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关于PCR内参基因选择策略

关于内参基因的选择很多初级的实验人员很少会去思考这个问题,因为摆在面前的只有两种选择,β-actin和GAPDH,甚至在很多人长期的观念中对于内参的认知也仅仅停留在是一个表达量相对较高较稳定的看家基因,对于分子层面相对表达量的一个重要参照而已,至于为什么要选这两种,还有没有其他的内参,人们的回答往往是“Sorry,I don’t care.”或者“我的前辈就是这样用的,别的文献是这样写的,有问题吗?”。有问题吗?BioTNT要在这里大声的疾呼“有,而且是很大的问题。”当人们检测某个基因的表达降低或者提高得出结果以后,你并不知道是它本身的表达量发生变化,还是因为样本量大小或者操作导致RNA的损失等其他原因导致的表达量变化,所以这个时候需要同时检测另外的基因作为参照。这另外的基因就是内参基因。于是,从我们本身科学的要求来看,理想的内参就会有这样几个条件,1、表达量较大;2、稳定表达于不同类型的细胞和组织;3、表达水平与细胞周期以......阅读全文

关于PCR内参基因选择策略

   关于内参基因的选择很多初级的实验人员很少会去思考这个问题,因为摆在面前的只有两种选择,β-actin和GAPDH,甚至在很多人长期的观念中对于内参的认知也仅仅停留在是一个表达量相对较高较稳定的看家基因,对于分子层面相对表达量的一个重要参照而已,至于为什么要选这两种,还有没有其他

关于PCR内参基因选择策略

关于内参基因的选择很多初级的实验人员很少会去思考这个问题,因为摆在面前的只有两种选择,β-actin和GAPDH,甚至在很多人长期的观念中对于内参的认知也仅仅停留在是一个表达量相对较高较稳定的看家基因,对于分子层面相对表达量的一个重要参照而已,至于为什么要选这两种,还有没有其他的内参,人们的回答往往

RT-PCR内参基因选择:除了β-actin还能用什么?

Q1: 要做real-time pcr,而该种的β-actin未确定,我知道一般用持家基因作内参,但似乎其他基因各有缺点,有的作者用他们做内参时被SCI杂志要求用两个内参以证实,我想知道的是除了β-actin,哪个基因是SCI公认的内参基因(不用作两个内参了)?A1: 28S和18S rRNA甘油醛

PCR实验中内参基因的作用

1. 判断样品提取是否成功。假如你提取了总RNA然后再做逆转录得到cDNA,然后再去跑PCR发现没有结果,是不是表示样品中没有你的目的基因呢?答案是:不一定。要根据使用同一模板跑出的内参基因的结果才可判断。内参基因的CT在一个合理范围(比如20左右)的前提下,才能说明样品制备没问题,在这个前提下,做

荧光定量PCR(qPCR)内参的选择对基因表达差异分析结果的...

荧光定量PCR(qPCR)内参的选择对基因表达差异分析结果的影响与应用实时荧光定量PCR技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针或相应的荧光染料来实现其定量功能的。由于其精准度好、灵敏度高,在分子生物学研究和医学研究等方面得到了广泛的应用,尤其是在基因表达差异分析方面。基因表达差异分析一般是比较不同

荧光定量PCR实验中的内参基因

通常它们在各组织和细胞中的表达相对恒定,在检测基因的表达水平变化时常用它来做参照物。内参基因通常是持家基因(house-keeping gene)因为其表达水平受环境因素影响较小,而且在个体各个生长阶段的几乎全部组织中持续表达变化很小。常用的内参基因包括GAPDH、β-actin(BETA-acti

real-time PCR中内参基因的CT值

这个要看你在做PCR前的加样量是否一致。如果加样量是一致的,而内参做出来差别大(比如3-4个CT值)那说明你的实验体系有严重的问题。理论上加入的DNA量一样多,内参的CT值应该都一样。如果你能肯定加样量是一致的,那说明你的样本要么降解了,要么就是你的实验处理对内参的量产生了影响,必须换一个基因做内参

real-time PCR中内参基因的CT值

这个要看你在做PCR前的加样量是否一致。如果加样量是一致的,而内参做出来差别大(比如3-4个CT值)那说明你的实验体系有严重的问题。理论上加入的DNA量一样多,内参的CT值应该都一样。如果你能肯定加样量是一致的,那说明你的样本要么降解了,要么就是你的实验处理对内参的量产生了影响,必须换一个基因做内参

real-time PCR中内参基因的CT值

这个要看你在做PCR前的加样量是否一致。如果加样量是一致的,而内参做出来差别大(比如3-4个CT值)那说明你的实验体系有严重的问题。理论上加入的DNA量一样多,内参的CT值应该都一样。如果你能肯定加样量是一致的,那说明你的样本要么降解了,要么就是你的实验处理对内参的量产生了影响,必须换一个基因做内参

real-time PCR中内参基因的CT值

这个要看你在做PCR前的加样量是否一致。如果加样量是一致的,而内参做出来差别大(比如3-4个CT值)那说明你的实验体系有严重的问题。理论上加入的DNA量一样多,内参的CT值应该都一样。如果你能肯定加样量是一致的,那说明你的样本要么降解了,要么就是你的实验处理对内参的量产生了影响,必须换一个基因做内参