核转位筛选实验（二）
利用交互式的灵活的软件分析数据MetaXpress® 软件中的Translocation-Enhanced 应用模块可以被用来鉴定核中以及定量与细胞核相关的其余部分中ß-catenin-EGFP 的量（图3）。对细胞核区间的划分来源于被Hoechst 核染料染色的区域。然后用第二种波长的光（EGFP）将细胞划分出新的区间，这一区间的大小和宽度可以满足特异性的检测。这保证了每个区间都有足够的绿色荧光强度，如细胞核，细胞质和细胞膜都可以进行定量分析。交互式模块随着参数的调整可以及时的反馈信息，这也使我们能对每个特定的检测结果进行准确分析。 图3 应用Translocation-Enhanced 分析模块，根据核染色确定核区域及细胞质区域（上）。MetaXpress 软件支持自由调整设置参数，从而精确圈定出各组分的范围，通过评分得到阳性或阴性结果（下）。 MetaXpress®软件的Translocatio......阅读全文
筛选构建于λ噬菌体载体的表达文库实验（二）
方法λ噬菌体的平板培养1. 取适当大肠杆菌菌株的单克隆进行接种，按第 2 章方案 1 介绍的方法制备用于铺平板的培养细菌。2. 假定每个 90 mm 平皿和 150 mm 平皿分别可长出 2X104 个和 5X104 个噬菌斑，计算筛选文库所需平皿数。对应每个平皿准备一个无菌试管（13 mm
反义RNA的IS10转位作用的抑制功能
outRNA是一种反义RNA，可以和IS10编码的转位酶mRNA(INRNA)5'端结合而抑制其翻译，当细胞内只有一个考贝IS10时，只能生成很少量的outRNA，故转位酶仍可生成。但当IS10的考贝数增多时，outRNA愈来愈多，其控制作用亦明显增强，所以称为多考贝抑制现象。这种现象可以防
重组病毒噬斑筛选实验
实验材料 转染细胞溶解产物 BS-C-1／HuTK-143B／BHK-21／CEF 贴壁生长汇片的细胞 试剂、试剂盒
YAC实验——YAC文库筛选
实验步骤1. YAC中心实验室用于筛选文库的方法进展很快。2. 将一块或多块微量滴定板微孔中的YAC克隆转印到尼龙膜上，用单拷贝探针进行杂交，就可以筛选YAC文库了。3. 然而，由 于杂交实验的信噪比较低以及制备所有的转印尼龙膜所需的花费巨大，绝大多数实验室已采用PCR方法来筛选文库。4.
重组病毒噬斑筛选实验
实验材料转染细胞溶解产物BS-C-1／HuTK-143B／BHK-21／CEF 贴壁生长汇片的细胞试剂、试剂盒完全 2 × 噬斑培养基-5完全MEM-2.5培养基筛选试剂LMP 琼脂糖溶液5-溴脱氧尿苷溶液中性红溶液X-gal溶液X-gluc溶液干冰／乙醇仪器、耗材6孔 35 mm 组织培养板杯状超
重组病毒噬斑筛选实验
实验材料 转染细胞溶解产物BS-C-1／HuTK-143B／BHK-21／CEF 贴壁生长汇片的细胞试剂、试剂盒 完全 2 × 噬斑培养基-5完全MEM-2.5培养基筛选试剂LMP 琼脂糖溶液5-溴脱氧尿苷溶液中性红溶液X-gal溶液X-gluc溶液干冰／乙醇仪器、耗材 6孔 35 mm 组织培养板
实验动物的第二位挑大梁能手——大鼠
学者在Open Access里随机挑选了276 篇有关模式动物的学术论文，除去小鼠（Mouse）比例，其中有16 篇使用大鼠（Rat）作为了实验动物，大鼠无疑成为了实验动物的第二主角。而很多接触实验动物的同学们，对大鼠的了解却少之又少，可能对其还仅仅停留于它体型庞大，性格凶残等表象，其实，这样的
小儿大动脉转位的检查及并发症
检查 1.X线检查 主要表现为：①由于主、肺动脉干常呈前后位排列，因此正位片见大动脉阴影狭小，肺动脉略凹陷，心蒂小而心影呈“蛋形”。②心影进行性增大。③大多数患者肺纹理增多，若合并肺动脉狭窄者肺纹理减少。 2.心电图 新生儿期可无特殊改变。婴儿期示电轴右偏，右心室肥大，有时尚有右心房肥大
小儿大动脉转位的临床表现及检查
临床表现 1.青紫 出现早，半数出生时即存在，绝大多数始于1个月内。随着年龄增长及活动量增加，青紫逐渐加重。青紫为全身性，若同时合并动脉导管未闭，则出现差异性发绀，上肢青紫较下肢重。 2.充血性心力衰竭 生后3～4周婴儿出现喂养困难、多汗、气促、肝大和肺部细湿啰音等进行性充血性心力衰竭等
小儿大动脉转位的并发症及治疗
并发症 肺动脉高压、心力衰竭、栓塞等。 治疗 诊断明确后首先纠正低氧血症和代谢性酸中毒等，如无适当大小的房间隔缺损，可保持动脉导管开放直到手术。对于有严重缺氧的婴儿应在转送至三级医院前即行静脉静滴前列腺素E1或前列腺素E2以扩张动脉导管伴代谢性酸中毒者可静注碳酸氢钠纠正酸中毒。 1.姑息
关于蛋白激酶C的转位与激活的介绍
转位 PKC广泛分布于多种组织、器官和细胞，静止细胞中PKC主要存在于胞浆中，当细胞受到刺激后，PKC以Ca2+依赖的形式从胞浆中移位到细胞膜上，此过程称之为转位（translocation）。一般将PKC的转位作为PKC激活的标志。 [2] 激活 PKC的活性依赖于钙离子和磷脂的存在，但
维真稳转株构建流程（二）
平板挑取法 计数100个多克隆稳转株细胞，接种于一个10cm培养盘中；注：尽量吹打均匀，防止细胞聚团。过夜培养后，观察并寻找单个细胞的位置，并在盘底做标记；培养培养2周；注：培养的第一周不要换液，接下来每3-4天换液。待标记处的细胞扩增为肉眼可见的白点，在移液器尖端吸取一点胰酶，缓慢滴至细胞处，待细
微核检测实验
实验方法原理遗传毒物或致突变因子作用于间期细胞染色质，有丝分裂染色体和纺锤体时，能导致染色体断裂成断片或整条染色体从纺锤体脱落和染色体子星群脱离，形成落后的孤立染色体，继而在分裂末期及以后的间期细胞中形成与主核脱离的徽核。因此微核实质上是孤立畸变染色体在间期的存在形式。微核检测既可直接检测体内细胞，
微核检测实验
实验方法原理 遗传毒物或致突变因子作用于间期细胞染色质，有丝分裂染色体和纺锤体时，能导致染色体断裂成断片或整条染色体从纺锤体脱落和染色体子星群脱离，形成落后的孤立染色体，继而在分裂末期及以后的间期细胞中形成与主核脱离的徽核。因此微核实质上是孤立畸变染色体在间期的存在形式。微核检测既可直接检测体内细胞
高通量筛选神经毒性实验
优点：完全自动化的图像获取与分析 快速得到每个细胞的多表型参数 实时监测活细胞的毒性，可持续几分钟至几天 神经系统对许多毒性化合物以及自然环境中生成的有害物质非常敏感。在疾病发生过程中，神经毒性可以对大脑或者外周神经系统造成短暂或持续性的损伤，例如脊髓损伤，中风，创伤性脑损伤等。同时这种神经毒性
转染细胞的稳定筛选实验
本实验主要用于获得含目的外源基因的真核细胞。实验方法原理外源基因转染真核细胞后整合入基因组DNA，能够长期存在于细胞中，随染色体复制而传给子代。外源基因进入培养细胞一般要经过几天才能够整合入基因组DNA。实验材料转染细胞试剂、试剂盒抗生素培养基胰酶仪器、耗材6孔板24孔板96孔板CO2培养箱滤纸片培
转染细胞的稳定筛选实验
实验方法原理 外源基因转染真核细胞后整合入基因组DNA，能够长期存在于细胞中，随染色体复制而传给子代。外源基因进入培养细胞一般要经过几天才能够整合入基因组DNA。 实验材料
转染细胞的稳定筛选实验
实验材料 转染细胞试剂、试剂盒 抗生素培养基胰酶仪器、耗材 6孔板24孔板96孔板CO2培养箱滤纸片培养瓶实验步骤 1．确定抗生素作用的最佳浓度：不同的细胞株对各种抗生素有不同的敏感性，因此在筛选前要做预试验，确定抗生素对所选择细胞的最低作用浓度。1) 提前24 小时在96 孔板或24 孔板中接种细
实验是否需要筛选稳定株？
实验是否需要筛选稳定株？能够达到稳定表达的方法不止稳定株一种哦。我们使用慢病毒感染细胞，也一样可以达到稳定表达的效果。什么原理呢？*慢病毒是整合型的逆转录病毒载体，感染细胞后，携带的外源片段会直接整合入细胞的基因组DNA中，并能够随细胞分裂稳定传代。所以对于大多数实验，包括细胞周期、凋亡、增殖等功能
当AI被引入课堂，“二人转”变成“三人转”
原文地址：http://news.sciencenet.cn/htmlnews/2024/5/523043.shtm
Southern－印迹实验——电转印法
实验方法原理因为聚丙烯酰胺凝胶的扎径太小，DNA不能在其横截面上有效地扩散，毛细管转移法不适用DNA从聚丙烯酰胺凝胶的转移。因此，聚丙烯酰胺凝晈必须在低离子强度的缓冲液中用电转移法进行印迹。实验材料DNA试剂、试剂盒TBE仪器、耗材Scotch-Brite垫Whatman滤纸实验步骤1. 在非变性
蛋白质的电转实验
很多膜可作为蛋白质电转移的固相支持物，如重氮化纤维素膜（DPT，DBM）、DEAE-纤维素膜、尼龙膜等，但用的最多的还是硝酸纤维素膜（NC膜），该膜与蛋白质以非共价的疏水作用形式结合，结合能力约为80 μg/cm2。实验方法基本方案 实验材料 蛋白质 试剂、试剂盒 转移缓冲液 甲醇 电极缓冲液
转膜实验原理与操作步骤
转膜是把DNA从琼脂糖凝胶中转移到固相支持物(一般是尼龙膜)上固定，是进行各种后续研究(如 RFLP 分析，阳性克隆的筛选验证等所有涉及分子杂交的研究)的前提。 实验目的： 掌握 Southern blotting 的原理及操作步骤 实验原理： 1. 转膜的方式： 向上的毛细管
蛋白质的电转实验
实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 转移缓冲液甲醇电极缓冲液仪器、耗材 电转移槽电泳仪实验步骤 1. 剪6块3 MM 滤纸和一块NC膜。2. 将剪好的3 MM 滤纸和NC膜在转移缓冲液中浸泡3-5分钟。3. 按下列过程安装转移装置，将塑料支架平放在含转移缓冲液的托盘中，在塑料支架上放一块海绵。4.
蛋白质的电转实验
基本方案 实验材料 蛋白质 试剂、试剂盒
CRISPR－实验利器：BTX－电转仪
什么是 CRISPR?CRISPR（Clustered regularly interspaced short palindromic repeats）, 是细菌中用于与病毒进行斗争的免疫武器。 生命进化历史上，细菌为了将病毒的外来入侵基因清除，进化出 CRISPR 系统，利用这个系统，细菌可以不动
蛋白质的电转实验
实验材料蛋白质试剂、试剂盒转移缓冲液甲醇电极缓冲液仪器、耗材电转移槽电泳仪实验步骤1. 剪6块3 MM 滤纸和一块NC膜。2. 将剪好的3 MM 滤纸和NC膜在转移缓冲液中浸泡3-5分钟。3. 按下列过程安装转移装置，将塑料支架平放在含转移缓冲液的托盘中，在塑料支架上放一块海绵。4. 将3块
研究报道首个病毒RdRP转位中间体晶体结构
核酸聚合酶是核酸生物合成的分子机器，是实现核酸遗传信息复制和传递的关键蛋白。在模板序列的指导下，聚合酶以NTP或dNTP为底物将单磷酸核苷（NMP）逐个添加到产物链上。每一次添加过程又称核苷酸添加循环（nucleotide addition cycle或NAC），由底物结合并诱导活性中心关闭、
研究揭示SecY/Sec61蛋白传导通道转位机制
新和成的蛋白被定向到SecY/Sec61蛋白传导通道上，以便穿过细胞膜来转位。 本期Nature上两篇论文采用低温电子显微镜来了解这一重要蛋白转位过程的机制。Eunyong Park等人发表了不活跃的和活跃的细菌核糖体-通道复合物的结构;Marko Gogala等人发表了一个哺乳动
小儿大动脉转位的发病机制及临床表现
发病机制 完全性大动脉转位中最常见者为右型转位，即升主动脉起自右室，位于右前方；肺动脉起自左室，位于左后方，这样形成两个截然分开的循环系统，其循环经过是：“右房→右室→主动脉→全身→体静脉→右房”；而“左房→左室→肺动脉→肺→肺静脉→左房”，患儿出生后必须伴有两个大循环间的分流交通，始能维持生