层析技术的应用(六)

(五)聚焦层析法 聚焦层析是一种操作简单、廉价的层析技术。它的原理是根据各种蛋白质的等电点不同进行分离的过程,因此本方法具有高分辨、高度浓缩和高度专一等特点。聚焦层析所用的凝胶首先用高pH溶液平衡,然后用多元缓冲液进行洗脱,多元缓冲液pH呈梯度下降。聚焦层析所用凝胶主要有两种:MONOP和多元缓冲液交换剂(PBE)。其中MONOP是带孔小珠,孔中被带正电荷的胺基填充,适用于高效聚焦层析。多元缓冲液交换剂是一种交换凝胶,适用作普通聚焦层析的介质。各种凝胶性质见表16-8。凝胶名称 pH范围 洗脱MONOP 11-8Pharmalyte 8-10.5PBE 11-8Pharmalyte 8-10.5MONOP 9-6多元缓冲液96PBE 947-4多元缓冲液74PBE947-4多元缓冲液74表16-8 聚焦层析技术数据NONOP可制成两种高效液相柱:MONOP HR5/5(1ml),和MONOP HR5/20(5ml)。使用时根......阅读全文

凝胶过滤层析技术和​常用支持物介绍

支持物是人工合成的交联高聚物,在水中膨胀后成为凝胶。凝胶内为内水层,凝胶周围的水为外水层。控制交联度以形成不同孔径的网状结构。交联度小的孔径大,交联度大的孔径小。凝胶只允许被分离物质中小于孔径的分子进入,大于孔径的分子被排斥在外水层,最先被洗脱下来。而进入孔径的分子也按分子量大小大致分离成不同的区带

层析技术:生物化学实验常用技术(3)

一、基本原理 是指混合物随流动相流经固定相的层析柱时,混合物中各组分按其分子大小不同而被分离的技术。固定相是凝胶。凝胶是一种不带电荷的具有三维空间的多孔网状结构,凝胶的每个颗粒内部都具有很多细微的小孔,如同筛子一样,小的分子可以进入凝胶网孔,而大的分子则被排阻于凝胶颗粒之外

关于荧光免疫层析技术的基本信息介绍

  荧光免疫层析技术是基于抗原抗体特异性免疫反应的新型膜检测技术。该技术以固定有检测线(包被抗体或包被抗原)和质控线(抗抗体)的条状纤维层析材料为固定相,测试液为流动相,荧光标记抗体或抗原固定于连接垫,通过毛细管作用使待分析物在层析条上移动。对于带有多个抗原决定簇的大分子抗原(蛋白、病毒、致病菌等)

层析技术:生物化学实验常用技术(2)

在分配层析中,大多选用多孔物质作为支持物,利用它对极性溶剂的亲和力,吸附某种极性溶剂作为固定相;用另一种非极性溶剂作为流动相。如果把待分离的混合物样品点在多孔支持物上,在层析过程中,非极性溶剂沿支持物流经样品点时,样品中的各种混合物便会按分配系数大小流动相而向前移动。当遇到前方的固定相时,溶于流动相

关于荧光素免疫荧光层析技术的简介

  荧光素是指具有荧光特性的有机染料。1942年Coons等首次报道了异氰酸荧光素标记抗体用于检测鼠组织切片中肺炎球菌抗原分布的研究,由此出了免疫荧光技术。后来,为了改进异氰酸荧光素的性能,Ruggas等合成了性质稳定、毒性较低的异硫氰酸荧光素。自Marshall等改良了荧光抗体标记技术后,荧光免疫

关于亲和层析技术的相关内容

  1、名称简介  在生物分子中有些分子的特定结构部位能够同其他分子相互识别并结合,如 酶与 底物的识别结合、受体与配体的识别结合、 抗体与 抗原的识别结合,这种结合既是特异的,又是可逆的, 改变条件可以使这种结合解除。生物分子间的这种结合能力称为 亲和力。亲和层析就是根据这样的原理设计的 蛋白质

硅胶填料在层析技术中的原理是什么

  一.什么是硅胶:  硅胶是一种高活性吸附材料,属非晶态物质,其化学分子式为mSio2·nH20,,不溶于水和任何溶剂,无毒无味,化学性质稳定,除强碱、氢氟酸外不与任何物质发生反应,各种型号的硅胶因其制造方法不同而形成不同的微孔结构,硅胶的化学组份和物理结构,决定了它具有许多其他同类材料难以取代得

离子交换层析实验离子交换层析技术

离子交换层析实验可应用于:(1)分离纯化蛋白质;(2)分离氨基酸;(3)分离核酸、核苷酸及其它带电荷的生物分子。实验方法原理离子交换层析(Ion Exchange Chromatography简称为IEC)是以离子交换剂为固定相,依据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的

层析技术:生物化学实验常用技术(1)

层析技术是近代生物化学最常用的分离技术之一。它是利用混合物中各组分的理化性质(吸附力、分子形状和大小、分子极性、分子亲和力、分配系数等)的差异,在物质经过两相中,不断地进行交换、分配等过程。任何层析都具有两个相,即固定相和流动相。固定相固定不动,流动相对固定相作单相的相对运动,从而推动样品中各组分通

层析技术(色谱法,Chromatography)概念、分类和操作(3)

柱层析的基本装置及基本操作目前,最常用的层析类型是各种柱层析,下面就简述柱层析的基本装置及操作方法,薄层层析的装置和操作将在后面详细讨论。(1)柱层析的基本装置柱层析的基本装置,如图2-21 。(2)柱层析的基本操作柱层析的基本操作包括以下一些步骤:①装柱柱子装的质量好与差,是柱层析法能否成功分离纯

离子交换层析技术和​常用支持物介绍

支持物是人工交联的带有能解离基团的有机高分子,如离子交换树脂、离子交换纤维素、离子交换凝胶等。带阳离子基团的,如磺酸基(—SO3H)、羧甲基(—CH2COOH)和磷酸基等为阳离子交换剂。带阴离子基团的,如DEAE—(二乙基胺乙基)和QAE—(四级胺乙基)等为阴离子交换剂。离子交换层析只适用于能在水中

关于上转换纳米粒子免疫层析技术的简介

  用低能量的红外或近红外光激发发射出高能量的紫外或可见光。上转换发光大都发生在掺杂稀土离子的化合物中,NaYF4是上转换发光效率最高的基质材料。与荧光染料、量子点相比,上转换纳米粒子毒性低,灵敏度高,稳定性好,可避免由于样品中具有荧光特性基质对检测结果的影响,是理想的荧光标记物之一。

高效液相层析技术的主要类型及其分离原理

根据分离机制的不同,高效液相色谱法可分为下述几种主要类型1 .液 — 液分配色谱法(Liquid-liquid Partition Chromatography)及化学键合相色谱(Chemically Bonded Phase Chromatography)流动相和固定相都是液体。流动相与固定相之间

关于柱层析分离净化法的层析技术介绍

  层析技术又称色谱技术、 色层技术, 该技术可用于定性、 定量和纯化某些物质, 具有分辨率高、 灵敏度高、 选择性好的特点, 在各学科领域广泛应用。层析法的种类很多, 但其原理一致, 即都是利用混合物各组分的理化性质( 吸附力、 分子形状大小、 极性、 亲和力、 分配系数等) 的差异,使各组分以不

层析技术(色谱法,Chromatography)概念、分类和操作(1)

层析技术概述引言层析法又称色层分析法或色谱法(Chromatography),它是在 1903~1906年由俄国植物学家M. Tswett首先提出来的。他将叶绿素的石油醚溶液通过CaCO3管柱,并继续以石油醚淋洗,由于CaCO3对叶绿素中各种色素的吸附能力不同,色素被逐渐分离,在管柱中出现了不同

层析技术(色谱法,Chromatography)概念、分类和操作(2)

3)采用适当的流速,也可使理论塔板的高度降低,增大理论塔板数。太高或太低的流速都是不可取的。对于一个层析柱,它有一个最佳的流速。特别是对于气相色谱,流速影响相当大。②改变容量因子D(固定相与流动相中溶质量的分布比)。一般是加大D,但D 的数值通常不超过10,再大对提高Rs 不明显,反而使洗脱的时

概述荧光标记物种类及荧光免疫层析技术应用

  荧光免疫层析分析方法具有灵敏度高、稳定性好、受自然荧光干扰低等优点,成为食品质量安全快速检测分析研究的热点。用于荧光免疫分析的标记物主要包括荧光素、量子点、上转换纳米粒子等。

侧流免疫层析技术在真菌毒素检测中的应用

    1、侧流免疫层析检测技术    侧流免疫层析检测技术(LFIA) 也称横向流动免疫检测技术,是出现于20世纪60年代初期的一种独特的免疫分析方式,以条状纤维层析材料为固相,借助毛细管的吸附作用使样品在层析材料上移动,其中样品中的待测物与层析材料上一定区域的抗体结合,通过酶促显色反应或

胶体金标记的全定量免疫层析技术的原理

从定性、半定量向全定量是即时检验(POCT)技术发展的一个趋势。全定量的POCT检测技术有多种原理。本文主要介绍胶体金标记的全定量免疫层析技术的原理。一、胶体金标记的全定量免疫层析POCT试剂装置结构示意图及作用 1、    吸收垫:吸收多余液体。2、    PVC底板:提供试剂封装外壳。3、   

膜层析技术――快速去除杂质的灵活解决方案

  上游工艺技术的持续改善已经使蛋白表达水平越来越高,从而使下游产量超过1g/L,甚至达到10g/L。这些前提将直接影响到下游工艺,直至遇到技术瓶颈。然而,目前的趋势,比如使用更高载量、选择性更广的层析填料,以及更多使用一次性技术如膜层析等,将会突破这些瓶颈,使制药行业的快速发展获得强大动

柱层析技术的三上样方法的相关介绍

  上样也有干法和湿法之分:干法就是把待分离的样品用少量溶剂溶解后,在加入少量硅胶,拌匀后再旋去溶剂。如此得到的粉末再小心加到柱子的顶层。干法上样较麻烦,但可以保证样品层很平整。湿法上样就是用少量溶剂(最好就是展开剂,如果展开剂的溶解度不好,则可以用一极性较大的溶剂,但必须少量)将样品溶解后,再用胶

侧流免疫层析技术在真菌毒素检测中的应用

 1、侧流免疫层析检测技术    侧流免疫层析检测技术(LFIA) 也称横向流动免疫检测技术,是出现于20世纪60年代初期的一种独特的免疫分析方式,以条状纤维层析材料为固相,借助毛细管的吸附作用使样品在层析材料上移动,其中样品中的待测物与层析材料上一定区域的抗体结合,通过酶促显色反应或直接使用着色标

蛋白质DNS分析法DNS—Cl(膜层析技术)

一、实验目的1.掌握DNS 分析法测定氨基酸的原理与方法。2.进一步熟悉薄膜层析的操作。二、实验原理荧光试剂二甲氨基萘磺酰氯即DNS—Cl(Dansyl—Cl),能与所有氨基酸的氨基结合,生成荧光物质DNS—氨基酸。DNS—Cl 也能与蛋白质或多肽的游离氨基结合,生成DNS—蛋白质或DNS—肽,经酸

层析技术概念、原理、分类(凝胶层析和离子交换层析)

一.概念利用混和物中各组分理化性质(吸附力、分子形状、大小、分子极性、分子亲和力以及分配系数)的差异,在物质经过两相中进行分离的一种技术。本世纪初(1903年),俄国植物学家M.C.Jber发现并使用这一技术证明了植物的叶子中不仅有叶绿素,还含有其他色素,实际上他使用的吸附层析。现在层系法已成为生化

技术基础篇:侧向流层析技术的分类和优缺点

在POCT的技术中,应用最为广泛的是侧向流层析技术也是lateral flow assay.分类:按照检测物的类别2大类分为免疫层析和核酸层析,在免疫 层析中分为抗体检测和其他检测(抗原、激素等)2个子类。也有按照出结果的方式不同,分为定性和定量两种。还有根据显色物或信号物质不同分为:有色侧流层析、

色层分析的发展历程相关内容

  起步期  在层析技术发展之初,对于一些物质的分离方式都处在比较原始的状态,并且分离的结果也并不是很理想。  bio-rad专家谈到层析技术最初是在1903~1906年由俄国植物学家M.Tswett首先提出来的。  那时,他将叶绿素的石油醚溶液倒入碳酸钙管柱,并继续以石油醚淋洗,由于碳酸钙对叶绿素

生物人体外诊断系列技术研讨会

大会主办方:育成生物人教育培训基地大会支持方:中科院上海嘉定先进技术创新和育成中心体外诊断在疫情期间发挥了重大作用,得益于PCR技术的快速诊断和抗原层析技术的方便筛查,疫情之后,诊断行业往何处走,未来诊断技术的发展趋势如何,为此我们推出系列技术研讨会。从层析技术到PCR以及微流控进行相关技术的深度研

艾滋病试纸的胶体金法

胶体金法(金标)人类免疫缺陷病毒(HIV 1/2)抗体检测试剂盒是应用胶体金免疫层析技术制成的集灵敏性、特异性及操作简便的一步法HIV 1/2抗体定性检测试剂。用于定性检测人血清或血浆样本中的HIV 1型和HIV 2型的特异性抗体,以辅助诊断HIV感染,其阳性结果需用免疫印迹法确认。其检测原理是用H

艾滋病试纸的胶体金法

胶体金法(金标)人类免疫缺陷病毒(HIV 1/2)抗体检测试剂盒是应用胶体金免疫层析技术制成的集灵敏性、特异性及操作简便的一步法HIV 1/2抗体定性检测试剂。用于定性检测人血清或血浆样本中的HIV 1型和HIV 2型的特异性抗体,以辅助诊断HIV感染,其阳性结果需用免疫印迹法确认。其检测原理是用H

你必须了解的水产品兽药残留知识及快检仪器

  水产品药物添加问题由来已久,究竟那些是违禁的水产品添加药物,这些药物对人体又有着怎样的危害?有什么快检设备能够快速检测水产品的兽药残留的吗?下面为您详细介绍:  常见的水产品违禁药物,分别是呋喃类、氯霉素、孔雀石绿等药物。  (1)呋喃唑酮:是一种硝基呋喃类抗生素,可用于治疗细菌和原虫引起的痢疾