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摘 要: 菌体经超声波处理后, 上清液首先用热变性作为纯化的第一步, 后经硫酸铵沉淀和Q 2Sepharo se fast flow阴离子交换柱, Phenyl2Sepharo se fast flow 疏水层析, Supero se12 凝胶排阻层析等步骤, 从P seud om onas 2262 菌体中获得电泳纯的海因酶, 酶活力回收15. 6% , 比活为18. 37U öm g, 提纯倍数为59. 3。点击这里进入下载页面：进入下载页面......阅读全文
凝胶过滤层析是一项重要的蛋白质纯化技术，又称为大小排阻、凝胶排阻、分子筛或凝胶过滤层析这种方法利用分级分离，而不需要蛋白质的化学结合，这就明显降低了因不可逆结合所致的蛋白质损失和失活。另外，可利用此法更换蛋白质的缓冲液或降低缓冲液的离子强度。在蛋白质纯化操作中何时使用凝胶过滤，还不能一概而论，有时纯
28) 首先我想问一下agarose和sepharose区别,我的理解是:都指琼脂糖,但agarose是未连接其他介质的,而sepharose是连接其他介质的,不知理解对不对?请指教!Glutathione-agarose(4%cross-linked beaded agarose)和Glutath
基因重组—层析法 实验方法原理 携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌BL21中，在 37℃，IPT
蛋白质表达、分离、纯化可以：（1）探索和研究基因的功能以及基因表达调控的机理；（2）供作结构与功能的研究；（3）作为催化剂、营养剂等。实验方法原理携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌BL21中，在 37℃，IPTG诱导下，超量表达携带有6个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基转移酶蛋白，该蛋白可用一种通过共
一、实验目的与原理生物大分子化合物的重要特征之一是具有与某些相对应的分子通过次级键或共价键专一结合的能力即亲和力。例如酶与抑制剂之间，抗原与抗体之间，结合的双方不仅是专一的，而且结合以后可以在不丧失生物活性的基础上用物理或化学的方法进行解离。根据这一特性，如果把具有亲和力的一对分子的某一方连接于水不
一、实验目的和内容目的：1. 通过本次实验的学习和操作，要求学生掌握离子层析的原理以及离子交换层析的操作方法；2. 掌握离子交换树脂的再生和保存；3．掌握比色法测定溶菌酶的酶活。内容：采用离子交换层析对实验二获得的初提液，进行进一步的分离纯化以得到较高纯度的溶菌酶。具体来说包括：1．离子交换层析分离
5. 正相色谱与反相色谱 正相色谱是指固定相的极性高于流动相的极性，因此，在这种层析过程中非极性分子或极性小的分子比极性大的分子移动的速度快，先从柱中流出来。 反相色谱是指固定相的极性低于流动相的极性，在这种层析过程中，极性大的分子比极性小的分子移动的速度快而先从柱中流出。&
（二）乳过氧化物酶法（LPO） 本法反应温和，对抗原、抗体免疫活性影响小，已被广泛应用。缺点是标记率较低，一般为20～40%。 1．原理此法是利用乳过氧化物酶（Lactoperoxidase）有促进微量过氧化氢对125I-的氧化作用，生成125I+，并标记在多肽、蛋白质酪氨酸分子上。 2．方法
摘要 : 随着分子生物学的发展，越来越多的科研人员熟练掌握了分子生物学的各种试验技术，并研制成套试剂盒，使基因克隆表达变得越来越容易。但分子生物学的上游工作往往并非是最终目的，分子克隆与表达的关键是要拿到纯的表达产物，以研究其生物学作用，或者大量生产出可用于疾病治疗的生物制品。相对与上游工
实验方法原理 携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌BL21中，在 37℃，IPTG诱导下，超量表达携带有6个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基转移酶蛋白，该蛋白可用一种通过共价偶连的次氨基三乙酸（NTA）使镍离子（Ni2+）固相化的层析介质加以提纯，实为金属熬合亲和层析（MCAC）。蛋白质的纯化程
基本方案 实验方法原理 实验材料
实验材料PK-120试剂、试剂盒Q-Sepharose 树脂S-Sepharose 树脂Hudroxyapatite 羟基磷灰石Sephacryl S－200 凝胶赖氨酸内切酶乙腈三氯醋酸仪器、耗材Applied Biosystems model 477A 气相蛋白质测定仪Applied Biosy
实验方法原理 实验材料 PK-120试剂、试剂盒 Q-Sepharose 树脂S-Sepharose 树脂Hudroxyapatite 羟基磷灰石Sephacryl S－200 凝胶赖氨酸内切酶乙腈三氯醋酸仪器、耗材 Applied Biosystems model 477A 气相蛋白质测定仪A
3. 2 复性及重折叠经过初步纯化的RRhP I 通过Sephadex G225柱层析脱尿素并转换缓冲液为50 mmo löL 甘氨酸2N aOH, pH9. 5。层析图谱(见图3) , 有2 个层析峰,峰2 主要为折叠趋于正确的单体RRhP I, 收集峰2。进行SDS2PA GE 分析。结
本实验采用猪胰蛋白酶的天然抑制剂—鸡卵类粘蛋白作为配基．从猪胰脏的粗提液中分离纯化胰蛋白酶。鸡卵类粘蛋白是一种专一性很强的胰蛋白酶的抑制剂，对猪和牛的胶蛋白酶有很强的抑制作用。而对胰凝乳蛋白酶无抑制作用。在pH7.6~8.0的范围内，猪或牛胰蛋白酶能牢固地吸附在鸡卵类粘蛋白上，在 PH2.5
沉淀法沉淀法也称溶解度法。其纯化生命大分子物质的基本原理是根据各种物质的结构差异性来改变溶液的某些性质，进而导致有效成分的溶解度发生变化。1、盐析法盐析法的根据是蛋白质在稀盐溶液中，溶解度会随盐浓度的增高而上升，但当盐浓度增高到一定数值时，使水活度降低，进而导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和，水化膜逐
试剂、试剂盒 扩增缓冲液 DNA 聚合酶 DNaseI 限制性内切核酸酶 ATP 链霉亲和素-磁珠结
本方案使用克隆在 BAC 载体上的一段 500kb 的人基因组 DNA 连续序列，直接筛选与其互补的的 cDNA。但本方法也可适用于任意大小的基因组靶 DNA。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）上册，作者：黄培堂。试剂、试剂盒扩增缓冲液DNA 聚合酶 DNaseI限制性内切核酸酶ATP链霉亲和素
试剂、试剂盒 扩增缓冲液DNA 聚合酶 DNaseI限制性内切核酸酶ATP链霉亲和素-磁珠结合缓冲液T4DNA 连接酶热稳定 DNA 聚合酶琼脂糖凝胶BACDNA缺口平移缓冲液杂交液平末端 cDNACot1 基因组 DNA胞浆 poly(A)+RNAdNTP 溶液DNA 分子质量标志物寡
实验步骤一、膜的制备从细胞或组织中分离质膜是纯化膜蛋白的第一步。由于缺少能有效分离去污剂增溶的膜蛋白的生化方法，因此在质膜成分纯化上投人一些时间会对后续步骤的结果有利。大多数膜蛋白的含量较低, 因此选择易于大量获取并能高表达目的膜蛋白的组织或细胞系就很重要。最近，人们对于将细胞表面蛋白质作为鉴定不同
实验步骤 一、膜的制备 从细胞或组织中分离质膜是纯化膜蛋白的第一步。由于缺少能有效分离去污剂增溶的膜蛋白的生化方法，因此在质膜成分纯化上投人一些时间会对后续步骤的结果有利。 大多数膜蛋白的含量较低, 因此选择易于大量获取并能
实验概要本实验利用葡聚糖凝胶柱层析对PPO粗酶液进行了纯化。实验原理1. 葡聚糖凝胶SephadexG-200凝胶柱层析利用大分子不能进入凝胶颗粒内部最先流出柱外，而小分子物质进入凝胶颗粒内部，流速慢而最后流出柱外，凝胶层析法能将不同分子大小的物质分离开。(G-200能分离800-80000D分子量
实验概要本实验介绍了溶菌酶（lysozyme）的制备及其性质测定的原理和操作方法。实验原理溶菌酶（lysozyme）是由弗莱明在1922年发现的，它是一种有效的抗菌剂，全称为 1，4-β-N-溶菌酶，又称作粘肽N-乙酰基胞壁酰水解酶或胞壁质酶。活性中心为天冬氨酸52和谷氨酸35，是一种
实验概要本实验构建了pⅧ噬菌粒库，主要包括：载体的准备，插入片段的准备，连接插入片段与BstⅪ消化的p8V5载体及扩增与储存。主要试剂p8V5噬菌粒载体(AHymaxlnc)LB氨苄青霉素培养基(1％蛋白胨，0，5％酵母提取物， 0.5％ NaCl，100ug/m1氨苄青霉素)BstⅪ限制性内切酶(
1、超速离心法 此法分离和纯化抗原的原理是利用各颗粒在梯度液中沉降速度的不同，使具有不同沉降速度的颗粒处于不同密度梯度层内，达到彼此分离的目的。常用的密度梯度介质有蔗糖、甘油、CsCl等。 用超速离心或梯度密度离心分离和纯化抗原时，除个别成分外，极难将某一抗原成分分离出来，故只用
11.纯化------中草药有效成分 中药的化学成分极其复杂。传统中药多是煎熬后服用，有效成份多较为亲水，包括生物碱、黄酮、蒽醌、皂甙、有机酸、多糖、肽和蛋白质。灵活及综合性地利用多种层析方法。如离子交换、分子筛、反相层析，更容易分离到单一活性成分。Sephadex LH-20葡聚糖凝胶同时
实验步骤 一、设计具有标签的蛋白质时需要考虑的因素 亲和力和可溶性的选择 在大肠埃布氏菌中生产外源蛋白时面临两个挑战: 一? 是所用蛋白质表达系统的表达水平很低; 二是所表达的蛋白质被错误折叠进不溶性的聚集体—包涵体中。弱启
染料配基层析不是真正意义的亲和层析，因为它们并不是与它们结合的蛋白质的天然配基。然而染料柱能很好地结合蛋白质，并能导致满意地纯化蛋白质。事实上，有时这种结合甚至比正常的配基更紧。染料配基柱通常是廉价和稳定的，并且具有较高的蛋白质结合容量。所以染料配基层析能作为蛋白质纯化中有价值的步骤之一。来源：《蛋
目前动物用单抗，在动物疫病诊断和检疫、妊娠检测、性别鉴定等方面有广泛的应用，大多以诊断试剂(盒)的形式提供，其中核心试剂为标记的单抗。下面将介绍最常用的几种标记技术。1．酶标记(1)辣根过氧化物酶(HRP)标记辣根过氧化物酶(HRP)标记单抗和多克隆抗体的常用方法是过碘酸钠法。其原理是HRP的糖基用
一．菌体的收集和破碎用50 ml离心管分别收集诱导表达后的培养物，8000 rpm 4℃离心10 min。沉淀用适量的超声破菌缓冲液重悬。【备注】超声破菌缓冲液（20 mmol/L Tris-HCl pH8.0、0.5 mol/L NaCl、1 mmol/L EDTA、1 mg/mL溶菌酶）重悬后的