细胞的离心分离基础和分离实例(八)
结果如下表:成份细胞主要类型细胞总量×106 活性%染色细胞比例%组成%PE1FLEK初始样品E.F13394898162758F1F148018878129/F2F68519453640/沉淀E108931997/8111 注:①E:endothelal Cell ②初始样品取12 月龄鼠肝,二步不连续梯度分离后取上层F:Fat-storing CellP1:Peroxidase E1:EsterraseL:LymphocytesK:Kupffer例10 用离心浮选法从人血中纯化单核白细胞l 离心浮选设备同上述l 浮选前、后处理需要低速低温离心机50ml 甩平转头l 浮选用液:含25mM 葡萄糖及1%(W/V)BSA 的磷酸缓冲液l 酯酶(Esterrase)染色所需设备及试剂l 肝素化(......阅读全文
辨析高速离心机的离心分离方法
制备型超高速离心机的几种分离方法: A.差速离心:逐次增加离心力,每次可沉降样品溶液中的一些组份。 差速离心是一种zui常用的方法。在这种方法中,离心管在开始时装满了均一的样品溶液。通过在一定速度下一定时间的离心后,就可得到两个部份:沉淀和上清液。 通常在*次离心时把大部分不需要的
分析高速离心机的离心分离方法
制备型超高速离心机的几种分离方法: A.差速离心:逐次增加离心力,每次可沉降样品溶液中的一些组份。 差速离心是一种zui常用的方法。在这种方法中,离心管在开始时装满了均一的样品溶液。通过在一定速度下一定时间的离心后,就可得到两个部份:沉淀和上清液。 通常在*次离心时把大部分不需要的大
“质粒DNA超速离心分离”的补充说明
一)用CSCL-E.B.梯度分离大肠杆菌中质粒DNA、染色体DNA、蛋白质及RNA的详细步骤(1) 溶液制备:溶液Ⅰ:50mM葡萄糖,10mM EDTA,25 mM Tris-HCL (PH8.0)。溶液Ⅱ:0.2M NaOH,1%SDS。溶液Ⅲ:3M醋酸钠(PH4.8)TE缓冲液:10 mM Tr
离心分离机的无菌设计与操作
1 无菌下游工艺问题发酵产品的下游工艺通常要求所用的设备能满足特殊的需要,尤其是在浓缩和洗涤病原微生物或对感染敏感的微生物的过程中,要求所使用的工艺是密闭的和绝对安全的。一方面,工艺必须确保产品不被外部的细菌感染;另一方面,工艺必须保证病原微生物不致释放出来。食品工业所需细菌、放线菌培养物的大规模生
生物大分子的离心分离实验(二)
例(3)用CsCl 梯度分离DNA 并测定其组成(% G+C)(i)CsCl 溶液密度D 与溶液中CsCl 的重量百分比浓度P 之间的关系: D=138.11/(137.48-P)(ii) 制备初密度为1.706 克/毫升的梯度液,应按以下要求配置·4.85 克CsCl (分析纯)·50μl ,1.
生物大分子的离心分离实验(一)
一、引言在八十年代以前,生物大分子(特别是核酸、蛋白)用离心方法分离纯化占有很重要的地位。用分析超离心方法测定生物大分子的分子量、沉降系数、扩散系数、微分比容等在生物化学实验中也占有一席之地。八十年代以后,由于离心技术的快速发展(微处理器的引入,变频驱动的完善、转速的提高等等),先进的制备用超速离心
生物大分子的离心分离实验(三)
例(6)用Cs2SO4 及尿素作梯度材料分离生物大分子样品:初步离心后的蛋白-核酸混合液梯度液:3.00g Cs2SO4 2.5ml 8M 尿素(经过混合床去离子处理的)50μl 1.0M Tris-HCl(PH7.4)25μl 0.2M EDTA(PH7.4)1.25ml 样品的水溶液以上各项充分
衡量离心分离机分离性能的重要指标是什么?
衡量离心分离机分离性能的重要指标是分离因数。
血清脂蛋白的快速离心分离法
血清脂蛋白的快速离心分离法 YU.2003.7利用不同容量的角式转头及很容易配制的梯度液,在各种型号的超速离心机上都能得到满意的分离结果。下面举了几个分离实例,实际上还可以应用于各种
血清脂蛋白的快速离心分离法
利用不同容量的角式转头及很容易配制的梯度液,在各种型号的超速离心机上都能得到满意的分离结果。下面举了几个分离实例,实际上还可以应用于各种型号各种容量的固定角式转头。(一) 梯度液A液:11.40gNacl,0.1g EDTA-Na2,置于1000ml量筒中加入500ml重蒸水及1ml 1N Na
离心机用于血液(采血管)的离心分离
血液(采血管)的离心分离收集血液之后,一般是对真空采血管进行离心,真空采血管管内为负压并且密封良好。根据诊断目的的不同,有的时候血液样本也需要进行离心分离处理。这个时候,也需要用到离心机啦。温度对血液样本后续处理方式不同,对温度的要求也不同。角度与离心力因为医院需要处理的样本比较多,大通量的离心处理
离心分离后,怎样洗涤离心试管底部的沉淀
沉淀的洗涤、转移和分离在装有沉淀的离心管中加入适量洗涤液(少量多次),用玻棒充分搅拌,可加热,再离心分离。在洗净沉淀试管中加入少量蒸馏水,搅动沉淀。由于离心机等设备可产生相当高的角速度,使离心力远大于重力,于是溶液中的悬浮物便易于沉淀析出:又由于比重不同的物质所受到的离心力不同,从而沉降速度不同,能
巨噬细胞的分离和纯化
巨噬细胞的分离1)从小鼠、豚鼠或家兔腹腔中分离巨噬细胞1.取6周左右的小鼠(或600克左右的豚鼠,或3公斤左右的家兔),剃去腹部的毛并消毒。腹腔注射1ml(豚鼠20ml,家兔200ml)无菌的液体石蜡或巯基乙酸肉汤或4%淀粉肉汤。3~4天以后收集腹腔细胞。2.如要收集腹腔静置巨噬细胞,不注射刺激物,
超速离心分离技术差速沉降离心法
差速沉降离心法 主要用于组织匀浆液中分离沉降系数相差较大的细胞器的浓缩和粗提。此法是依据各种颗粒的质量、形状和大小等不同,即S值不同,在同一离心加速度作用下,沉降速度上存在着快慢差异而得到分离的。它适用于纯化颗粒间S值相远,沉降系数差异较大的那些颗粒。差速离心首先要选择好颗粒沉降所需的离心力和离心时
稀有细胞和少量细胞的单细胞分离
对于单细胞转录组学,单细胞蛋白组学和单细胞基因组学而言,高效的单细胞获取方式至关重要。传统的流式细胞分选仪是一种常用的细胞分离工具,但是在实际操作过程中一些技术壁垒。除了操作难度高之外,细胞在传统流式中分离时需要经过相当长度的共用管路,从而产生了大量的死体积。为了弥补这些损失,就往往需要用到大量的
稀有细胞和少量细胞的单细胞分离
对于单细胞转录组学,单细胞蛋白组学和单细胞基因组学而言,高效的单细胞获取方式至关重要。传统的流式细胞分选仪是一种常用的细胞分离工具,但是在实际操作过程中一些技术壁垒。除了操作难度高之外,细胞在传统流式中分离时需要经过相当长度的共用管路,从而产生了大量的死体积。为了弥补这些损失,就往往需要用
HPLC基础知识教程(八)
全屏显示表格UV荧光安培质谱蒸发光散射全屏显示表格检测限(g/ml)10-1010-1310-13<10-9g/s10-9池体积(ul)2~10~7<1————梯度洗脱适宜适宜不宜适宜适宜细管径柱难难适宜适宜适宜样品破坏无无无有无
如何分离细胞和细菌
通过离心分开细菌和细胞,相同的时间,细菌需要较高转速才沉积,而细胞只需几百至上千就可沉淀。
干细胞鉴定和分离
干细胞鉴定干细胞的功能是明确的。因此,分离和表征这种独立的细胞群体成为一项具有挑战性的任务。胚胎干细胞(ES)是植入前胚胎的内细胞群体,属于多能干细胞群体。干细胞研究主要有两种技术:一种是在体外成功培养人类胚胎干细胞。另一个重大突破是成人干细胞的侧向分化。干细胞的分离理想的分离干细胞群体应在体内确定
细胞多倍性的应用实例
自然界中显示倍数性的种属称倍性种。在植物中人工诱发多倍体较为简便,有切断法、温度处理以及萘嵌戊烯(acenaphthe-ne)处理等等。特别是秋水仙素更是行之有效的方法,已在实际育种中应用。染色体加倍后对性状的影响是随基因型与环境条件而异,无固定的模式可循。一般在同源多倍体中(4x-6x)细胞与器官
生物酶学基础酶的提取和分离纯化
许多酶都存在于细胞内。为了提取这些胞内酶,首先需要对细胞进行破碎处理。细胞破碎的方法很多,主要包括机械破碎法、物理破碎法、化学破碎法和酶学破碎法等。机械破碎法是指利用捣碎机、研磨器或匀浆器等将细胞破碎开来。物理破碎法是指利用温度差、压力差或超声波等将细胞破碎开来。化学破碎法是指利用甲醛、丙酮等有机溶
离心机离心分离的几种方法及特点
制备型超高速离心机的几种分离方法: A.差速离心:逐次增加离心力,每次可沉降样品溶液中的一些组份。 差速离心是一种zui常用的方法。在这种方法中,离心管在开始时装满了均一的样品溶液。通过在一定速度下一定时间的离心后,就可得到两个部份:沉淀和上清液。 通常在*次离心时把大部分不需要的大
超离心分离法的基本信息介绍
超离心分离法通常指用超速离心机分离高分子的方法。含有高分子的溶液(如核酸和蛋白质的溶液)受到强大的离心力作用时,如果这些高分子物质的密度大于溶液的密度就会沉降下来达到分离的目的。其沉降的速度既与其分子的大小和密度有关,也与溶液的分子密度和粘度及其分子的形状有关。超速离心法也可用来测定高分子的分子
离心机离心分离的几种方法及特点
制备型超高速离心机的几种分离方法:A.差速离心:逐次增加离心力,每次可沉降样品溶液中的一些组份。 差速离心是一种zui常用的方法。在这种方法中,离心管在开始时装满了均一的样品溶液。通过在一定速度下一定时间的离心后,就可得到两个部份:沉淀和上清液。通常在*次离心时把大部分不需要的大粒子沉降去掉。这时所
SRSV-(Small-round-structured-Virus)-小圆结构病毒的离心分离
SRSV会导致食物中毒,症状:腹泻,呕吐,发烧等设备:1. 通用台式或立式高速冷冻离心机(有15ml 角转头及1.5ml 微量转头) 2. 超速离心机:Hitachi CS150GXL微量超速离心机S52ST甩平转头,4×5mlPA管,或落地式超速离心机CP70MX,日立P40ST转头,6×1
成年大鼠心室肌肉细胞的分离和培养实验_分离ARVM细胞
实验材料鼠试剂、试剂盒KH 缓冲液混合气体仪器、耗材对流工作台或层流式超净台乙醚罩冷凝器循环水浴和水浴摇床圈型架蠕动泵台式医用离心机无菌烧杯ColorpHast pH 试纸实验步骤一、ARVM 细胞分离的准备工作1. 准备如下设备及器材:对流工作台或层流式超净台乙醚罩冷凝器循环水浴和水浴摇床带夹的圈
如何将一般动物细胞离心分离速率应为多少转速?
欲回收动物细胞,其离心速率一般为300xg(约1000rpm),5-10分钟,过高之转速,将造成细胞死亡。
最常用的超离心分离法的方法介绍
最常用的有: ①沉降速度法:用超离心法,增加蛋白质溶液的离心强度,当溶液所含蛋白质颗粒大小和形状都相同时,这些颗粒以相同的速度移向管底,并形成清楚的界面;当溶液中有多种大小不同的蛋白质颗粒时,就会有几个界面,用特殊的光学系统可以观察到沉降界面,从而判断出蛋白质的沉降速率。当沉降界面以恒速移动时
小鼠精原细胞的分离和纯化
【摘要】 目的 探讨小鼠精原细胞的分离纯化。 方法 用组合酶消化法制备7~8d小鼠的生殖细胞悬液;用Percoll不连续密度梯度法分离精原细胞。 结果 所获细胞悬液内活细胞、死细胞及细胞团的百分比分别为90.08%、9.92%及8.91%;平均每个睾丸可获得4.136×105个细胞;精原细胞主要分布
淋巴细胞的分离和激化
实验材料全血试剂、试剂盒肝素葡聚糖PBSFicoll-Hypaque仪器、耗材离心机实验步骤1. 收集 10 ml 全血,加入不含防腐剂的肝素(0.2 ml 肝素/10 ml 全血)。2. 在 15 ml 离心管中的肝素化血中加入 1 ml 6%葡聚糖,室温放置 20~30 分钟,沉降红细胞。3.