设定试剂盒中的试剂使用前需在室温下孵育。向装有2 . 2 m g 冻干底物的小瓶中加入220μL水混匀后即为萤火虫酶底物。向装有440μg冻干底物的小瓶中加入220μL水混匀后即为水蛭素肠杆菌素。用萤火虫检测缓冲液按1:50比例稀释萤火虫酶底物后即为萤火虫工作液。用海肾荧光素酶缓冲液
应用MD微孔板读板机和双报告系统检测NFκB活性(二)
方法细胞接种和转染HEK293细胞(80%融合度)用胰酶消化后分到96孔白板中,每孔15,000细胞。当细胞超过50% 融合度时,用NF- κB-RE 萤火虫荧光素酶和海肾对照组质粒对细胞进行共转染,其中使用三种不同比例FuGENE和DNA组合方式,转然后,细胞置于37°C培养箱中培养24h。
应用MD微孔板读板机和双报告系统检测NFκB活性(一)
前言报告基因对于基因表达的研究来说是非常有用的工具,它可以代替要研究的目的基因,从而帮助我们了解目的基因的信号通路和相关的疾病。荧光素酶是最常用的报告基因,使用光度计和化学发光功能的微孔板读板机我们可以很容易的检测到荧光素酶,另一方面,由于在细胞实验中其背景较低,因此具有很高的灵敏度。我们通常用萤火
SpectraMax-M系列微孔板读板机应用集锦(三)
应用原代细胞进行高通量复杂炎症分析炎症反应的一个重要步骤是细胞表面抗原与血管中免疫细胞的特异性结合。因此,对这些分子变化的及时监控,如VCAM, E-selectin,以及内皮细胞上的HLADR等等,我们用多通道荧光读取人原代细胞表面的炎症标记,并在此基础上评估不同介质对炎症反应的调节作用。
EMax-Plus-微孔板读板机应用Molecular-Devices
介绍随着光吸收法可以满足越来越多的应用检测领域,终点法读板机在实验室中的占有率也越来越高。例如ELISAs方法进行细胞因子定量和Bradford法进行蛋白定量。本篇应用就是要着重比较使用Bradford法进行蛋白定量检测时,Molecular Devices公司最新的产品EMax® Plu
SpectraMax-M系列微孔板读板机应用集锦(二)
软件验证对于在GLP或GMP实验室工作的科研人员,SoftMax Pro软件验证方案提供了最为全面的记录文档和可用于验证GxP管理员功能,软件运行和分析能力的工具。- 验证时间从6个月降低到3天支持平行线分析,4-P和5-P曲线拟合验证- 全面复杂的针对常规实验计算的检测- 即时可用于OQ验证检测的
SpectraMax-M系列微孔板读板机应用集锦(四)
使用NanoOrange蛋白试剂盒传统的比色方法,如280吸光,BCA,Bradford或Lowry法,当使用微孔板格式时灵敏度不佳。来自Life Technologies公司的NanoOrange® 蛋白定量试剂盒在多孔板格式的动态区间可达 10 ng/mL到10 μg/mL。此应用文章展
SpectraMax-M系列微孔板读板机应用集锦(一)
引领微孔板检测系统的行业标准历经13年发展,SpectraMax® M系列多功能微孔板读板机由于其优异的检测表现、可靠的性能、深受广大科研工作者的信赖,已然成为行业标准的引领者。可以根据应用需求轻松升级满足您的检测。仪器设置和数据处理都可借助于专业的SoftMax® Pro软件完成,所有
利用MD微孔板读板机对细胞内氧化自由基吸收能力(ORAC)...
引言活性氧簇 (Reactive oxygen species, ROS) 是由细胞内正常代谢反应,环境压力 以及紫外辐射产生的一类物质,包括过氧 自由基、羟基自由基、超氧离子和单线态 氧。氧化自由基吸收能力 (oxygen radical absorbance capacity,ORAC)
利用MD微孔板读板机对细胞内氧化自由基吸收能力ORAC
活性氧簇 (Reactive oxygen species, ROS) 是由细胞内正常代谢反应,环境压力 以及紫外辐射产生的一类物质,包括过氧 自由基、羟基自由基、超氧离子和单线态 氧。氧化自由基吸收能力 (oxygen radical absorbance capacity,ORAC) 分析是
利用多功能微孔板读板机和MycoAlert支原体检测试...(二)
结果我们利用Lonzede公司的MycoAlert试剂盒针对所有发光型微孔板读板机进行灵敏度评价,针对于MycoAlert试剂盒质控样品在1:8稀释倍数关系时获得Ratio>1.2,而针对于MycoAlertPLUS试剂盒质控样品在1:1000稀释倍数关系时可获得Ratio>1.2。所有的Molec
利用多功能微孔板读板机和MycoAlert支原体检测试...(一)
利用多功能微孔板读板机和MycoAlert支原体检测试剂盒进行相应污染物评价这篇应用文章介绍了如何利用Molecular Devices公司的具有化学发光的微孔板读板机进行相应检测,仪器和试剂盒组合简单易操作,进行相应检测时表现出很高的灵敏度。两种类型的检测试剂盒均可在Molecular D
如何使用M5-多功能微孔板读板机和IMAP®-荧光偏振...(三)
结果SoftMax Pro软件中预置的IMAP 荧光偏振模板会自动计算出水平偏振均值和垂直偏振均值(mP值),总的荧光强度,标准方差和CV值。每一组试验样品的组群一栏中,模板会自动扣除背景样品的荧光偏振值,然后计算出最小偏振mP值。也可根据相应的校正曲线计算出样品磷酸化比率。(See IMA
使用SpectraMax微孔板读板机检测QuantiT-PicoGreen-dsDNA实验--一
简介双链DNA通常使用微孔板读板机通过测量DNA溶液的260nm吸收光进行定量。然而,这种方法通常在微孔板读板机上只能检测到最低250ng/mL的浓度。对于生物学应用涉及到小体积样品,如新一代测序和扩增产物定量时,更灵敏的方法才能满足需求。Life Technologies公司的Quant-iT
用SpectraMax多功能微孔板读板机进行cAMP-HiRange检测(二)
Z’ 因子由阴性(无cAMP,无cAMP-d2)和阳性质控(无cAMP)计算得到2。利用SoftMax® Pro软件生成和分析数据,包含一些预设的HTRF实验模板以简化检测和分析。结果使用SoftMax Pro软件的4-参数曲线拟合如上所述进行数据分析和做图。依据表2的读板机参数设置获得最佳结果
使用SpectraMax微孔板读板机检测QuantiT-PicoGreen-dsDNA实验-二
- 高浓度范围标曲可以浓度从1 ng/mL制备到1 μg/mL,低浓度范围标曲可以从25 pg/mL制备到25 ng/mL。对于高浓度范围标曲,按Table 2中稀释方案稀释;对于低浓度范围标曲,40倍稀释2μg/mL溶液制备50 ng/mL溶液,参考Table 3中的稀释方案。 注意:此篇
用SpectraMax多功能微孔板读板机进行cAMP-HiRange检测(一)
简介在这篇应用文献中,我们展示了如何用SpectraMax®i3、SpectraMax®Paradigm®和SpectraMax®M5e多功能微孔板读板机进行可靠的、高通量的HTRF®检测,并具有完美的Z’因子和高重复性的EC50值。HTRF®是CisbioBioassays公司开发的一项检测生物分
利用-SpectraMax-iD3-微孔板读板机检测内源色氨酸荧光
介绍蛋白质的内源荧光主要来源于芳香族氨基酸如色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸。在水中,色氨酸的最大激发光波长在270-280nm左右而其发射光波长峰值接近350nm。蛋白的发射光谱对溶剂的极性和外界环境十分敏感。当蛋白质变性时,色氨酸残基会暴露在水中而其发射波长会变长。这种发射波长峰值的改变可以用来检测蛋白
利用SpectraMax-i3x多功能微孔板读板机检测功能对...(一)
利用SpectraMax i3x多功能微孔板读板机检测功能对于细胞活力和细胞毒性的评价优势1.仪器具有超高灵敏度化学发光检测功能,最低至10个细胞/每孔2.微孔板读板高度自动优化设置,可提高检测信号强度 软件预置3.软件预置模板可以更快分析出检测结果 简介SpectraMax i3x是Molecul
利用SpectraMax-i3x多功能微孔板读板机检测功能对...(二)
ATP标准曲线既可以验证试验条件也可以用来计算细胞内ATP的含量。因此ATP标准品浓度范围从1nM至10uM产生的化学发光信号范围可覆盖整个不同细胞数目孔中产生的信号值(图二),检测的线性范围大于四个数量级。 经十字孢碱(staurosporine)和茴香霉素 (anisomycin)等化合物
如何使用M5-多功能微孔板读板机和IMAP®-荧光偏振...(二)
结合反应步骤1.将75%的结合缓冲液A与25%的结合缓冲液B混合,制备结合缓冲液;步骤2.将结合试剂以1:600倍稀释成结合缓冲液,得到结合反应液;步骤3.移出60ul结合反应液到每个检测孔和校正标准孔中(包括背景孔样本)步骤4.室温避光孵育1小时 在SoftMax Pro软件上设置模板,并在Spe
如何使用M5-多功能微孔板读板机和IMAP®-荧光偏振...(一)
如何使用M5 多功能微孔板读板机和IMAP® 荧光偏振检测平台进行激酶活性的分析?介绍 蛋白激酶在调节许多细胞反应过程时起着核心的作用。近年来已经成为癌症和其它许多疾病药物重要的作用靶点。IMA P是Molecular Devices 公司推出一种快速、非放射性的激酶检测技术,由于技术本身特点其
微孔板读板机和SimpleStep-ELISA试剂盒定量白细胞介素8
前言THP-1 是人外周血的单核细胞系,最初来源于急性单核细胞性白血病患者,常被用来体外研究巨噬细胞功能。 它通常属于悬浮细胞,当用 PMA 处理后可分化为贴壁生长的巨噬细胞。THP-1 能释放许多细胞因子,其中包括白细胞介素 -8(IL-8),一种能被许多类型细胞分泌的、在调节急性炎症反应
如何利用微孔读板机进行微量DNA和蛋白的高通量检测?
介绍在遗传学和分子生物学中,对核酸和蛋白进行定量是许多复杂实验必要的上游检测。虽然已有多种检测方法,但是最常用的仍然是紫外分光光度法。紫外分光光度法的原理是利用分子在固定波长范围吸收光和散射光,在朗伯比尔定律(方程式1)的基础上计算待测物质的浓度。这种方法还需要提前知道样品的摩尔消光系数和通路长度。
BMG微孔板测读器的10大应用
德国BMG LABTECH创建于1989年,是微孔板测读仪器领域中一家主导性开发商和制造商,提供许多测量方法以及集成的液体操作设备。BMG LABTECH在微孔板测读技术领域拥有多项首创记录:第一个包括FP在内的多功能微孔板测读器,第一个用于384孔板的激光测浊仪,第一个带有高性能化学发光能
细胞成像微孔板检测系统
细胞成像微孔板检测系统是一种用于生物学、农学、畜牧、兽医科学、基础医学领域的分析仪器,于2016年10月27日启用。 技术指标 孵育温度范围:室温以上5℃-65℃;CO2和O2控制范围:0-20%(CO2);1-19%(O2)控制分辨率:+0.1%(CO2和O2)稳定性:+0.2%at5%C
如何充分发掘化学发光微孔板读板机特点及优势呢?
众所周知,目前人类许多疾病的发生过程都或多或少与细胞因子变化有关系,如肿瘤、糖尿病、神经退行性疾病等等。细胞因子(Cytokine,CK)其实就是一类能在细胞间传递信息,可分为白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子、集落刺激因子、生长因子和趋化性细胞因子等六类。 正常情况下,细胞因子的表达和分泌受机体
应用SpectraMax微孔板检测系统和CyQUANT试剂盒检测细胞增殖2
设置仪器和软件参数步骤1:打开微孔板读板仪开关,打开SoftMaxPro软件并点击ProtocolLibrary中CellGrowth&Viability文件夹中的CyQUANTFluorescenceprotocol。步骤2:按表中所示参数设置仪器,此设置已在预配置的列表中。步骤3:使用Templ
应用SpectraMax微孔板检测系统和CyQUANT试剂盒检测细胞增殖1
简介用荧光方法定量细胞增殖可以简单快速的检测药物或其他实验处理方法对细胞生长的影响。Life Technologies公司的CyQUANT细胞增殖试剂盒是一个敏感性高、可重复并且简便的做荧光微孔板检测的方法。CyQUANT的GR染料可标记到细胞核上,通过荧光来计算细胞个数。DNA与RNA的比例会
应用SpectraMax微孔板检测系统和CyQUANT试剂盒检测细胞增殖3
RNA酶处理、基于DNA含量做标准曲线的CyQUANT实验法细胞增殖同样可以用DNA含量来评价并作出标准曲线。根据细胞曲线可计算出DNA含量,细胞裂解液经过RNA酶处理就排除了RNA对结果的干扰。在本应用说明中,列出了用DNA含量做标准曲线来定量细胞样品的设置步骤。准备试剂步骤1:制备1X细胞裂解液