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蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法： 是根据载体的遗传特征筛选重组子，如α-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点（MCS），它并不破坏读框，但可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能，这种载体适用于可编码β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主细胞。因此，宿主和质粒编码的片段虽都没有酶活性，但它们同时存在时，可形成具有酶学活性的蛋白质。这样，lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补，称为α-互补。由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落，因而易于识别。然而，当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地导致无α-互补能力的氨基端片段，使得带有重组质粒的细菌形成白......阅读全文
2. 连接产物的转化⑴ 取100μl贮存于-70℃钙化菌，冰浴化开；⑵ 加入适量连接产物（一般不超过10μl，轻轻混匀，冰浴20min；⑶ 于42℃热休克90s，迅速转移至冰浴中，继续冰浴2-3min；⑷ 加入LB液体培养基200μl，于37℃缓摇孵育45min；⑸ 将培养物适量涂于1.5%琼脂LB
目的基因的亚克隆所谓亚克隆就是对已经获得的目的DNA片段进行重新克隆，其目的在于对目的DNA进行进一步分析，或者进行重组改造等。 亚克隆的基本过程包括：(1)目的DNA片段和载体的制备；(2)目的DNA片段和载体的连接；(3)连接产物的转化；(4)重组子筛选。&n
实验方法原理 亚克隆的基本过程包括：(1)目的DNA片段和载体的制备；(2)目的DNA片段和载体的连接；(3)连接产物的转化；(4)重组子筛选。
目的基因的亚克隆可应用于：（1）进一步分析目的基因；（2）基因重组。实验方法原理亚克隆的基本过程包括：(1)目的DNA片段和载体的制备；(2)目的DNA片段和载体的连接；(3)连接产物的转化；(4)重组子筛选。实验材料E.coli JM109试剂、试剂盒牛肉膏胰蛋白胨NaCl微量细菌基因组抽提试剂盒
根据载体 的遗传特征筛选重组子，如α-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段，其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点(MCS)，它并不破坏读框，但可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而
四、连接产物的转化1.感受态细胞的制备⑴ 保存于-70℃的DH5α（或其他菌种）用接种环划菌于1.5%琼脂平板上，37℃恒温倒置培养至单菌落出现（约14-16 hr）。⑵ 挑取单菌落，接种于2.0ml LB液体培养基中，37℃恒温，250g振荡培养过夜（约12hr）。⑶ 取0.5ml 过夜培养液，接
根据载体的遗传特征筛选重组子,如a-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段， 中有β半乳糖苷酶基因(acZ)的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。 在这个编码区中插入了一个多克隆位点(MCS),它并不破坏读框，但可使少数几个氨基酸插入到β半乳糖苷酶的氨基端而
实验中，通常蓝白筛选是与抗性筛选一同使用的。含X-gal的平板培养基中同时含有一种或多种载体所携带抗性相对应的抗生素，这样，一次筛选可以判断出：未转化的菌不具有抗性，不生长；转化了空载体，即未重组质粒的菌，长成蓝色菌落；转化了重组质粒的菌，即目的重组菌，长成白色菌落。目前很多实验室省去蓝白斑筛选的步
单位定义 限制性内切酶的一个活性单位是指，在50μl 的反应体系里，采用随酶提供的 NEBuffer，用1个小时的时间，彻底消化1μg底物DNA所需要的酶量。 酶切反应应在带盖的Eppendorf 管中进行，选用技术数据卡上所标明的适宜温度。在确定酶活性之前，浓缩的酶应该用推荐的贮存液稀
一、简介X-Gal在β-半乳糖苷酶的催化下水解后呈蓝色，因此常用于转基因筛选试验中，如蓝白斑筛选或β-半乳糖苷酶的原位染色检测实验。蓝白斑试验中主要根据菌落呈现的颜色即可简单的挑选出哪些是转化子。分子 式为C14H15BrClNO6，分子量为408.63，CAS Number 7240-90-6。X
一、简介 X-Gal在&beta；-半乳糖苷酶的催化下水解后呈蓝色，因此常用于转基因筛选试验中，如蓝白斑筛选或&beta；-半乳糖苷酶的原位染色检测实验。蓝白斑试验中主要根据菌落呈现的颜色即可简单的挑选出哪些是转化子。 分子 式为C14H15BrClNO6，分子量为408.63，
一、简介X-Gal在β-半乳糖苷酶的催化下水解后呈蓝色，因此常用于转基因筛选试验中，如蓝白斑筛选或β-半乳糖苷酶的原位染色检测实验。蓝白斑试验中主要根据菌落呈现的颜色即可简单的挑选出哪些是转化子。 分子 式为C14H15BrClNO6，分子量为408.6
单位定义限制性内切酶的一个活性单位是指，在50μl 的反应体系里，采用随酶提供的 NEBuffer，用1个小时的时间，彻底消化1μg底物DNA所需要的酶量。 酶切反应应在带盖的Eppendorf 管中进行，选用技术数据卡上所标明的适宜温度。在确定酶活性之前，浓缩的酶应该用推荐的贮存液稀释
1.蛋白酶K：能水解消化蛋白质，特别是与DNA结合的组蛋白。再尿素和SDS中稳定。一般工作浓度是50—100μg/ml，推荐反应缓冲液：50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2。2.SDS:十二烷基硫酸钠. 溶解细胞膜上的脂类与蛋白质，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜，并解离细胞中
1.蛋白酶K：能水解消化蛋白质，特别是与DNA结合的组蛋白。再尿素和SDS中稳定。一般工作浓度是50—100μg/ml，推荐反应缓冲液：50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2。2.SDS:十二烷基硫酸钠. 溶解细胞膜上的脂类与蛋白质，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜，并解离细胞中
二、噬菌体载体作为细菌寄生物的噬菌体，大多数具有编码多种蛋白质的基因，能利用宿主细胞的蛋白质合成体系，进行生长和增殖。构建的噬菌体载体，以λ噬菌体、M13和粘粒最为常用。㈠ λ噬菌体载体野生型λDNA是一种基因组为4.8 kb的线性双链DNA，全部序列已知，共编码50多个基因。其中约一半基因参与
实验步骤 一、杆状病毒表达载体 最简单的经典杆状病毒表达载体是一个重组的杆状病毒，其基因组含有一段外源核酸序列，通常为编码目标蛋白质的dDNA，在多角体蛋白启动子控制下进行转录。这个嵌合的基因由多角体蛋白启动子和外源蛋白编码序列组成
此步细节：1：在使用注射器时，一定要用力均匀且轻，如使用暴力，会将小柱内的薄膜挤破，失去作用。2：乙酸铵、糖原不需新鲜配制，糖原配好后放在-20度保存，乙酸铵室温即可，因为这样浓度的乙酸铵非常难溶，一旦放在4度，取出用时也会有很多溶质析出。3：异丙醇、70%乙醇都不需要新鲜配制，但如果用量大，现场配
第三部分 修饰后DNA纯化回收EP管如无特别说明均为高压蒸汽灭菌的。1. 将移液器枪头伸入石蜡油层下，先轻轻加压使其中一小段石蜡油排出，然后吸取混合液至一洁净1.5mlEP管中。2：以下使用Promega Wizard Cleanup DNA纯化回收系统（Promega，A7280）1）70℃水浴预
检测原理：酵母双杂交系统（Yeast two-hybrid assay）是用于体内研究蛋白相互作用的一种非常便利的工具，常用的如GAL4为基础的系统，使用酵母转录因子GAL4来检测转录激活后的蛋白相互作用。某些转录因子（如GAL4）由两个可以分开，功能上相互独立的结构域组成，N端有一个147个氨
1、全皿计数：全自动菌落计数、荧光菌落识别、显色致病菌识别、蚀斑、噬菌斑计数、螺旋平板计数AMES分析；2、特征菌筛选：菌落形态筛选、彩色菌落分类、蓝白斑筛选、菌落特征数字化；3、多区域统计：SBA、OPKA、多孔板克隆计数；4、霉菌研究：菌丝生长速率一键测量、平皿对峙培养分析、防霉检测；
重组质粒的连接、转化及筛选主要用于获得含有目的基因连接的重组子。实验方法原理用特定的限制性内切酶切割载体DNA和外源DNA片段并进行纯化，于体外使两者相连接(若用T-载体，可直接用纯化的PCR产物进行连接)，转化宿主细菌后，利用蓝白斑筛选原理对重组子进行挑选。由于载体上带有Amp'和lacZ
重组质粒的连接、转化及筛选主要用于获得含有目的基因连接的重组子。实验方法原理用特定的限制性内切酶切割载体DNA和外源DNA片段并进行纯化，于体外使两者相连接(若用T-载体，可直接用纯化的PCR产物进行连接)，转化宿主细菌后，利用蓝白斑筛选原理对重组子进行挑选。由于载体上带有Amp'和lacZ
实验方法原理 Northwestern 筛选蛋白表达文库的方法是通过构建 IPTG 可诱导的融合蛋白表达文库（融合蛋白的 N 端由载体序列编码，C 端由克隆到载体的 cDNA 文
摘要： 本文主要介绍了各种感受态细胞的区别、用途和特征. Xl1-Blue菌株 基因型： endA1 gyrA96（nalR） thi-1 recA1 relA1 lac glnV44 F&
Northwestern 筛选蛋白表达文库的方法是通过构建 IPTG 可诱导的融合蛋白表达文库（融合蛋白的 N 端由载体序列编码，C 端由克隆到载体的 cDNA 文库编码），进而诱导融合蛋白表达，并将蛋白质固定于硝酸纤维素滤膜上，以标记的 RNA 探针进行筛选，最终获取能与靶 RNA 分子特异性结合
实验方法原理 Northwestern 筛选蛋白表达文库的方法是通过构建 IPTG 可诱导的融合蛋白表达文库（融合蛋白的 N 端由载体序列编码，C 端由克隆到载体的 cDNA 文库编码），进而诱导融合蛋白表达，并将蛋白质固定于硝酸纤维素滤膜上，以标记的 RNA 探针进行筛选，最终获取能与靶
【实验目的】1.掌握质粒提取的基本方法的原理；2.学习和掌握限制性内切酶的使用方法。【实验原理】重组克隆的筛选和鉴定是基因工程中的重要环节之一。不同的克隆载体和相应的宿主系统，其重组克隆的筛选和鉴定方法不尽相同。从理论上说，重组克隆的筛选是排除自身环化的载体、未酶解完全的载体以及非目的DNA片断插入
一、RNA 制备 模板mRNA 的质量直接影响到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的结构特点,容易受RNA 酶的攻击反应而降解,加上RNA 酶极为稳定且广泛存在,因而在提取过程中要严格防止RNA 酶的污染,并设法抑制其活性,这是本实验成败的关键。所有的组织中均存在RNA 酶,人
材料、设备及试剂 一、 材料 外源DNA片段: 自行制备的带限制性末端的DNA溶液,浓度已知; 载体DNA: T-vector(Ampr ,lacZ),自行提取纯化,浓度已知; 宿主菌: E. coli DH5α,或JM系列等具有α-互补能力的菌株。 二、 设备 恒温摇床，台式高速离心机，恒