rflp技术
前 言 基因的变异类型有多种，对应的分子检测方法亦有多种，当前资本市场驱动着分子检测市场，并极力追捧NGS技术，因为其通量高，灵敏度高且性价比高。小编承认NGS是分子检测的必然发展趋势，但是短时间内，NGS并不会取代其他分子检测方法，因为针对不同的需求，都有对应的理想检测方法，每个检测平台都有着自己的优势，比如： 操作简单：PCR，ARMS-PCR，HRM等 时间快速：ARMS-PCR，HRM等 成本低：PCR，PCR-RFLP，MassARRAY等 准确：Sanger等 通量高：NGS等 灵活性：Pyrosequencing等 结果分析简单：ARMS-PCR等 自动化：核酸提取等 ...... 小编一直认为：没有最好的技术，只有最合适的技术！最好的，不一定是最合适的；最合适的，才是真正最好的。 今天，我们聊一聊PCR-RFLP技术，上一篇我们已经介绍过PCR电泳技术，两者主要原理类似，只是实验中多了......阅读全文
遗传病与肿瘤的基因诊断
从DNA水平上寻找确诊遗传病的指标或探讨遗传病和肿瘤的病因等方面，已取得很大成绩，对产前诊断，早期确诊和突变基因携带者的检出等都有重要意义。所用的方法大体有以下几种。 一、分离基因进行结构分析 利用DNA离体转化，制备探针，制备基因文库进行筛检，最后鉴定载体中插入DNA片段的特性等一系
AFLP(扩增性片段长度多态性)技术的定义
AFLP技术是一项新的分子标记技术，是基于PCR技术扩增基因组DNA限制性片段，基因组DNA先用限制性内切酶切割，然后将双链接头连接到DNA片段的末端，接头序列和相邻的限制性位点序列，作为引物结合位点。限制性片段用二种酶切割产生，一种是罕见切割酶，一种是常用切割酶。它结合了(限制性内切酶片段长度多态
安捷伦在2010－Pittcon上推出鱼类品种检定芯片
快速、简单、准确的安捷伦鱼类 DNA 检测技术成为海产品种类鉴定和标签信息验证的常规检测方法 2010 年 3 月 8 日，佛罗里达州奥兰多市，匹兹堡仪器博览会(Pittcon) 2010—安捷伦科技公司(纽约证交所代码：A)日前发布了一 套系统，加速和简化了利用 DNA 鉴定食用鱼种类的
DNA的多态性的检测方法介绍
、限制性片段长度多态性一个人的两套单倍体DNA是不完全相同的，一般每100－500个碱基对就有一个是不相同的。换言之，如果把两套基因组DNA（各3.2×109bp）排列起来，那么平均有1000万处不同，它们多位于内含子序列中。实际上，除单卵双生子外，人群中没有两个个体的基因组DNA是完全相同的。
遗传病与肿瘤的基因诊断
从DNA水平上寻找确诊遗传病的指标或探讨遗传病和肿瘤的病因等方面，已取得很大成绩，这对产前诊断，早期确诊和突变基因携带者的检出等都有重要意义。所用的方法大体有以下几种。 一、分离基因进行结构分析 利用DNA离体转化，制备探针，制备基因文库进行筛检，最后鉴定载体中插入DNA片段的特性等一系列技术，
乙型肝炎病毒耐药基因检测方法
1.PCR产物直接测序：是将HBV基因组的逆转录酶区进行扩增后直接进行测序分析的方法。PCR产物直接测序法可检测已知和可能的未知耐药变异位点，是最常用的基因型耐药检测方法之一。PCR产物直接测序的方法一般作为基因型耐药检测的金标准。该方法的缺点是灵敏性较差，只有当变异株超过HBV准种池的20%时
微卫星标记法的特点
与其它标记技术相比，具有以下特点：首先，在每个微卫星DNA 两端的序列多是相对保守的单拷贝序列，尤其在亲缘关系相近的物种间是保守的，而且在一些紧密相关的物种中其重复单位和重复次数具有一定的相似性。其次，这些小的、串联排列的重复序列经常是通过核苷酸链的滑动错配或者其它未知的过程来改变它们的长度,从而导
毛细管电泳法检测肺癌p53基因第七外显子的突变
作者：刘勇1,2 王荣*1,2 高 岚2 贾正平1 辛晓婷1,2 谢 华1 马 骏1 作者单位：1(兰州军区兰州总医院临床药理基地，兰州 730050) 2(兰州大学生命科学学院，兰州 730000) 【摘要】 p53基因点突变在肺癌的发生过程中起重要作用，检测基因点突变的方法学研究将有助于临
RAPD分析技术2
（2）扩增结果差，条带模糊或难以辨认。――更换Taq聚合酶缓冲液。――检查引物（使用另外一个引物，或者将引物末端标记，在 16% 6mol/L尿素聚丙烯酰胺胶上电泳检测）。――检查Taq聚合酶活性（与不同批量的酶作比较）。――改变DNA浓度。（3）高相对分子质量产物弥散状分布>4kb。――降低DNA
基因性状的其它检测方法
基因性状的其它检测方法1） 基因长度多态性（RFLP）检测在无DNA缺失，仅发生核苷酸改变性突变疾病时，往往出现酶切位点发生改变，通过RFLP分析可以显示出。设计一对适当引物，使被扩增的片段包含有某一个或数个多态性的限制性内切酶识别位点的序列。进行PCR后，用限制性内切酶酶切PCR产物；理论上两个
关于随机扩增多态性DNA的研究情况
由于随机引物在较低的复性温下能与基因组DM非特异性的结合，当相邻两个引物间的DNA小于2 000bp时，就能够得到扩增产物。与RFLP相比，RAPD具有很多优点。（1)不需要了解研究对象基因组的任何序列，只需很少纯度不高的模板，就可以检测出大量的信息。（2)无需专门设计RAW)反应引物，随机设计
PCR技术应用六：血友病A基因诊断
血友病A是常见的遗传性凝血障碍，它是由凝血因子Ⅷ的基因缺陷而致其功能异 常的致其发病率改为1/1000男性，女性患者极为少见.在临床上，血友病大都有家族 史，亦有约20～30%的患者为散发病例，为新生基因突变所致.一、血友病的遗传学 本病为X连锁隐性遗传病，其基因定痊于Xq28.因子Ⅷ(FVⅢ
甲型血友病的基因诊断
甲型血友病是最常见的出血性疾病的一种，为X性连锁隐性遗传，男性发病率1/万，系第8因子（FⅧ）基因缺陷所致。1984～1987年采用了“限制性酶切片段长度多态性”（RFLP）基因连锁分析法，其可诊断率≤75%，但该法繁而难予普及。Kogan氏把PCR与RFLP结合起来扩增FⅧ基因内含BclI和X
基因诊断基本原理
核酸分子杂交是基因诊断的最基本的方法之一。 基因诊断技术它的基本原理是：互补的DNA单链能够在一定条件下结合成双链，即能够进行杂交。这种结合是特异的，即严格按照碱基互补的原则进行，它不仅能在DNA和DNA之间进行，也能在DNA和RNA之间进行。因此，当用一段已知基因的核酸序列作出探针，与变性后的单链
dna亲子鉴定流程步骤是怎样的
摘要：dna亲子鉴定是通过采集人的血液、毛发、唾液、口腔细胞等样本，对其中的几至几十个dna位点进行检测来确定亲子关系的方法，是相对准确率较高的亲子鉴定方法。dna亲子鉴定有dna指纹鉴定、dna指纹鉴定、SNP检测、RFLP分析等多种方法，检测时先提取样本中的dna，然后进行PCR扩增后后PCR反
HLA分型技术（一）
HLA分型并不只是一种应用性的临床检测指标，免疫遗传学研究的发展，很大程度上依赖于以分型为主要手段的HLA多态性分析。60年代建立的并不断完善的血清学及细胞学分型技术主要侧重于分析HLA产物特异性；80年代起建立的DNA分型方法则侧重于基因的分型。 一、血清学分型技术 （一)HLA-Ⅰ类抗原
分子生物学常用实验技术（九）
第三节从动物组织提取基因组DNA一、材料 哺乳动物新鲜组织。二、设备 移液管、高速冷冻离心机、台式离心机、水浴锅。三、试剂1、分离缓冲液：10mmol/L Tris?Cl pH7.4, 10mmol/L NaCl, 25mmol/L EDTA。2、其它试剂：10% SDS，蛋白酶K (20mg/
PCR技术应用四：遗传病诊断
自从1985年PCR技术首次应用于遗传病基因诊断以来，已有近百种遗传病可用PCR 技术进行诊断和产前诊断，利用PCR技术诊断遗传病的途径有五个，①基因突变位点 的直接检出②筛查与遗传病③④有关的点突变③遗传多态性标记连锁分析间接诊断④ 利用cmRNA逆转录为cDNA进行分析或直接分析cmRNA.
PCR技术直接诊断遗传病
自从1985年PCR技术首次应用于遗传病基因诊断以来，已有近百种遗传病可用PCR 技术进行诊断和产前诊断，利用PCR技术诊断遗传病的途径有五个，①基因突变位点 的直接检出②筛查与遗传病③④有关的点突变③遗传多态性标记连锁分析间接诊断④ 利用cmRNA逆转录为cDNA进行分析或直接分析cmRN
PCR技术遗传病诊断上的应用
自从1985年PCR技术首次应用于遗传病基因诊断以来，已有近百种遗传病可用PCR 技术进行诊断和产前诊断，利用 PCR技术诊断遗传病的途径有五个，①基因突变位点 的直接检出②筛查与遗传病③有关的点突变④遗传多态性标记连锁分析间接诊断⑤ 利用cmRNA逆转录为cDNA进行分析或直接分析cmRN
扩增片段长度多态性的方法
AFLP 是 RFLP 与PCR相结合的产物，其基本原理是先利用限制性内切酶水解基因组 DNA 产生不同大小的 DNA 片段，再使双链人工接头的酶切片段相边接，作为扩增反应的模板 DNA，然后以人工接头的互补链为引物进行预扩增，最后在接头互补链的基础上添加 1—3个选择性核苷酸作引物对模板 DNA
扩增片段长度多态性的实现方法
AFLP 是 RFLP 与PCR相结合的产物，其基本原理是先利用限制性内切酶水解基因组 DNA 产生不同大小的 DNA 片段，再使双链人工接头的酶切片段相连接，作为扩增反应的模板 DNA，然后以人工接头的互补链为引物进行预扩增，最后在接头互补链的基础上添加 1—3个选择性核苷酸作引物对模板 DNA
扩增片段长度多态性的方法介绍
AFLP 是 RFLP 与PCR相结合的产物，其基本原理是先利用限制性内切酶水解基因组 DNA 产生不同大小的 DNA 片段，再使双链人工接头的酶切片段相边接，作为扩增反应的模板 DNA，然后以人工接头的互补链为引物进行预扩增，最后在接头互补链的基础上添加 1—3个选择性核苷酸作引物对模板 DN
扩增片段长度多态性技术的原理和特点
AFLP 是 RFLP 与PCR相结合的产物，其基本原理是先利用限制性内切酶水解基因组 DNA 产生不同大小的 DNA 片段，再使双链人工接头的酶切片段相连接，作为扩增反应的模板 DNA，然后以人工接头的互补链为引物进行预扩增，最后在接头互补链的基础上添加 1—3个选择性核苷酸作引物对模板 DNA
血友病的基因诊断
确定致病基因；用于携带者检出和产前诊断；并可预测抑制物的产生。 （一）直接基因诊断：采用分子生物学方法(PCR，DGGE，SSCP，DNA测序等)直接测定致病基因的缺陷。FVIII 22内含子倒位分析可作为重型HA的筛选试验，也是目前唯一用于临床诊断的直接基因检测方法。FVIII 22内含子倒
分子生物学常用实验技术（十）
第二节RFLP 技术一、材料 基因组DNA(大于50kb,分别来自不同的材料)。二、设备 电泳仪及电泳槽， 照相用塑料盆5 只，玻璃或塑料板(比胶块略大) 4 块，吸水纸若干，尼龙膜(依胶大小而定)，滤纸，eppendorf 管(0.5ml)若干。三、试剂：1、限制性内切酶(BamHⅠ, Ec
HLA基因分型方法：PCR－指纹图法
PCR－指纹图法1）提取DNA同前RFLP法 2）PCR扩增同前PCR-RFLP法 3）凝胶电泳取PCR产物10μl，加2μl的6×上样缓冲液，经12％聚丙烯酰胺凝胶电泳，200V，2～3h。再用溴化乙锭染色30min，照相分析结果。
DNA标记的扩增片段长度多态性介绍
AFLP是1995年荷兰科学家Zabeau和Vos等发展起来的一种检测DNA多态性的新方法，文章发表于Nucleic Acids Research。AFLP 是 RFLP 与PCR相结合的产物，其基本原理是先利用限制性内切酶水解基因组 DNA 产生不同大小的 DNA 片段，再使双链人工接头的酶切
利用PCR技术诊断遗传病的途径和方法
(一)PCR技术直接诊断遗传病 对于由基因缺失突变引起的遗传病可利用缺失区域还侧的DNA序列引物直接扩增 该区域,看有无特异性的扩增产物,这对缺失部位固定的片段检测非常准确简便,只 需一对引物即可完成,而对于哪些缺失部位异质的基因则可利用多对引物进行多重 PCR,然后检查缺失带.对基因的重排来说,可
威尔逊病的基因诊断
威尔逊病患者及家系成员常规生化检测发现，在患者、杂合子与正常人间存在10%～25%的重叠数据，影响检测特异性。基因诊断对症状前诊断及杂合子检出具有优越性。 ①限制性片段长度多态性（RFLP）连锁分析：Figus等（1989）首次应用RFLP对17个家系未患病个体进行基因检测，国内外学者用此法对