病毒包装技术——病毒与非病毒载体
基于转化医学的研究理念，锐赛知道，每一项临床疾病的致病源头或表象最初都是由个体体内某个基因的突变导致了。所以每一项临床疾病的研究，整体课题项目开展的最初源头也必须从一个基因开始。锐赛在多年的转化医学研究中，在于各个临床医师的整体项目合作中，探讨得出的不仅是转化医学临床研究课题的整体思路，一般实验方向，更有各个环节单项具体实验的操作纪要。现将整体实验的一般实验方案，各单项技术的实验方法在此分享给大家，不仅是为了大家实验室的需要更是为了进一步提高转化医学的效率，为病患之需而行。对于整体项目的一般实验思路：基因-基因化学合成/调取-载体构建-病毒包装-稳转株构建-细胞功能实验-动物实验/临床样本分析-数据分析统计，研究病毒包装技术1——病毒与非病毒载体病毒载体的优势特点病毒载体来源于对病毒基因组进行操作和改造，消除致病性基因，保留其感染活性，使之成为具有生物活性的基因载体。使它携带上外源基因并被包装成病毒颗粒就构成了基因导入系统 （g......阅读全文
病毒包装技术——腺病毒包装流程
1. 细胞的准备a) 复苏293细胞，传代培养1-2代，调整好细胞状态，务必4代以内完成转染实验。b) 在转染前1天，用胰酶消化传代，将5×105细胞接种于6孔板或87.5px皿中，加入2ml完全培养基（DMEM+10%FBS+1%P/S+1%Glutamax），摇匀后置于5% CO2、95% 湿润
病毒包装技术——病毒包装实验经验总结
第一，细胞状态、载体系统、目的基因对病毒包装影响(基因大小、序列情况、蛋白功能毒性等）是三个主要影响病毒质量的因素。第二，细胞状态需要有丰富的细胞培养经验来判断，比如包装或转染感染前一定要重视细胞干净细微污染与否、饱满立体感是否好、铺板均匀细胞密度适中否等性状。另外转染时细胞的密度要十分注意，一般在
病毒包装技术——腺相关病毒(AAV)包装（二）
2.3 蛋白质分析 为了分析AAV Rep和Cap蛋白质表达，按照2.2部分所述进行质粒转染。转染后48小时，将培养物刮到冷PBS/Mg(PBS含有5mM MgCl2)，细胞低速离心沉淀收获。细胞沉淀在冰上用200ml STM-NP缓冲液(25mM蔗糖,10mM Tris-HCl，pH8
病毒包装技术——腺相关病毒(AAV)包装（一）
摘要:腺相关病毒(AAV)是一种人细小病毒， 因为能作为一种基因治疗载体而受到广泛关注。目前大多数生成rAAV的实验方案需要共转染一个载体质粒和一个表达病毒复制和结构基因的包装质粒到腺病毒(Ad)感染的培养细胞中。但是也可以通过新的辅助质粒(pH3和pH5)，排除了Ad共转染的需求。辅助质粒表达AA
病毒包装技术6——腺病毒包装流程介绍
1. 细胞的准备 a) 复苏293细胞，传代培养1-2代，调整好细胞状态，务必4代以内完成转染实验。 b) 在转染前1天，用胰酶消化传代，将5×105细胞接种于6孔板或87.5px皿中，加入2ml完全培养基（DMEM+10%FBS+1%P/S+1%Glutamax），摇匀后置于5%
病毒包装技术——慢病毒载体构建及包装流程
一、实验流程（1和2为并列步骤）慢病毒过表达质粒载体的构建设计上下游特异性扩增引物，同时引入酶切位点，PCR(采用高保真KOD酶，3K内突变率为0%)从模板中（CDNA质粒或者文库）调取目的基因CDS区（coding sequence）连入T载体。将CDS区从T载体上切下，装入慢病毒过表达质粒载体。
病毒包装技术7——腺相关病毒(AAV)包装介绍
锐赛小课堂技术篇0702-113 摘要: 腺相关病毒(AAV)是一种人细小病毒， 因为能作为一种基因治疗载体而受到广泛关注。目前大多数生成rAAV的实验方案需要共转染一个载体质粒和一个表达病毒复制和结构基因的包装质粒到腺病毒(Ad)感染的培养细胞中。但是也可以通过新的辅助质粒(pH
病毒包装技术8——病毒包装实验经验总结介绍
锐赛小课堂常识篇0703-115 病毒包装实验经验总结 第一，细胞状态、载体系统、目的基因对病毒包装影响(基因大小、序列情况、蛋白功能毒性等）是三个主要影响病毒质量的因素。 第二，细胞状态需要有丰富的细胞培养经验来判断，比如包装或转染感染前一定要重视细胞干净细微污染与否、饱满立
慢病毒包装实验
实验材料 病毒试剂、试剂盒 无血清培养基脂质体胰酶含血清的培养基DMEM仪器、耗材 EP管6孔板CO2培养箱高速离心机-80°C冰箱实验步骤 以六孔板中的1孔为例，每个样品需要1×106个293T细胞。 1. 取1.5ml灭菌EP管，加入1.5μg包装混合质粒和0.5μg表达质粒以及250μl的无血
慢病毒包装实验
慢病毒载体包装之后成为假病毒颗粒后，可用于：（1）感染原代培养细胞；（2）制备稳定表达/沉默特定基因的单克隆细胞株；（3）in vivo的基因操作、转基因动物，特别是转基因大鼠的制备。实验方法原理慢病毒是反转录病毒的一种，具有反转录病毒的基本结构和特性：整合入宿主细胞基因组，长期表达，可用于转基因动