分子杂交的概念和基本原理
一、分子杂交的概念： 分子杂交（molecular hybridization）指具有一定同源序列的两条核酸单链（DNA或RNA），在一定条件下按碱基互补配对原则经过退火处理，形成异质双链的过程。 利用这一原理，就可以使用已知序列的单链核酸片段作为探针，去查找各种不同来源的基因组DNA分子中的同源基因或同源序列。 二、分子杂交基本原理：（一）DNA变性 ： DNA变性是指双螺旋之间氢键断裂，双螺旋解开，形成单链无规则线团，因而发生性质改变（如粘度下降，沉降速度增加，浮力上升，紫外吸收增加等） 。 1、DNA变性的方法： 1)加热； 2)改变DNA溶液的pH； 3)有机溶剂（如乙醇、尿素、甲酰胺及丙酰胺等）等理化因素。 2、增色效应：DNA在260nm处有最大吸收值，这一特征是由于含有碱基的缘故。在DNA双螺旋结构模型中碱基藏于......阅读全文
血栓调节蛋白的基本介绍和分子结构介绍
基本介绍 血栓调节蛋白（Thrombomodulin，TM）:。与凝血酶结合后可降低凝血酶的凝血活性，而加强其激活蛋白C的活性。由于被激活的蛋白C具有抗凝作用，因此，TM是使凝血酶由促凝转向抗凝的重要的血管内凝血抑制因子。 分子结构 TM为一单链的跨膜糖蛋白,相对分子质量75000,降解二
核酸的变性的变性温度
热变性一半时的温度称为熔点或变性温度，以Tm来表示。DNA的G+C含量影响Tm值。由于G≡C比A=T碱基对更稳定，因此富含G≡C的DNA比富含A=T的DNA具有更高的熔解温度。根据经验公式xG+C =（Tm -69.3）× 2.44可以由DNA的Tm值计算G+C含量，或由G+C含量计算Tm值。
肿瘤标志物及其临床应用（一）
肿瘤是严重威胁人类健康的高发病率和高死亡率性疾病，研究表明，平均每四个死亡病例中就有一个是肿瘤，因此，早期诊断和早期治疗是防治肿瘤与降低死亡率的最有效办法。自1978年Herberman提出肿瘤标志物（tumormarkers，TM）的概念后，许多与肿瘤相关的生化、免疫指标不断被发现，提供了实现肿瘤
应用非标记探针法进行基因分型（三）
高分辨率熔解 在高分辨率熔解仪器HR-1（爱荷华科技，盐湖城，犹他州）上进行分析，将LightCycle毛细管加入HR-1中，0.3℃/s加热。主要的实验中，RET外显子的扩增及非标记探针熔解数据从60℃到95℃采集。主要实验分析了每个外显子的扩增子及探针数据，除了外显子14。因为所有报道的外显子1
肿瘤标志物检测的影响因素
目前，已被发现的肿瘤标志物（TM）有100多种，这些TM检测结果可对患者产生直接影响。在实际工作中，影响TM检测的因素很多，涉及分析前、分析中和分析后各个环节。一分析前影响因素1、临床诊疗措施对TM的影响前列腺按摩、前列腺穿刺、导尿和直肠镜检查后，血液中前列腺特异性抗原（PSA）和前列腺酸性磷酸酶（
通过温度内标提高高分辨熔解曲线中纯合子检测...（二）
表1 比较每个目的基因使用温度内标前后四个重复的Tm。在所有情况下，校准后差异降低。可以看出，校准后标准差和非感兴趣区域差异都降低。 表1.校准对Tm值影响的统计表1. 每个重复盘包含了相同设
PNAS：微生物“暗物质”如何致病？
现代生物学中的一个最新重要发现是，人体中含有比人体细胞多出10倍的细菌细胞。但是，这些细菌对科学家来说仍然是个谜。 据科学家估计，生活在人体内的细菌中有大约一半，因无法在实验室中培养，而几乎不为人所知，也因此科学家称其为“微生物暗物质”。然而，科学家们一直决心要了解更多关于这些不可培养细菌的信
实验室检查中肿瘤标志物检测结果的影响因素
肿瘤标志物是指在恶性肿瘤发生和增殖过程中,由肿瘤细胞的基因表达而合成分泌的或由机体对肿瘤反应而异常产生或升高的,反映肿瘤存在和生长的一类物质，包括蛋白质、激素、酶、多胺、癌基因产物等，存在于病人的血液、体液、细胞或组织中，可用于对肿瘤的辅助诊断、疗效观察、监测复发和预后评价等。因此肿瘤标志物检测的准
dna变性温度与dna的组成有什么关系
对双链DNA进行加热变性，当温度升高到一定高度时，DNA溶液在260nm处的吸光度突然明显上升至最高值，随后即使温度继续升高，吸光度也不再明显变化。若以温度对DNA溶液的紫外吸光率作图，得到的典型DNA变性曲线呈S型(如下图)。可见DNA变性是在一个很窄的温度范围内发生的。通常将核酸加热变性过程中，
DNA变性的融解温度介绍
对双链DNA进行加热变性，当温度升高到一定高度时，DNA溶液在260nm处的吸光度突然明显上升至最高值，随后即使温度继续升高，吸光度也不再明显变化。若以温度对DNA溶液的紫外吸光率作图，得到的典型DNA变性曲线呈S型。可见DNA变性是在一个很窄的温度范围内发生的。通常将核酸加热变性过程中，紫外光
DNA变性的融解温度
对双链DNA进行加热变性，当温度升高到一定高度时，DNA溶液在260nm处的吸光度突然明显上升至最高值，随后即使温度继续升高，吸光度也不再明显变化。若以温度对DNA溶液的紫外吸光率作图，得到的典型DNA变性曲线呈S型(如下图)。可见DNA变性是在一个很窄的温度范围内发生的。通常将核酸加热变性过程中，
使用差示扫描量热法加速优化医用蛋白质制剂的...（二）
在研究溶液中的生物聚合物时使用 Malvern MicroCal™ VP-Capillary DSC（图 2）和Malvern MicroCal VP-DSC 系统。 Malvern MicroCal VP-Capillary DSC 系统专为筛选多个制剂的 Tm 设计，可实现较高的样品处理
浅谈实验室检查中肿瘤标志物检测结果的影响因素
导读：肿瘤标志物是指在恶性肿瘤发生和增殖过程中,由肿瘤细胞的基因表达而合成分泌的或由机体对肿瘤反应而异常产生或升高的,反映肿瘤存在和生长的一类物质，包括蛋白质、激素、酶、多胺、癌基因产物等，存在于病人的血液、体液、细胞或组织中，可用于对肿瘤的辅助诊断、疗效观察、监测复发和预后评价等.肿瘤标志物是指在
肿瘤标志物测定的影响因素
一、分析前影响因素1、临床诊疗措施对TM的影响前列腺按摩、前列腺穿刺、导尿和直肠镜检查后，血液中前列腺特异性抗原（PSA）和前列腺酸性磷酸酶（PAP）可升高。某些药物会影响TM浓度，如抗雄激素治疗前列腺癌时可抑制PSA产生；丝裂霉素、顺珀等抗肿瘤药可导致PSA假性升高；一些细胞毒药物（如5-氟尿嘧啶
应用非标记探针法进行基因分型（四）
外显子10和11：多重突变热点MEN2A和FMTC的主要突变位于外显子10（密码子609、611、618和620）和11（密码子630和634），且野生型半胱氨酸的密码子DNA序列“TGC”发生单核苷酸改变。外显子10和11报道的序列变化>40（表1）。RET10外显子的主要实验包括两个单独的实验和
PCR实用技巧
PCR实用技巧增加PCR的特异性： 1. primers design 这是最重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其它序列退火的primer要符合下面的 一些条件 a. 足够长,18-24bp,以保证特异性.当然不是说越长越好,太长的primer同样会降低特异性,并且降低产量 b. G
PCR的几个实用小技巧
增加PCR的特异性：1. primers design这是zui重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其它序列退火的primer要符合下面的 一些条件1) 足够长,18-24bp,以保证特异性.当然不是说越长越好,太长的primer同样会降低特异性,并且降低产量2) GC% 40%~60
PCR实用技巧
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PCR技术服务PCR的实用技巧
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PCR实用小技巧
增加PCR的特异性：1. primers design这是最重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其它序列退火的primer要符合下面的 一些条件1) 足够长,18-24bp,以保证特异性.当然不是说越长越好,太长的primer同样会降低特异性,并且降低产量2) GC% 40%~60%3
Cancer－Cell:科学家发现能抑制多种肿瘤的酶抑制剂
研究人员最近研发了一种酶抑制剂，显示对多种肿瘤有效，尤其是白血病，乳腺癌和大肠癌。他们的研究重心是c-Myc肿瘤蛋白，它在将近一半的人类肿瘤中表达增强，以及SIRT2--对多种癌症细胞的活力起关键作用的酶。研究人员用一种称为TM的化合物，能在乳腺癌小鼠模型中抑制SIRT2活性，降低c-Myc蛋白
分子杂交基本原理分析
(一)抗原elisa试剂盒DNA变性 ： DNA变性是指双螺旋之间氢键断裂，双螺旋解开，形成单链无规则线团，因而发生性质改变(如粘度下降，沉降速度增加，浮力上升，紫外吸收增加等) 。 1、DNA变性的方法： 1)加热; 2)改变DNA溶液的pH; 3)有机溶剂(如乙醇、尿素、甲酰胺及丙酰胺等)等理化
为何我们只遗传母亲的线粒体？
最近，清华大学薛定教授和香港中文大学姜秉昊教授的联合课题组在线粒体遗传领域取得重要突破。他们以线虫为模式生物发现了调节父系线粒体选择性清除的一个关键机制，即线粒体分裂和融合之间的平衡。这一成果发表在近期的Nature子刊《Nature Communications》上。 众所周知，线粒体在哺乳
核酸分子杂交的概念、基本原理、探针及类型
主要内容：一、分子杂交的概念 二、分子杂交基本原理 （一）DNA变性： 1、DNA变性的方法2、增色效应3、溶解曲线4、融解温度5、影响Tm值的因素。 （二）复性：退火一、分子杂交的概念： 分子杂交（molecular hybridization）指具有一定同源序列的两条核酸单链（DNA或RNA），
DGGE、CGGE和TGGE比较
DGGE、CGGE和TGGE三种方法是基于相同的原理而设计的突变检测方法，它仍均是根据DNA的解链特性而设计。对于同一定序列组成或的DNA片段来说，它具有恒定的解链温度（Tm），但若其序列发生改变时，Tm值亦发生改变，在含有变性因素（变性剂，高温）的凝胶半进行电泳，当其比链解开形成分叉时，电泳迁
DGGE、CGGE及TGGE比较
DGGE、CGGE及TGGE三种方法是基于相同的原理而设计的突变检测方法，它仍均是根据DNA的解链特性而设计。对于同一定序列组成或的DNA片段来说，它具有恒定的解链温度（Tm），但若其序列发生改变时，Tm值亦发生改变，在含有变性因素（变性剂，高温）的凝胶半进行电泳，当其比链解开形成分叉时，电泳迁移的
研究发现代谢型谷氨酸受体激活新模式
C类GPCR结构与功能研究对精神神经系统疾病的新药创制具有重要意义。近日，华中科技大学生命学院教授室刘剑峰团队与中国科学技术大学教授田长麟团队合作，在C类G蛋白偶联受体（GPCR）激活机制研究中取得重要发现，相关研究成果3月2日在Cell Research上在线发表。 谷氨酸是中枢神经系统中
箱式电炉结构
炉膛结构 精心设计和采用最先进的技术是炉体外观新颖、结构合理。外壳采用国标钢材，其外壳喷塑具有耐温、耐久、耐氧化、耐酸、耐缄等优点；精心搭配颜色是产品美观大方和耐用！ 炉膛材料全部采用进口摩根纤维制作而成，炉膛是几块耐火纤维块拼装而成，大大避免了急冷急热裂缝的现象。 （分布在炉膛的左右）。
5羟色胺家族部分受体的配体识别和G蛋白选择调控机制
G蛋白偶联受体（GPCRs）是真核生物中最大的一类膜蛋白，在感知胞外信号和介导胞内信息转导中发挥了重要作用，并参与调控多种生理过程，与人类疾病密切相关，是重要的药物靶标蛋白家族。GPCR与第二信使环磷酸腺苷相关的信号通路中，主要通过刺激型G蛋白（Gs）和抑制型G蛋白（Gi）来区分细胞内不同的信号
如何做好荧光定量PCR实验？（二）
2.4 实时多重PCR探针的选择：多重实时PCR的多种含意有两种：一为选择保守的探针和引物，利用不同的染料标记探针，在检测时可根据荧光的颜色来判定不同的产物。另一种为选择保守的引物，扩增不同长度的目的片段，反应中加入SYBRN染料，最后根据不同目的片段的Tm值来判定不同的物品。多重实时PCR的荧光探