PCRSSCP技术实验
实验原理聚合酶链式反应-单链构象多态(Polymerase Chain Reaction-Single Strand Conformation Polymorphism,PCR-SSCP)技术是在PCR技术基础上发展起来的,它是一种简单、快速、经济的用来显示在PCR反应产物中单碱基突变(点突变)的手段。该方法已被用做癌基因和抑癌基因突变的筛查检测,遗传病的致病基因分析和基因诊断,基因制图等领域。在SSCP测定中,双链DNA(dsDNA)被变性成为单链DNA(ssDNA),每一条单链DNA都基于它们的内部序列而呈现出一种独有的折叠构象,即使同样长度的DNA单链因其碱基顺序不同、甚至单个碱基的不同会形成不同的构象。这些单链DNA在非变性条件下,用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,单链DNA的迁移率和带型,都取决于其折叠构象和电泳时的温度。试剂与材料1.样本DNA(100 ng/ml)、MTHFR上下游引物(5 pmol/ml)、Ta......阅读全文
动物实验技术1
实验动物常用作病原微生物的分离和鉴定,进行动物接种实验应选择易感性高、健康的动物。常用的动物有小鼠、豚鼠和家兔。根据实验要求可通过皮下、皮内、肌肉、腹腔、静脉等途径注射。感染动物死亡后,必要时进行尸体解剖并作病原体的检查。一、实验动物接种法(一)小白鼠接种法【材料】1.小白鼠。2.无菌注射器(1ml
植物制片实验技术
实验概要植物制片技术是植物显微技术的一个重要组成部分,在有关植物形态建成、植物杂交育种、作物病虫害防治、药用植物的培育和鉴别以及林木材性鉴定等多方面的研究工作中,都需要应用显微制片技术,本实验介绍了植物制片基本方法。主要试剂1. FAA固定液(福尔马林-冰醋酸-酒精),又称万能固定液或称标准保全液。
FISH-技术基本实验
基本方案 实验方法原理 试剂、试剂盒 70%乙醇 SSC
RNA干扰实验技术
实验概要本文介绍了RNA干扰的原理及基本实验方法,包括了siRNA的设计、siRNA的制备和siRNA的转染等方法,及RNA干扰实验中的注意事项。实验原理近年来的研究表明,将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞,可以使mRNA发生特异性的降解,导致其相应的基因
PCR实验技术(三)
【注意事项】1. PCR引物设计:引物设计可能是PCR扩增成功最关键的因素。如引物设计欠佳,可能导致扩增产物不足,甚至扩增失败,其原因是设计欠佳的引物可导致非特异扩增和/或形成引物二聚体,此又成为PCR反应的竞争性产物,从而进一步抑制PCR产物形成。在引物设计时必须考虑以下几个因素,其中最重要的是引
PCR实验技术(四)
4.我们上面介绍的只是一种基本的PCR反应条件,对于具体的每一种PCR反应,反应条件差异很大,需要根据情况调整。(1)时间:上面介绍的时间适用于在0.2 ml薄壁管进行PCR反应,其反应体积为50 µl,热循环仪为Perkin-Elmer 9600 或9700、Master Cycler PCR仪(
PCR实验技术(一)
PCR(聚合酶链式反应)【原理】PCR(polymerase chain reaction)用于在体外将微量的目标DNA大量扩增,以便进行分析。反应体系:①样品DNA;②引物(primer),是人工合成的一对寡核苷酸链(约15-20个核苷酸),用于扩增夹在双引物与模板DNA互补区之间的区域;③4种d
Northern-blot实验技术
一、经乙二醛和二甲基亚砜变性处理后进行的RNA电泳这一方法原于McMaster和Carmichael(1977)。 含有乙二醛-DMSO的凝胶比含有甲醛的凝胶更难于进行电泳,因为前者泳动速率较慢而且需将电泳液时行循环以避免电泳过程中形成过高的H+梯度。尽管上述两种凝胶具有近乎相等的分辨率(Mille
FISH-技术基本实验
实验方法原理试剂、试剂盒70%乙醇SSC磷酸盐缓冲溶液(PBS)Hemo-De清理试剂蛋白酶溶液仪器、耗材水浴锅增湿器玻片实验步骤一、制备培养的中期细胞标本1.在一个独立小室里放置一个水浴锅和一台增湿器。湿度应大约50%,如果房间湿度计显示低于45%,则应使用加湿器。2.预热水浴锅至67℃±2℃,在
植物制片实验技术
实验概要 植物制片技术是植物显微技术的一个重要组成部分,在有关植物形态建成、植物杂交育种、作物病虫害防治、药用植物的培育和鉴别以及林木材性鉴定等多方面的研究工作中,都需要应用显微制片技术,本实验介绍了植物制片基本方法。 主要试剂 1. FAA固定液(福尔马林-冰醋酸
交叉电泳实验技术
(一)原理 交叉免疫电泳是把琼脂平板电泳和火箭电泳结合起来的一种方法。先将抗原样品在琼脂凝胶中进行电泳分离,然后使已分开的各抗原成分与原泳动方向呈90度角的方向泳向含抗体的琼脂凝胶中,于是该抗原样品中的各个抗原成分和它相对应的抗体依次形成若干锥形沉淀线,根据沉淀线的位置及面积(或高度)可确
交叉电泳实验技术
(一)原理 交叉免疫电泳是把琼脂平板电泳和火箭电泳结合起来的一种方法。先将抗原样品在琼脂凝胶中进行电泳分离,然后使已分开的各抗原成分与原泳动方向呈90度角的方向泳向含抗体的琼脂凝胶中,于是该抗原样品中的各个抗原成分和它相对应的抗体依次形成若干锥形沉淀线,根据沉淀线的位置及面积(或高度)可确定该
FISH-技术基本实验
实验方法原理 试剂、试剂盒 70%乙醇SSC磷酸盐缓冲溶液(PBS)Hemo-De清理试剂蛋白酶溶液仪器、耗材 水浴锅增湿器玻片实验步骤 一、制备培养的中期细胞标本1.在一个独立小室里放置一个水浴锅和一台增湿器。湿度应大约50%,如果房间湿度计显示低于45%,则应使用加湿器。2.预热水浴锅至67℃±
细胞划痕实验(Wound-Healing)技术服务|实验技术服务
流程:1.先用marker笔在6孔板背后,用直尺比着,均匀得划横线,大约每隔0.5~1cm一道,横穿过孔。每孔至少穿过5条线。2.在空中加入约5X105个细胞,具体数量因细胞不同而不同,掌握为能铺满。3.第二天用头比着直尺,尽量垂至于背后的横线划痕,枪头要垂直,不能倾斜。4.用PBS洗细胞3次,去处
实验室分析技术快原子轰击源实验技术
1、靶和氩离子枪 用作靶的样品架安装在直接进样杆上,作为载体的靶材为金属材料,如银、铜、不锈钢等。样品架的斜面通常为25°~30°,中性原子束和产生的样品离子束之间的夹角一般为60°,靶的周围用小的金属圆筒包围以提供合适的电位有助于拉出二次离子。样品架还可制成可加热的方式,以研究温度的效应。由于溅
透射电镜实验技术服务|实验技术服务
关键词:透射电镜实验技术服务|实验技术服务简介:世界*品牌透射电镜实验技术服务|实验技术服务原装,质量保证,价格优惠。透射电镜实验技术服务|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧,承诺客户不成功不收费。我们所有的实
动物实验技术:转基因小鼠制备实验
1、 选取7~8周龄雌性小鼠,阴道口封闭,作为供体,下午3:00左右,每只小鼠腹腔注射PMSG(10 IU)。2、 47~48小时后,每只小鼠腹腔注射HCG(0.8 IU),并与正常公鼠合笼;另取数只适龄母鼠(2月龄以上)作为受体,阴道口潮红,与结扎公鼠合笼。3、第二天上午9:00前观察供体、受体,
荧光光谱实验技术——时间分辨技术
时间分辨发光光谱技术是基于不同发光体的发光衰减速率的不同,配置使用带时间延迟设备的脉冲光源(闪光灯或激光器)和带有门控时间电路的检测器件,通过选定延迟时间td和门控时间tg,对发射单色器进行扫描,得到时间分辨发射光谱,从而实现对光谱重叠但是发光寿命不同的组分进行分辨和分别测定。或者固定激发与发射波长
实验技术:细胞培养基本技术
细胞培养 一、操作规程: 1.实验前,无菌室及无菌操作台用紫外灯照射30-60分钟灭菌,用70%酒精擦拭无菌操作台面,并开启无菌操作台风机运转10分钟后,才可开始实验操作.每次操作只处理一株细胞,以免造成细胞交叉污染.实验结束后,将实验物品带出工作台。如需要继续进行下一个实验,则用
实验技术:细胞培养基本技术
一、操作规程:1.实验前,无菌室及无菌操作台用紫外灯照射30-60分钟灭菌,用70%酒精擦拭无菌操作台面,并开启无菌操作台风机运转10分钟后,才可开始实验操作.每次操作只处理一株细胞,以免造成细胞交叉污染.实验结束后,将实验物品带出工作台。如需要继续进行下一个实验,则用70%酒精擦拭无菌操作台面,再
关于外显子的应用机理介绍
应用聚合酶链反应-单链构象多态性(polymerasechainreaction-singlestrandconformationpolymorphsim,PCR-SSCP)及DNA直接测序技术检测68例SAD患者和65名正常老年人的早老素-1基因第5外显子。
外显子应用机理
应用聚合酶链反应-单链构象多态性(polymerasechainreaction-singlestrandconformationpolymorphsim,PCR-SSCP)及DNA直接测序技术检测68例SAD患者和65名正常老年人的早老素-1基因第5外显子。
ChIP实验技术经验分享
染色质免疫沉淀技术(Chromatin Immunoprecipitation,简称ChIP)是研究活体内蛋白质与DNA相互作用的一种技术。它利用抗原抗体反应的特异性,可以真实地反映体内蛋白因子与基因组DNA结合的状况。随着对基因功能研究的不断深入,这项技术正越来越多的被应用于科研的各个领域。
定量PCR实验技术分享
1. 如果扩增曲线ct值比较靠后的话,32左右,一般有什么方法解决?ct值比较靠后,对实验有一定的影响,因为经过那么多次的循环,酶的活性有可能有所下降,这时候扩增效率会有所改变(而定量PCR的理论基础就是每次循环的扩增效率我们认为是确定的一个值)。因此最好能够把ct值往前移。解决办法可以将模板加以浓
实验技术与方法大全
目前最好的实验方法站点之一: http://www.protocol-online.org 有近三百种经典实验方法的生物学网站: http://iprotocol.mit.edu/ 目前最完美的生物技术收集网站之一: http://www.bioprotocol.com:包括动植物、果蝇、分子生物、
干细胞实验技术入门
《Science》刚刚公布的十大科学突破中,占据首位就是细胞重新编程技术(iPS,induced pluripotent stem cells),这一才初初“面世”一年的干细胞 技术引发了生命科学研究领域的极大震动,引用《科学》杂志负责新闻的副主编Robert Coontz的话就是“这项研究几乎在一
实验离心技术进展(一)
引言实用离心技术可分为二大类:一类是用于化工、制药、食品、污水处理、油品处理。工业的大型制备用离心分离技术,所使用的离心机及其附件属于大中型工业生产设备。其中管式离心机转速较高,小型可达50,000rpm,较大型(每小时处理量在1.5 吨以 上)也可达15,000rpm(国外典型机如Sharples
红外光谱实验技术
红外光谱实验技术一. 实验目的1. 掌握固体和液体样品的常规制样方法2. 了解傅里叶变换红外光谱仪的工作原理和使用方法3. 了解ATR光谱附件的工作原理并掌握其使用方法 二. 实验内容1.固体样品的制备方法:压片法将固体样品与金属卤化物(KBr)按适当比例混合,于玛瑙研钵中快速研磨成极细的粉末(~2
动物实验基本技术3
第七节 实验动物的处死当实验中途停止或结束时,实验者应站在实验动物的立场上以人道的原则去处置动物,原则上不给实验动物任何恐怖和痛苦,也就是要施行安乐死。安乐死是指实验动物在没有痛苦感觉的情况下死去。实验动物安乐死方法的选择取决于动物的种类与研究的课题。一、蛙 类常用金属探针插入枕骨大孔,破坏脑脊髓的
动物实验基本技术1
第一节 实验动物的抓取和固定在进行实验时,为了不损伤动物的健康,不影响观察指标,并防止被动物咬伤,首先要限制动物的活动,使动物处于安静状态,工作人员必须掌握合理的抓取固定方法。抓取动物前,必须对各种动物的一般习性有所了解。操作时要小心仔细、大胆敏捷、熟练准确、不能粗暴,不能恐吓动物,同时,要爱惜动物