等密度离心法去除红细胞和死细胞
器材和试剂: 所有直接接触细胞的用品和试剂必须无菌。1. 标注体积刻度的试管(圆锥形底);2. 巴斯德吸管(短型和长型);3. 10ml刻度吸管和洗耳球或移液装置;4. 台式离心机;5. 淋巴细胞分离液或类似试剂;6. 培养基;实验方法:1. 重悬细胞使之达到5×106—107个/ml的高浓度。在一个离心管中加入10ml淋巴细胞分离液,用巴斯德吸管或10ml移液管小心将5ml的原代细胞悬液加于淋巴细胞分离液面上。将容器倾斜一个角度,沿容器壁慢慢地将细胞悬液滴下,而不是直接滴到淋巴细胞分离液表面。目的是在两种液体之间得到一个清晰的界面,以便更好地分离;2. 不制动1000r/min离心试管20min(注:离心时缓慢地减速可使淋巴细胞分离液与培养基之间形成清晰的界面);3. 从离心机中小心地取出容器,观察两液面之间的界面,可见一乳状黄......阅读全文
等密度离心法的原理
等密度离心分离样品主要是根据被分离样品的密度。在这种离心分离方法中,要用介质产生一种密度梯度, 这种密度梯度覆盖了待分离物质的密度,这样,通过离心使不同密度的颗粒悬浮到相应的介质密度区。
等密度离心法去除红细胞和死细胞
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高速大容量冷冻离心机等密度区带离心法
高速大容量冷冻离心机等密度区带离心法(以下简称等密度区带离心法)是不同颗粒存在浮力差时,在离心力作用下,颗粒向下沉降或向上浮起,一直沿梯度移动到与其密度恰好相等的位置上即等密度点,形成区带而分离的方法。区带的位置和形状均不受离心时间的影响,体系处于动态平衡。 一、等密度区带离心法依据的
高速大容量冷冻离心机等密度区带离心法
高速大容量冷冻离心机等密度区带离心法(以下简称等密度区带离心法)是不同颗粒存在浮力差时,在离心力作用下,颗粒向下沉降或向上浮起,一直沿梯度移动到与其密度恰好相等的位置上即等密度点,形成区带而分离的方法。区带的位置和形状均不受离心时间的影响,体系处于动态平衡。 一、等密度区带离心法依据的原理
超速离心法纯化病毒实验——等密度梯度离心
实验方法原理离心过程中 CsCl 随离心力而下沉,形成连续梯度,上部密度小而下部密度大,离心管内病毒悬液中的病毒和细胞碎片随其密度的大小而下沉或上浮到相等密度梯层中实验材料待纯化的病毒试剂、试剂盒CsCl仪器、耗材离心机实验步骤在每毫升病毒悬液中,加入 CsCl 约 1 g, 混匀,4℃以 40 0
密度梯度离心法概述
〔1〕亦称平衡密度梯度离心法。用超离心机对小分子物质溶液,长时间加一个离心力场达到沉降平衡,在沉降池内从液面到底部出现一定的密度梯度。若在该溶液里加入少量大分子溶液,则溶液内比溶剂密度大的部分就产生大分子沉降,比溶剂密度小的部分就会上浮,最后在离心力和浮力平衡的位置,集聚形成大分子带状物。利用这
密度梯度离心法的原理简介
又称速率—区带离心,沉降系数较接近的物质分离的方法; 原理:不同颗粒之间存在沉降系数差时,在一定离心力作用下,颗粒各自以一定速度沉降,在密度梯度不同区域上形成区带的方法。 介质梯度应预先形成,介质的最大密度要小于所有样品颗粒的密度。常用的有蔗糖、甘油; 密度梯度液的制备用梯度混合器,形成由
密度梯度区带离心法的分类
(1)差速区带离心法:当不同的颗粒间存在沉降速度差时(不需要像差速沉降离心法所要求的那样大的沉降系数差)。在一定的离心力作用下,颗粒各自以一定的速度沉降,在密度梯度介质的不同区域上形成区带的方法称为差速区带离心法。此法仅用于分离有一定沉降系数差的颗粒(20% 的沉降系数差或更少)或分子量相差3倍的蛋
关于密度梯度离心法的介绍
密度梯度离心法: 液体在离心时,其密度随转轴距离而增加。碱基GC 配对的双链DNA 片段密度较大,利用精密的密度梯度超离心技术可使切割适当片段的不同DNA 按密度大小分布开来。进而通过与某种放射性标记的mRNA 杂交来检验,分离相应的基因。非洲爪蟾rDNA.5sDNA 和海胆组蛋白基因就是这样分
密度梯度区带离心法的主要分类
密度梯度区带离心法又可分为两种:(1)差速区带离心法:当不同的颗粒间存在沉降速度差时(不需要像差速沉降离心法所要求的那样大的沉降系数差)。在一定的离心力作用下,颗粒各自以一定的速度沉降,在密度梯度介质的不同区域上形成区带的方法称为差速区带离心法。此法仅用于分离有一定沉降系数差的颗粒(20% 的沉降系
关于密度梯度离心法的操作介绍
纯化病毒常用的方法是蔗糖密度梯度离心法,能得到比较纯的病毒。其过程如下: 1、将收集的组织或脏器或其他,用玻璃匀浆器充分研磨后制成悬液,经反复冻融3 次后,置 -20 ℃冰箱中,备用。 2、先以5000g离心15分钟后,获取上清夜,然后再20000g高速离心30分钟后取上清夜。 3、接着1
密度梯度离心法的相关内容
密度梯度区带离心法(简称区带离心法),是将样品加在惰性梯度介质中进行离心沉降或沉降平衡,在一定的离心力下把颗粒分配到梯度中某些特定位置上,形成不同区带的分离方法。此法的优点是:①分离效果好,可一次获得较纯颗粒;②适应范围广,能像差速离心法一样分离具有沉降系数差的颗粒,又能分离有一定浮力密度差的颗
密度梯度区带离心法的概念和特点
区带离心法是将样品加在惰性梯度介质中进行离心沉降或沉降平衡,在一定的离心力下把颗粒分配到梯度中某些特定位置上,形成不同区带的分离方法。此法的优点是:①分离效果好,可一次获得较纯颗粒;②适应范围广,能象差速离心法一样分离具有沉降系数差的颗粒,又能分离有一定浮力密度差的颗粒;③颗粒不会挤压变形,能保持颗
大量提取质粒DNA(CsCl-密度梯度离心法)
大量提取质粒DNA(CsCl 密度梯度离心法) 2010-7-7大量提取质粒DNA(CsCl 密度梯度离心法)李渊越1. 预约摇床、超速离心机。2. 配 TB 培养基(1L 锥形瓶中装250 ml 培养液),并灭菌。质粒做好转化,并涂板。3. 第一天早上,往 TB 中加入适量的Amp 或Kana。挑
中量提取质粒DNA(CsCl-密度梯度离心法)
中量提取质粒DNA(CsCl 密度梯度离心法) 2010‐07‐07李渊越1. 将菌液倒入装有 50mL TB 的锥形瓶中,或从培养好的平板上挑取单克隆,锥形瓶置于37℃摇床350rpm 培养16-20h,至OD600 到10-12。(OD600 到40 为用TBS 培养基在我们的培养条件下所能达到
密度梯度区带离心法的优缺点介绍
区带离心法是将样品加在惰性梯度介质中进行离心沉降或沉降平衡,在一定的离心力下把颗粒分配到梯度中某些特定位置上,形成不同区带的分离方法。此法的优点是:①分离效果好,可一次获得较纯颗粒;②适应范围广,能象差速离心法一样分离具有沉降系数差的颗粒,又能分离有一定浮力密度差的颗粒;③颗粒不会挤压变形,能保持颗
密度梯度区带离心法的分类和特点
(1)差速区带离心法:当不同的颗粒间存在沉降速度差时(不需要像差速沉降离心法所要求的那样大的沉降系数差)。在一定的离心力作用下,颗粒各自以一定的速度沉降,在密度梯度介质的不同区域上形成区带的方法称为差速区带离心法。此法仅用于分离有一定沉降系数差的颗粒(20% 的沉降系数差或更少)或分子量相差3倍的蛋
表面等离激元增强分子光谱到表面等离激元介导化学反应
田中群教授课题组从表面等离激元增强分子光谱到表面等离激元介导化学反应研究成果综述"From plasmon-enhanced molecular spectroscopy to plasmon-mediated chemical reactions",近日发表在国际学术期刊Nature Rev
等离激元“拉满”红外“技能”
红外光谱技术是一种通过检测分子内部振动/转动能级的跃迁频率来确定物质分子结构从而鉴别化合物的分析方法。其“快速”、“无损”的特点,对研究生物分子的化学键和官能团十分有利,因此受到生物、化学等领域的广泛关注。不过,微米级别的红外光波长和纳米级别的生物分子相互作用微弱,成为红外光谱技术长期难以突破的
采用密度梯度离心法分离脐血干细胞
利用 3 种质量浓度的聚蔗糖泛影葡胺分离液分离脐血单个核细胞,用细胞计数法、活细胞染色法及流式细胞计数仪分析单个核细胞的表面标志,以探讨密度梯度离心法分离人脐血干细胞分离介质的zui佳浓度,建立临床级干细胞分离应用方案,使用的离心机设备为冷冻离心机 脐血由于其来源容易,所含细胞种类和数
密度梯度离心法试验的注意事项介绍
离心前将样品小心铺放在密度梯度溶液表面,离心形成区带。离心后不同大小、不同形状、有一定沉降系数差异的颗粒在密度梯度液中形成若干条界面清楚的不连续区带。再通过虹吸、穿刺或切割离心管的方法将不同区带中的颗粒分开收集,得到所需的物质。 1、梯度介质应具备足够大的溶解度,以形成所需的密度梯度范围。
台式高速离心机的密度梯度离心法
台式高速离心机的密度梯度离心法:可以同时使样品中几个或全部组份分离,具有很好的分辨率。 1)速率区带法(rate zonal): 根据样品中不同粒子所具有的不同的尺寸大小及沉降速度(S)。大致步骤如下: 在离心管中装入密度梯度溶液,溶液的密度从离心管顶部至底部逐渐增加(正梯度)。 将所
密度梯度离心法分离淋巴细胞的原理
密度梯度离心法分离淋巴细胞的原理是:常用来分离人外周血单个核细胞(PBMC)的分层液比重是1.077±0.001的聚蔗糖(Ficoll)-泛影葡胺(Urografin)(F/H)分层液。Ficoll是蔗糖的多聚体,呈中性,_W水性高,平均分子量为400,000,当密度为1.2g/ml仍未超出正常生理
Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞
测定细胞免疫功能首先要从人或动物外周血或组织中获取有活性的细胞,如淋巴细胞、巨噬细胞、粒细胞等。取得有活性的细胞应根据不同目的,采用不同方法,考虑(1)细胞纯度;(2)细胞获得量;(3)细胞活力;(4)使用方法的简易程度和本室条件等。目前常用Ficoll密度梯度离心法直接分离和纯化外周血单个核细胞。
采用密度梯度离心法分离脐血干细胞
利用 3 种质量浓度的聚蔗糖泛影葡胺分离液分离脐血单个核细胞,用细胞计数法、活细胞染色法及流式细胞计数仪分析单个核细胞的表面标志,以探讨密度梯度离心法分离人脐血干细胞分离介质的zui佳浓度,建立临床级干细胞分离应用方案,使用的离心机设备为冷冻离心机 脐血由于其来源容易,所含细胞种类和数量比较
超速离心法纯化病毒实验——密度梯度离心
实验方法原理病毒的密度与细胞碎片不同,用梯度制备仪制成适宜的介质梯度如蔗糖梯度或 CsCl 密度梯度,将病毒悬液加到密度梯度的上层,进行超速离心,离心管内病毒悬液中的病毒和细胞碎片随其自身密度的大小而下沉或上浮到相等密度梯层中,吸出含有病毒的沉淀带,即可得到相当纯净的病毒。实验材料待纯化的病毒试剂、
Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞
测定细胞免疫功能首先要从人或动物外周血或组织中获取有活性的细胞,如淋巴细胞、巨噬细胞、粒细胞等.取得有活性的细胞应根据不同目的,采用不同方法,考虑 (1) 细胞纯度; (2) 细胞获得量; (3) 细胞活力; (4) 使用方法的简易程度和本室条件等.测定细胞免疫功能首先要从人或动物外周血或组织中获取
超速离心分离技术密度梯度离心法
密度梯度区带离心法是将样品加在惰性梯度介质中进行离心沉降或沉降平衡,在一定的离心力下把颗粒分配到梯度中某些特定位置上,形成不同区带的分离方法。此方法主要依据颗粒与介质间的密度差(ρ-ρ0)不同进行分离的。适用于那些沉降系数相差不大而密度值却有明显差别的颗粒,也就是那些S值相近而ρ值相远的颗粒。惰性梯
等密度离心的定义
等密度离心分离样品主要是根据被分离样品的密度。在这种离心分离方法中,要用介质产生一种密度梯度, 这种密度梯度覆盖了待分离物质的密度,这样,通过离心使不同密度的颗粒悬浮到相应的介质密度区。
什么是等密度离心?
在这种梯度离心中,颗粒的密度是影响最终位置的唯一因素,因此用这种方法分离颗粒,主要是根据被分离颗粒的密度差异。只要被分离颗粒间的密度差异大于1% 就可用此法分离。蔗糖或者甘油(它们的最大密度是1.3g/cm3)通常可用于分离膜结合的细胞器,如高尔基体、内质网、溶酶体和线粒体。在等密度梯度离心中蔗糖或