流式细胞术检测人和小鼠Th细胞亚群(二)

2 不同浓度的PMA刺激后人T淋巴细胞CD4、CD8和CD3的表达。24孔细胞培养板中,每孔加入约5×105个细胞,加入RPMI 1640培养基至总体积1ml。加入不同浓度的PMA(10ng、20ng和50ng终浓度)和500ng/ml Ionomycin共同刺激人外周血单个核细胞,同时加入0.7µl Golgistop,37 ℃ CO2孵箱刺激4h。收集单个核细胞,分为三部分,分别加入CD8-CYC、CD4-CYC、CD3-APC单抗各10ul,室温避光孵育30min。加入红细胞裂解液(FACS Lysing Solution)1ml裂解残余红细胞,2ml PBS洗涤细胞一次。流式细胞仪(FACSCalibur,Becton Dickinson)检测细胞,Cellquest软件获取分析细胞,每个检测获取10000个细胞。采用前向角(FSC)和侧向角(SSC)散射光散点图设门区分淋巴细胞,以直方图分别表示CD......阅读全文

流式细胞术检测人和小鼠Th细胞亚群(二)

2 不同浓度的PMA刺激后人T淋巴细胞CD4、CD8和CD3的表达。24孔细胞培养板中,每孔加入约5×105个细胞,加入RPMI 1640培养基至总体积1ml。加入不同浓度的PMA(10ng、20ng和50ng终浓度)和500ng/ml Ionomycin共同刺激人外周血单个核细胞,同时加入

流式细胞术检测人和小鼠Th细胞亚群(三)

2 不同时间的PMA刺激对小鼠外周血T淋巴细胞抗原表达的影响。PMA刺激8h后CD4阳性T淋巴细胞的表达没有明显下降。PMA刺激12h后,CD4阳性T淋巴细胞的表达明显下降。而CD8表达在8h和12h均没有明显下降。典型的检测结果见图2。图2 不同时间的PMA刺激对小鼠外周血T淋巴细胞抗原表达的影响

流式细胞术检测人和小鼠Th细胞亚群(一)

早在1986年Mosmann等[1]依据小鼠分泌的细胞因子谱不同首次将Th细胞分为Th1和Th2两个功能不同的独立亚群。Th1细胞主要分泌IL-2、、IL-12、IFN-γ和TNF- α等细胞因子,介导与细胞毒和局部炎症有关的免疫应答,参与细胞免疫及迟发型超敏反应。Th2细胞主要分泌IL-4、I

流式细胞术检测人和小鼠Th细胞亚群(四)

从Rostaing等[2]发表流式细胞术检细胞内细胞因子的方法后,陆续有人研究了流式细胞术检测细胞内因子方法的可行性及重复性等问题。虽然活化T淋巴细胞有各种各样的方法,如:PMA、PHA、Con A、CD3、CD2和CD28等。但是目前公认的较好的方法仍然是PMA和钙离子载体的联合刺激。研究

流式细胞术检测淋巴细胞亚群操作规程

一、目的规范流式细胞术检测淋巴细胞亚群的实验操作。二、背景知识T细胞亚群变化的临床意义主要表现在肿瘤、自身免疫性疾病中。在感染性疾病中,因为CD4+T细胞是辅助、诱导T细胞的标志,CD4+T细胞下降常见于某些病毒感染性疾病,如AIDS、巨细胞病毒感染、瘤型麻风。而CD4+T细胞长期低于正常水平,常提

探究免疫细胞的家族成员Th亚群(二)

04 Tr1   1997年,Groux等[7]发现了一类由IL-10诱导产生的新CD4+T亚群,该亚群能在体内抑制抗原特异性免疫反应并主动下调病理免疫应答,被称之为Tr1细胞。因Tr1细胞不表达Foxp3而区别于经典的Treg。 IL-27和IL-21协同作用,激活 STA

10.2流式细胞法の淋巴细胞亚群检测(二)

一.淋巴细胞亚群的临床意义通过T淋巴细胞亚群的检测可了解在不同情况下体内免疫功能状态,辅助临床疾病的诊断,探索疾病的发病机理、病程、预后,监测、指导临床治疗方案。二.淋巴细胞亚群的应用方向三.流淋巴细胞亚群

流式细胞仪三色法检测外周血Th细胞亚群培养方案的研究

  摘 要:目的 改进流式细胞仪三色法检测外周血Th细胞亚群的刺激培养方案。  方法 外周全血经RPMI1640培养液和终浓度为25μg/L的PMA、1 mg/L的Ionomycin、20μg/的Monensin培养2 h后,用流式细胞仪分别检测CD4、CD69阳性细胞及CD3阳性细胞表达IFN-γ

流式细胞仪三色法检测外周血Th细胞亚群培养方案的研究

  摘 要:目的 改进流式细胞仪三色法检测外周血Th细胞亚群的刺激培养方案。  方法 外周全血经RPMI1640培养液和终浓度为25μg/L的PMA、1 mg/L的Ionomycin、20μg/的Monensin培养2 h后,用流式细胞仪分别检测CD4、CD69阳性细胞及CD3阳性细胞表达IFN-γ

流式细胞术急性分离小鼠小胶质细胞

实验步骤1. 小鼠用pH值7.4,0.1M PBS彻底穿心灌注。2. 用剪刀去头。3. 剥开头骨的软组织。4. 除去下颌骨。5. 除去头骨延髓到上颌骨之间的组织。6. 手术剪刀,取出头骨顶部,顺时针方向切割,开始和结束于右后鼓膜钩。7. 舀出大脑,维持组织的完整性。8. 立即将脑组织置于预冷的流式细

流式细胞术急性分离小鼠小胶质细胞

实验概要本文主要讲述了:从成年小鼠脑中分离单细胞,制成单细胞悬液,我们一个单细胞分离成单细胞悬液,除去髓鞘碎片,然后染色标记,以确定小胶质细胞的成分。细胞被固定,在多色流式细胞仪上读取。实验步骤1. 小鼠用pH值7.4,0.1M PBS彻底穿心灌注。 2. 用剪刀去头。 3. 剥开头骨的软组织。 4

流式细胞术分析外周血淋巴细胞亚群在儿科的临床

背景流式细胞术检测T、B、NK淋巴细胞亚群已较为广泛的应用于儿科临床许多疾病涉及儿童相应免疫功能异常临床工作中更有效的理解和应用流式细胞术以评估儿童的免疫状况,指导疾病的诊断、治疗还缺乏系统的学习材料尤其是临床一线的儿科医务工作者对流式细胞术的临床应用更有待进一步加强认识和学习。检测对象原则:免疫功

流式细胞术检测细胞凋亡

实验概要Provides a rapid and convenient assay for apoptosis. 实验原理Apoptosis  is a carefully regulated process of cell death that occurs as a normal  part o

探究免疫细胞的家族成员Th亚群(一)

CD4+ T细胞是一群高度异质性细胞,自1986年Mosmann等揭开了Th1、Th2亚群的神秘面纱后,其他科学家又陆续发掘了Th3、Treg、Tr1、Tfh、Th17、Th9和Th22等CD4+ 辅助性T(Th)细胞亚群。Th各亚群之间相互协调,共同发挥免疫调节作用,维持机体稳态。Th细胞亚群比例

流式细胞术检测细胞的原理

流式细胞术检测细胞的原理主要包括以下几个方面:细胞悬液制备:将待检测的细胞制成单细胞悬液。荧光标记:使用特异性的荧光染料或荧光标记的抗体与细胞内或细胞表面的特定成分结合。流体动力学聚焦:细胞悬液被压力驱动进入流动室,在鞘液的包裹下,细胞逐一排列成单列,以极快的速度逐个通过检测区。激光照射:当细胞通过

流式细胞术应用-|-小鼠脾细胞表型分析简便操作

实验简介脾脏是机体最大的免疫器官,含有大量的淋巴细胞和巨噬细胞,是机体细胞免疫和体液免疫的中心,ft 机体免疫失衡时,免疫细胞的数量和比例都会发生变化,流式细胞仪能够直接检测出该变化的发生。该实验通过一个优化设计的 8 色方案,检测出了小鼠脾脏中 T、B 细胞亚群以及 FOXp3 的表达,从图中可以

流式细胞术应用-|-小鼠脾细胞表型分析简便操作

实验简介脾脏是机体最大的免疫器官,含有大量的淋巴细胞和巨噬细胞,是机体细胞免疫和体液免疫的中心,ft 机体免疫失衡时,免疫细胞的数量和比例都会发生变化,流式细胞仪能够直接检测出该变化的发生。该实验通过一个优化设计的 8 色方案,检测出了小鼠脾脏中 T、B 细胞亚群以及 FOXp3 的表达,从图中可以

什么是流式细胞术检测

又称荧光激活细胞分选法,一种细胞分选或分析技术。即以荧光素标记抗体结合相应细胞,用激光束激发单行流动的细胞,根据细胞所携带荧光(强度或类别)进行分选或分析。

什么是流式细胞术检测

又称荧光激活细胞分选法,一种细胞分选或分析技术。即以荧光素标记抗体结合相应细胞,用激光束激发单行流动的细胞,根据细胞所携带荧光(强度或类别)进行分选或分析。

流式细胞术的检测原理

流式细胞术的检测原理主要基于以下几个方面:液流系统:细胞样本被制成单细胞悬液,通过一定压力被注入流动室,在鞘液的包裹下,细胞排成单列,逐个快速通过激光检测区。光学系统:通常使用氩离子激光器或其他类型的激光器作为光源。激光照射到细胞后,会产生散射光和荧光。前向散射光(FSC):与细胞的大小有关,反映细

10.2流式细胞法の淋巴细胞亚群检测(四)

检测对象选择原则上免疫功能受损者均应常规评估淋巴细胞亚群。(一)免疫防御功能受损者易发生感染,这种感染的特点是反复、严重、多种病原体或特殊病原体的感染,以及常规治疗效果不佳的感染。1.反复感染:感染次数和频率过高,超出正常人群,因感染的部位不同,具体反复的次数或频率难以给出参考标准旧。2.严重感染:

10.2流式细胞法の淋巴细胞亚群检测(三)

四.流式细胞亚群的临床指南(节选)五.流式细胞亚群儿科临床应用共识(节选)

10.2流式细胞法の淋巴细胞亚群检测(一)

淋巴细胞亚群检测 今天小编分享的是第10.2部分,流式细胞法淋巴细胞检测。淋巴细胞亚群节选《淋巴细胞亚群和流式细胞术》节选《流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群指南》来源于骨髓的淋巴样干细胞,在胸腺中成熟的淋巴细胞,故称胸腺依赖性淋巴细胞(thymus-dependentlymphocyte)

流式细胞术检测细胞的应用介绍

流式细胞术检测细胞的结果在以下众多研究领域都有广泛应用:免疫学:分析免疫细胞的表型,如 T 细胞、B 细胞、NK 细胞等表面标志物的表达,评估免疫细胞的活化状态和分化阶段。检测细胞因子的分泌,研究免疫细胞的功能。进行免疫细胞的分选,用于后续的功能研究或细胞治疗。肿瘤学:肿瘤细胞的鉴定和分型,检测肿瘤

流式细胞检测

技术原理       流式细胞技术(flow cytometry,FCM)是利用流式细胞仪进行的一种单细胞定量分析和分选技术。是一种在液体系统中,测定单个细胞或细胞器的生物、物理和化学特性,并根据这些特性将所需要的细胞或细胞器进行定量分析和分选的技术。它是一种可以检测细胞或者生物学颗粒的多种特性的技

流式细胞术

一. 流式细胞术概述流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)是七十年代发展起来的高科学技术,它集计算机技术、激光技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学于一体, 同时具有分析和分选细胞功能。它不仅可测量细胞大小、内部颗粒的性状,还可检测细胞表面和细胞浆抗原、细胞内DNA、RNA含量等,可对

流式细胞术检测细胞的原理是什么?

流式细胞术检测细胞的原理主要包括以下几个方面:细胞悬液制备:将待检测的细胞制成单细胞悬液。荧光标记:使用特异性的荧光染料或荧光标记的抗体与细胞内或细胞表面的特定成分结合。流体动力学聚焦:细胞悬液被压力驱动进入流动室,在鞘液的包裹下,细胞逐一排列成单列,以极快的速度逐个通过检测区。激光照射:当细胞通过

小鼠模型BhTNFA/hIL17A与银屑病的治疗新途径

  咣咣咣...各位看官晚上好呀,真是好久没有灌输营养知识啦,小编甚是想念这个步调,想必大家也是很希望自己的2020年硕果累累,猜猜看今天小编带来什么样的惊喜呢,那就是B-hTNFA/hIL17A 小鼠。   建立B-hTNFA/hIL17A小鼠模型,有助于推进以TNF-α和 IL-17A为治疗靶

流式细胞术的检测样本有哪些?

流式细胞术的检测样本类型多样,常见的包括:外周血:包括全血或经过分离处理的白细胞。骨髓:常用于血液系统疾病的诊断和监测。组织细胞悬液:例如实体瘤组织经过酶消化处理后制成的单细胞悬液。培养细胞:如细胞系、原代培养细胞等。脑脊液:可用于检测其中的免疫细胞或肿瘤细胞。胸水、腹水:分析其中的细胞成分,辅助诊

流式细胞术检测样品推荐制备方法

A. 直接标记抗体(FITC标记抗体):(1) 收集1×106个细胞,800rpm离心5min,4℃以上冷PBS洗一次。(2) 用4%多聚甲醛1ml室温固定40分钟,800rpm离心5min去上清。加2ml PBS重悬洗涤细胞,800rpm离心5min。(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重悬