贴壁／悬浮细胞及组织切片进行Hoechst染色的方法步骤
Hoechst染色方法1．贴壁细胞1) 取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用细胞培养PBS或0.9%NaCl等溶液洗涤三遍，再用细胞培养液洗涤一遍。将盖玻片置于六孔板内，种入细胞培养过夜，使约为50%-80%满。2) 刺激细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入0.5ml固定液，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。3) 去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。4) 加入0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分钟。也宜用摇床，或手动晃动数次。5) 用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。6) 滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，尽量避免气泡。使细胞接触封片液，切勿弄反。7) 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。......阅读全文
小鼠组织切片免疫组化实验步骤
材料二甲苯 酒精（100％，95％） EDTA抗原修复工作液（pH8.0，稀释50倍使用） 0.5M Tris-NaCl (TBS) pH7.4（稀释10倍使用） DAB显色液（临用前配制：试剂盒A、B、C各50ul，于1ml水中混匀）。方法1. 石蜡切片置60℃烘箱中烘烤过夜 2.
小鼠组织切片免疫组化实验步骤
实验概要免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学
小鼠组织切片免疫组化实验步骤
实验概要免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学
脑组织冰冻切片的步骤和注意事项
1.固定。大鼠或小鼠灌注取脑，取脑后用多聚甲醛浸泡固定，即能达到冲洗的目的，又不损害组织。2.脱水。先后用15%，20%，30%的PB蔗糖溶液 进行脑组织梯度脱水，脑组织沉下去就是脱水好了。3.冰冻切片，推荐瑞沃德冷冻切片机。取出脑组织，用OCT胶包埋，一层层的包埋，注意:不能有气泡，否则营销切片；
用基于荧光的方法来评价细胞的增殖
简介体外监测细胞的增殖对于基础研究和应用研究都极有价值并有潜力应用在临床领域。 3H-thymidine 或 5-bromo-deoxyuridine (BrdU, 胸苷的类似物 ) 掺入法是确定培养细胞的增值率的传统方法，这主要是因为几乎没有更方便的替代方法。因而人们投入了大量的精力来开发一种快速
LSCM组织切片的细胞核标记
组织切片的细胞核标记目前仍然采用 DAPI(4，6-联脒-2-苯基吲哚，ex 359 nm / em 461 nm)，其特点是专一性强、灵敏度高、稳定性好、毒性小，且可被405nm激光器有效地激发，获取明亮的核标记荧光图像。PI(碘化丙啶 ex 536nm / em 617nm)也可以用于核标记，因
脂肪及结缔组织的染色方法
实验概要掌握脂肪及结缔组织的染色方法。脂肪的染色方法：脂肪染色常用脂溶性色素，如苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ、油红O等。这类染料既能溶于有机溶剂如乙醇、丙酮，又能溶于脂肪。由于该类染料在脂质中溶解度较大，染色时染料便从染液中转移到被染的脂质中去，使脂质呈染液的颜色。主要用于显示组织脏器的脂肪变性和类脂质的异常沉着
脂肪及结缔组织的染色方法
实验步骤脂肪的苏丹Ⅲ(Ⅳ)染色方法：1) 冰冻切片用70％乙醇漂洗，不超过30s。2) 切片入苏丹Ⅲ(Ⅳ)染液中3~15min或延长至1h。3) 新50％~70％乙醇分化，直至洗去切片上的浮色为止，蒸馏水洗。4) 用稀释1倍的明矾苏木精浅染核1min或稍长。5) 用滤纸将切片及周围的水分吸干。6)
为什么有的细胞要贴壁培养，有的要悬浮培养
这跟细胞的来源以及原来的生存环境有一定关系，比如上皮组织来源的细胞一般都是贴壁培养，而血液系统来源的细胞一般为悬浮培养。当然也有些处于特殊目的将贴壁培养的细胞驯化为悬浮培养。
免疫荧光组织（细胞）化学染色方法
免疫荧光组织（细胞）化学染色方法：直接法基本原理 将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高，非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低；而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。 试剂与仪器 磷酸盐
免疫荧光组织（细胞）化学染色方法
一、其它荧光抗体染色方法1、膜抗原荧光抗体染色法本法应用直接法或间接法的原理和步骤，可对活细胞在试管内进行染色，常用于T和B细胞、细胞培养物、瘤细胞抗原和受体等的检查和研究，阳性荧光主要在细胞膜上。FACS即采用此法原理。2、双重染色法在同一标本上有两个抗原需要同时显示（如A抗原和B抗原），A抗原的
免疫荧光组织（细胞）化学染色方法
免疫荧光组织（细胞）化学染色方法：直接法基本原理 将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高，非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低；而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。 试剂与仪器 磷酸盐
荧光免疫染色和DAPI染色实验步骤
免疫染色实验方法和步骤免疫染色(immunol staining)包括免疫荧光(immunol fluorescence)、免疫组化(immunol histochemistry)、免疫细胞化学(immunol cytochemistry)等，可以参考如下步骤进行操作。 1. 样品准备(Sample
IHC全攻略2：如何制备样品
对于每一项IHC/ICC研究，组织和细胞样本的制备都不可掉以轻心。为了方便孵育，整个组织必须被切成超薄(5-10 μm)的切片，或切成小块用于整体免疫组化(whole mount IHC)。对于ICC实验，在开始染色步骤之前，细胞必须附着在显微镜载玻片或盖玻片上。样本制备也与固定方法密切
贴壁细胞的传代培养步骤
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基
常用的几种细胞凋亡检测方法详细步骤（一）
细胞凋亡与坏死是两种完全不同的细胞凋亡形式，根据死亡细胞在形态学、生物化学和分子生物学上的差别，可以将二者区别开来。细胞凋亡的检测方法有很多，下面介绍几种常用的测定方法。第一种 细胞凋亡的形态学检测根据凋亡细胞固有的形态特征，人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。1 光学显微镜和倒置显微镜
贴壁细胞传代方法
多数细胞系和原代细胞都会以一种单层的形式生长（单层细胞）或者覆盖在玻璃或经处理的塑料物体表面。为了保持细胞的健康与活跃增殖，通常需要对细胞进行有规律的传代。最常见的传代方法是使用蛋白酶如胰酶或胶原酶破坏细胞间以及细胞与培养介质间的连接。当细胞被解离成单细胞悬液时，再将它们稀释并分发至新的培养容器中。
原代贴壁细胞吉姆萨染色法
原代贴壁细胞吉姆萨染色法染液制备：1. 称取0.5g吉姆萨粉和22ml甘油；2. 取少量甘油与吉姆萨粉在研钵内充分混合，研磨至无颗粒；3. 将剩余的甘油倒入研钵，于56℃保温2h；4. 加入33ml纯甲醇混匀，即为吉姆萨母液，将其保存于棕色试剂瓶内；5. 取9份pH6.80—7.38的Sorense
原代贴壁细胞吉姆萨染色法
原代贴壁细胞吉姆萨染色法染液制备：1. 称取0.5g吉姆萨粉和22ml甘油；2. 取少量甘油与吉姆萨粉在研钵内充分混合，研磨至无颗粒；3. 将剩余的甘油倒入研钵，于56℃保温2h；4. 加入33ml纯甲醇混匀，即为吉姆萨母液，将其保存于棕色试剂瓶内；5. 取9份pH6.80—7.38的Soreen缓
组织学——组织切片
· Histological techniques (William H. Heidcamp)Very detailed guide to histological techniques, like fixation, dehydration, embedment and subs
细胞凋亡检测：形态学特征的检测方法
根据调亡形态学特征的检测方法 一、普通光学显微镜观察方法 1 ）苏木素－伊红染色（ HE 染色法） 石蜡组织切片的 HE 染色1． 取材组织块，经固定后，常规石蜡包埋， 4 μ m 切片。2． 切片常规用二甲苯脱蜡，经各级乙醇至水洗：二甲苯（ I ） 5min →二甲苯（Ⅱ） 5min → 100％
细胞凋亡检测：形态学特征的检测方法
根据调亡形态学特征的检测方法一、普通光学显微镜观察方法1）苏木素－伊红染色（HE染色法）石蜡组织切片的HE染色1．取材组织块，经固定后，常规石蜡包埋，4μm切片。2．切片常规用二甲苯脱蜡，经各级乙醇至水洗：二甲苯（I）5min→二甲苯（Ⅱ）5min→100％乙醇2min→95％的乙醇1min→80％
石蜡切片(paraffin－sections)免疫组化染色步骤
1、载玻片的处理：抗原修复过程中,由于高温、高压、辐射等诸多因素的影响，极易造成脱片。这里选用ZLI-9001 APES、ZLI- 9003 HistogripTM或ZLI-9005 Poly-L-Lysine等几种试剂，对已清洗的载玻片进行处理。具体方法如下：（1）APES：现用现配。将洗净的玻片
悬浮细胞的分离方法
组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，zui简单的方法是采用1000r/min的低速离心10分钟，若悬液量大，可适当延长离心时间，但速度不能太高，延时也不能太长，以避免挤压或机械损伤细胞，离心沉淀用无钙、镁PBS洗两次，用培养基洗一次后，调整适当细胞浓度后再分瓶培养，若选用悬液中某些细胞，
荧光显微镜技术原理和方法
)训练目的 学习荧光显微镜的使用；了解荧光显微镜技术原理和方法。2)实验材料 生物素标记的一dUTP(Biotin-dUTP)或地高辛标记的duUTP(Digoxingening—11一dullP)1 nmol／μL,TdT酶(25 U／μL)，反应缓冲液，洗涤缓冲液，异硫氰酸荧光素(F
间接染色步骤（细胞表面染色）
实验概要间接标记需要两个孵育步骤，先与一抗再与合适的第二抗体孵育，二抗（不是一抗）结合了荧光染料（FITC、PE、Cy5 等）。请注意这是一个普遍的程序，您可以根据自己的使用情况进行调整。实验步骤1. 收集并洗涤细胞，然后确定细胞总数。细胞通常在聚苯乙烯的圆底 12 x 75 mm2 Falcon
原代悬浮细胞吉姆萨染色法
原代悬浮细胞吉姆萨染色法涂片法：1. 用含有5%—10%血清的等渗液将培养的细胞调制成密度为106个/ml的细胞悬液；2. 将1滴细胞悬液滴于一张载玻片的一端，用另一块干净的载玻片，按照血液涂片法将细胞铺展于载玻片上；3. 载玻片在空气中干燥后，再用甲醇固定；4. 对涂有细胞的载玻片进行染色；5.
原代悬浮细胞吉姆萨染色法
原代悬浮细胞吉姆萨染色法涂片法：1. 用含有5%—10%血清的等渗液将培养的细胞调制成密度为106个/ml的细胞悬液；2. 将1滴细胞悬液滴于一张载玻片的一端，用另一块干净的载玻片，按照血液涂片法将细胞铺展于载玻片上；3. 载玻片在空气中干燥后，再用甲醇固定；4. 对涂有细胞的载玻片进行染色；5.
消除微生物污染
实验方法原理通过冲洗单层培养物或通过离心重悬非贴壁细胞，以高浓度抗生素清洗培养物数次，然后将培养物传代，用加抗生素的培养基传三次，再用不加抗生素的培养基传三次，每次传代后都要检测是否污染。实验材料DBSS试剂、试剂盒高浓度抗生素培养液仪器、耗材用于传代培养的材料带有40×或60×物镜的相差显微镜用于
消除微生物污染
实验方法原理 通过冲洗单层培养物或通过离心重悬非贴壁细胞，以高浓度抗生素清洗培养物数次，然后将培养物传代，用加抗生素的培养基传三次，再用不加抗生素的培养基传三次，每次传代后都要检测是否污染。实验材料 DBSS试剂、试剂盒 高浓度抗生素培养液仪器、耗材 用于传代培养的材料带有40×或60×物镜的相差显