测序常见问题及其分析

1、PCR 产物测序时出现重叠峰问题图1(模板中有碱基缺失,往往是单一位点(1-1)或两个位点(1-2)碱基缺失导致测序结果移码)解决方法:将PCR 产物克隆到质粒(如T 载体)中挑单克隆测序,或将PCR 产物进行PAGE纯化(至少琼脂糖充分电泳后切胶纯化)后再进行测序。问题图2(PCR 产物不纯,含部分序列一致的两种以上的片段,长度不一)解决方法:主要原因是PCR 产物没有纯化,含有部分序列一致的两种以上长度不一的片段,将PCR 产物进行PAGE 纯化(至少琼脂糖充分电泳后切胶纯化)后再进行测序,便可解决。问题图3(测序引物有碱基缺失)测序引物有碱基缺失(一般是引物的5''''''''端缺失),和模板的碱基缺失即图1 有些类似,所不同的是模板碱基缺失一般是在一段正常测序序列后才出现移码,而引物碱基缺失的话,则从测序一开始就出现移码,表面在图形上便是一开始就是严重的......阅读全文

测序结果的分析

测序都是从5'端进行的,正向和反向测序是指对DNA的两条互补链分别测序,通常两个方向测序结果经校读后完全一致才能认为得到可靠结果。生工测序结果一般都提供两个文档,一个是TEXT的序列文档,一个是用Chromas软件打开的ABI文档。 1.寻找引物 http://blast.ncbi.n

水质分析常见问题

水质分析常见问题水质分析又称水化学分析。即用化学和物理方法测定水中各种化学成分的含量。水质分析过程中常见的问题有哪些呢?01、BOD缓冲剂液化了还能用吗?答:BOD缓冲剂时间稍长后会出现液化的现象,这是正常情况,不影响使用。02、我们测氨氮,是以氮元素计还是以铵根离子计?答:氨氮是指水中以游离氨和铵

水质分析常见问题

15、测总磷,洗衣液稀释100倍,加热后水样变黄色,对测量结果有没有影响?答:消解后如果水样没有颜色,则不干扰实验结果。水中有颜色的物质会在消解时被消解成无色的,不影响测量结果。16、连华5B-3F水质测定仪如何恢复出厂设置?答:仪器在关闭的状态,一手按住“校正”键,一手打开开关,待屏幕上显示“99

水质分析常见问题

19、含氯酸钠废水COD如何检测?答:含氯酸钠废水的COD检测水样的原水COD很高,用户使用了氯酸钠来处理,氯酸钠具有氧化性,能降低COD,但这种废水,使用正常方法无法检测,经过查找资料及连华技术人员的建议,我们进行了方法测试,找到解决方案。1)取2.5ml水样,加入4.8ml的E试剂,注意速度不要

水质分析常见问题

21、BOD缓冲剂液化还能用吗?答:BOD缓冲剂时间稍长后会出现液化的现象,这是正常情况,不影响使用。22、仪器测总氮时空白和标液正常,测水样显示(9999)什么原因?答:仪器测标样没问题,仪器一般不会有问题,可能是水样浓度太高需要稀释,总氮直测范围0.05-10mg/L,275nm波长下的吸光度尽

水质分析常见问题

24、测定cod用密封管消解行不行?答:可以的,但是建议使用敞口管消解。密封消解时如果密封盖没有拧紧,在颠倒摇匀的时候,可能会让溶液洒出,导致测值结果不准,甚至可能会造成人身伤害;部分水样在消解时会释放大量的气体,此种水样不可密封消解,如水里的次氯酸根太高,消解时会释放出大量氯气,密封消解会导致消解

水质分析常见问题

24、测定cod用密封管消解行不行?答:可以的,但是建议使用敞口管消解。密封消解时如果密封盖没有拧紧,在颠倒摇匀的时候,可能会让溶液洒出,导致测值结果不准,甚至可能会造成人身伤害;部分水样在消解时会释放大量的气体,此种水样不可密封消解,如水里的次氯酸根太高,消解时会释放出大量氯气,密封消解会导致消解

水质分析常见问题

26、配总磷过硫酸钾,由于不好溶,加塞子水浴加热到了10秒左右,塞子不是很紧,过硫酸钾还能使用吗?答:如果进水不建议使用,可以做标准溶液试一试。过硫酸钾不好溶可以多搅拌或超声,不建议加热,控制不好温度过高后会导致过硫酸钾失效。另过硫酸钾最佳保存温度25-30℃,冷藏容易结晶。27、用3B做甲醛之前做

水质分析常见问题

05、做总磷实验时,过硫酸钾结晶了,影响检测结果吗,该怎么解决?答:过硫酸钾配制时较难溶解,使用超声波帮助其溶解。如果没有超声波,尤其是冬季室温较低,可以加热使其溶解(温度不能超过60℃,否则过硫酸钾会分解),放冷后会有析出,因为溶液为过饱和,再加热溶解是可以使用的,不影响总磷的测定。06、请问在做

芯片常见问题分析

1 芯片实验和定量PCR的优劣比较?   基因表达谱芯片实验可以对大量基因一次性进行定量研究,定量PCR则对大量基因需逐一进行定量研究。 2 在芯片制作过程中的PCR原液是否可以为客户保存?   可以抽干冷冻保存一年。 3 可否用DNA和芯片杂交?   不可以,因为芯片上的样品是cDNA而真核基因D

水质分析常见问题

13、请问做氨氮实验时,为什么加入N3试剂出现大量白色浑浊,加入N2试剂后下层红色上层青色不断有小气泡上升?答:钙镁离子高,应做絮凝沉淀预处理。水样带色或浑浊以及含其他一些干扰物质,影响氨氮的测定。因此,在分析时需做适当的处理。对较清洁的水,可采用絮凝沉淀发;对污染严重的水或工业废水,则用蒸馏法消除

水质分析常见问题

08、请问BOD营养盐有黄色不溶物正常吗?答:正常,营养盐配好是淡黄色不完全溶解的溶液,用前需摇匀。09、请问N2试剂前一天配出来没什么问题,为什么放一天后变棕黄色变浑?答:N2试剂配好后应转移到聚乙烯瓶中密封、避光、低温储存。如果放到矿泉水瓶内,时间稍长会出现变质。如果未密封保存,空气中的有机气体

水质分析常见问题

11、请问定量器为什么吸不起来?答:定量器内有两个玻璃柱,吸液时弯头附近玻璃柱会将底部封死,溶液会吸上来;排液时下面玻璃柱会将底部封死让溶液从弯头排出。两个玻璃柱相当于两个单向阀。新定量器使用时吸不上来就是弯头附近玻璃柱底部没完全密封,可用手指轻弹几下或用洗耳球将溶液吸到弯头玻璃柱处就可以了。12、

eds分析常见问题

  Q1:能谱的缩写是EDS还是EDX?  开始的时候能谱的缩写有很多,比如EDS,EDX,EDAX等。ED就是Energy Dispersive,后面因为X-ray Analysis和Spectrum这几个词的不同用法,导致了缩写的不同。而且相应的汉译也有很多,比如能量色散谱,能量散射谱等等。不过

电泳仪常见问题及其解决方法介绍

一、电泳仪的输出达不到设定值 答:电泳仪的输出值状态遵“循欧姆定律”:电压U=电流I×(电泳槽)电阻R     电阻R相对不变的情况下,U、I、P(功率P=电流I×电压U)中任意1个参数恒定,其他参数也随之恒定;而任意1个参数变化,其他参数也随之正比变化。    如果电泳仪的输出电压U达不到预置值,

工业气相色谱仪常见问题及其检修

气相色谱仪结构复杂、条件设置多、恢复准备时间长等原因,在使用过程中经常会出现各种异常情况。不针对病因进行维护,就会导致严重的后果。下面就介绍一下气相色谱仪在应用中易发生的异常情况及其检修。一、进样后不出色谱峰的故障:气相色谱仪在进样后检测信号没有变化,仪不出峰,输出仍为直线。遇到这种情况的时候,应按

电泳仪常见问题及其解决方法介绍

 电泳仪常见问题及其解决方法介绍 一、电泳仪的输出达不到设定值 答:电泳仪的输出值状态遵“循欧姆定律”:电压U=电流I×(电泳槽)电阻R 电阻R相对不变的情况下,U、I、P(功率P=电流I×电压U)中任意1个参数恒定,其他参数也随之恒定;而任意1个参数变化,其他参数也随之正比变化。 如果电泳仪的输出

免疫组化常见问题及其解决办法

1、 一抗从4度拿出后,为什么要进行37度复温?(1)一方面,防止切片从4度直接放入PBS易脱片;(2)另一方面,使抗原抗体结合更稳定。一般不需要,但对表达较弱的抗原可能有用,4度和37度时分子运动方式不同,前者分子碰撞机率和运动速度小于后者,后者结合更快,但敏感性也提高了并易造成非特异染色。(3)

细胞培养常见问题的原因及其解决的办法

001.问:要怎么样复苏细胞?答:细胞复苏需要准备一个37℃水浴锅、手套、镊子,以及防护眼镜。戴上手套,用镊子夹住液氮罐中拿出的冻存管,然后快速在37℃水浴锅里融解细胞。防护眼镜可以防止液氮罐里刚刚拿出来的管子液氮爆炸…… 002.问:培养基不够用,我能不能换一下细胞培养基啊?答:千万别这么做,细胞

基因测序市场行业分析

  基因测序市场究竟有多火,我已找不到任何一个词语去形容,据统计,仅中国,从事基因领域的相关企业就有超过600家了。前几天从一则消息上了解到就连从事软件开发的苹果、微软、IBM等国际巨头,居然也开始将业务触及到基因领域。那么,在经济迅猛发展的当代中国,基因测序行业到底谁主沉浮?以下深度好文将能告诉你

环状-RNA-测序案例分析

案例:以结肠癌,卵巢癌,特发性肺纤维化及正常的人组织为例探讨 circular RNAs 的富集与增殖的相关性 背景:最新研究表明,circular RNAs 大量存在,是构成生物体 RNA 网络的一部分,而且研究者们推测 circular RNAs 与 miRNAs 一样具有生物学功能。 目的

如何分析DNA测序结果

Interpreting DNA Sequencing Results Evaluating ChromatogramsMany problems with sequencing results are not recognized by viewing the text file alone. T

PCR产物测序结果分析

pcr产物测序的最大风险是有在凝胶上看起来的一个条带,实际上有多个分子。也就是说长度相似的分子有可能在电泳的时候只有一条带。如果只是进行pcr产物回收,没有进行凝胶分离的过程的话,东西可能更多了。问题就在于,如果出现双峰或者多峰,这个样品就白送了,什么也结果也没有。特别你现在用的还是简并引物,本身目

PCR克隆常见问题分析

    1、克隆PCR产物的最优条件是什么?    最佳插入片段:载体比需实验确定。1:1(插入片段:载体)常为最佳比,摩尔数比1:8或8:1也行。应测定比值范围。连接用5ul 2X连接液, 50ng质粒DNA,1Weiss单位的T4连接酶,插入片段共10ul。室温保温1小时,或4℃过夜。在

TA克隆常见问题分析

现象可能原因解决方案 转化后无菌落生长 感受态细胞已经失效用pUC18质粒进行转化,确认细胞的感受态效率。1ng pUC18质粒至少应得到1000个以上的转化子。如有问题,重新制备感受态细胞。 平板所用抗性不对pBS-T载体为amp抗性,工作浓度 100 ug/ml 连接中使用了不恰当的vector

PH计常见问题分析

常见问题及解决方案1.同一样品,两次测量的 pH值不一样?温度变化或样品本身发生了化学反应,都会引起 pH值的变化。所以,应尽量保持温度一致,并且避免化学反应。2.同一样品,同时在两台 pH计上测量,读数不一致?由于两台 pH计的校正条件不一样(如,不同时间做的校正),造成测量值有差异。所以要用同一

质谱分析及其应用

质谱分析本是一种物理方法,其基本原理是使试样中各组分在离子源中发生电离,生成不同荷质比的带正电荷的离子,经加速电场的作用,形成离子束,进入质量分析器。在质量分析器中,再利用电场和磁场使发生相反的速度色散,将它们分别聚焦而得到质谱图,从而确定其质量。第一台质谱仪是英国科学家阿斯顿(F.W.Aston,

分析误差及其消除方法

第一节 准确度和精密度在任何一项分析中,我们都可以看到用同一种方法分析,测定同一样品,虽然经过多次测定,但是测定结果总不会是完全一样,这说明测定中有误差。为此我们必须了解误差的产生原因及其表示方法,尽可能地将误差减小到最小,以提高分析结果的准确度。一、准确度与误差准确度是指测得值与真值之间的符合程度

SDSPAGE凝胶电泳常见问题及其解决方案

SDS-PAGE凝胶电泳常见问题及其解决方案