λ噬菌体的大规模培养(低倍数感染)实验
实验方法原理 λ 噬菌体的大量制备可通过低倍数感染细菌培养物或高倍数感染这两种方法获得。低倍数感染后,培养物立即被转接至大体积培养物中。因为在最初细菌培养物中只有小量的细胞被感染,所以转接后的细菌培养物中的未感染细胞在随后的数小时内将进一步分裂生长。实验材料 λ 噬菌体原种试剂、试剂盒 氯仿SM仪器、耗材 NZCYMSorvall SS-34或相当型号实验步骤 一、材料1. 缓冲液和溶液氯仿,SM。2. 培养基NZCYM3. 离心机和转子Sorvall SS-34或相当型号。4. 载体和菌株高滴度的 λ 噬菌体原种二、方法1. 接种大肠杆菌适宜菌株的单菌落至分装在 500 ml 锥形瓶的 100 ml NZCYM 中,37℃ 剧烈振荡培养过夜。2. 测定培养物的 OD600 值,以 1OD600=1X109 个细胞/ml 计算细胞浓度。3. 取 4 份样品,每份含 1010 个细胞,4000 g ( 5800 r/min Sor......阅读全文
λ噬菌体的大规模培养(低倍数感染)实验
实验方法原理 λ 噬菌体的大量制备可通过低倍数感染细菌培养物或高倍数感染这两种方法获得。低倍数感染后,培养物立即被转接至大体积培养物中。因为在最初细菌培养物中只有小量的细胞被感染,所以转接后的细菌培养物中的未感染细胞在随后的数小时内将进一步分裂生长。实验材料 λ 噬菌体原种试剂、试剂盒 氯仿SM仪器
λ噬菌体的大规模培养(低倍数感染)实验
实验方法原理 λ 噬菌体的大量制备可通过低倍数感染细菌培养物或高倍数感染这两种方法获得。低倍数感染后,培养物立即被转接至大体积培养物中。因为在最初细菌培养物中只有小量的细胞被感染,所以转接后的细菌培养物中的未感染细胞在随后的数小时内将进一步分
λ噬菌体的大规模培养(低倍数感染)实验
λ 噬菌体的大量制备可通过低倍数感染细菌培养物或高倍数感染这两种方法获得。低倍数感染后,培养物立即被转接至大体积培养物中。因为在最初细菌培养物中只有小量的细胞被感染,所以转接后的细菌培养物中的未感染细胞在随后的数小时内将进一步分裂生长。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理λ
λ噬菌体的大规模培养:低倍数感染
材料:缓冲液和溶液:SM氯仿培养基:NZCYM载体和菌株:高滴度的λ噬菌体原种离心机和转子:Sorvall SS-34或相当型号专用设备:略方法:1、 接种大肠杆菌适宜菌株的单菌落至分装在500ml锥形瓶的100mlNZCYM中,37℃剧烈振荡培养过夜。2、 测定培养物的OD600值,以1OD
用甲酰胺从大规模培养物中提取λ噬菌体DNA实验
实验方法原理 可用甲酰胺代替 SDS/蛋白酶 K 将纯化的噬菌体颗粒去除外壳。这种方法虽然不是很有效,但在某种意义上它比以前的操作方法更快。实验材料 限制性内切核酸酶λ 噬菌体颗粒试剂、试剂盒 EDTA乙醇甲酰胺NaClTETris-Cl仪器、耗材 琼脂糖凝胶硼硅酸盐巴斯德吸管实验步骤 一、材料1.
用甲酰胺从大规模培养物中提取λ噬菌体DNA实验
实验方法原理 可用甲酰胺代替 SDS/蛋白酶 K 将纯化的噬菌体颗粒去除外壳。这种方法虽然不是很有效,但在某种意义上它比以前的操作方法更快。 实验材料 限
用甲酰胺从大规模培养物中提取λ噬菌体DNA实验
可用甲酰胺代替 SDS/蛋白酶 K 将纯化的噬菌体颗粒去除外壳。这种方法虽然不是很有效,但在某种意义上它比以前的操作方法更快。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理可用甲酰胺代替 SDS/蛋白酶 K 将纯化的噬菌体颗粒去除外壳。这种方法虽然不是很有效,但在某种意义上它比以前的操
λ噬菌体的铺平板培养实验
实验方法原理 噬菌斑起源于单个噬菌体颗粒对单个细菌的感染。第一次感染后合成的子代病毒颗粒吸附和感染邻近细菌,后者依次释放另一代子代病毒颗粒。如果细菌生长在半固体培养基(如含琼脂糖或琼脂)上,这种子代病毒颗粒的扩散是有限的。
λ噬菌体的铺平板培养实验
噬菌斑起源于单个噬菌体颗粒对单个细菌的感染。第一次感染后合成的子代病毒颗粒吸附和感染邻近细菌,后者依次释放另一代子代病毒颗粒。如果细菌生长在半固体培养基(如含琼脂糖或琼脂)上,这种子代病毒颗粒的扩散是有限的。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理噬菌斑起源于单个噬菌体颗粒对单个
λ噬菌体的铺平板培养实验
实验方法原理 噬菌斑起源于单个噬菌体颗粒对单个细菌的感染。第一次感染后合成的子代病毒颗粒吸附和感染邻近细菌,后者依次释放另一代子代病毒颗粒。如果细菌生长在半固体培养基(如含琼脂糖或琼脂)上,这种子代病毒颗粒的扩散是有限的。实验材料 λ 噬菌体原种大肠杆菌菌株试剂、试剂盒 MgSO4SM 和 SM+
用蛋白酶K和SDS从大规模培养物中提取λ噬菌体DNA实验
实验方法原理 通过一种有效的蛋白酶(如蛋白酶 K ) 的消化作用及随后的酚:氯仿抽提,就能从大规模制备的 λ 噬菌体中很好地分离到 DNA。该方法也适用于小量(50~100 ml ) 制备物。实验材料 蛋白酶 K限制性内切核酸酶λ 噬菌体颗粒试剂、试剂盒 氯仿透析缓冲液EDTA乙醇酚酚:氯仿SDS乙
用蛋白酶K和SDS从大规模培养物中提取λ噬菌体DNA实验
通过一种有效的蛋白酶(如蛋白酶 K ) 的消化作用及随后的酚:氯仿抽提,就能从大规模制备的 λ 噬菌体中很好地分离到 DNA。该方法也适用于小量(50~100 ml ) 制备物。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理通过一种有效的蛋白酶(如蛋白酶 K ) 的消化作用及随后的酚:
从大规模裂解物中制备λ噬菌体颗粒实验
从大规模培养物中制备的 λ 噬菌体,可在高盐存在下用聚乙二酵 ( PEG ) 沉淀的办法从裂解物中回收得到。残余的细胞碎片和 PEG 可用氯仿抽提。在进一步纯化之前,建议测定噬菌体制备物的得率。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理从大规模培养物中制备的 λ 噬菌体,可在高盐存
从大规模裂解物中制备λ噬菌体颗粒实验
实验方法原理 从大规模培养物中制备的 λ 噬菌体,可在高盐存在下用聚乙二酵 ( PEG ) 沉淀的办法从裂解物中回收得到。残余的细胞碎片和 PEG 可用氯仿抽提。在进一步纯化之前,建议测定噬菌体制备物的得率。实验材料 大肠杆菌培养物试剂、试剂盒 氯仿NaCl聚乙二醇SM胰 DNaseⅠ仪器、耗材 S
从大规模裂解物中制备λ噬菌体颗粒实验
实验方法原理 从大规模培养物中制备的 λ 噬菌体,可在高盐存在下用聚乙二酵 ( PEG ) 沉淀的办法从裂解物中回收得到。残余的细胞碎片和 PEG 可用氯仿抽提。在进一步纯化之前,建议测定噬菌体制备物的得率。
温和噬菌体的感染过程
这类噬菌体感染它的宿主细菌后,可把它的DNA整合到细菌染色体中,随着细菌染色体的复制而同时复制。这时不能用任何方法在细菌体内检出噬菌体颗粒的存在,细菌继续生存并进行分裂繁殖。这种携带噬菌体DNA的细菌叫溶原性细菌。在一般外界条件下,溶原性细菌只有极少数发生裂解性反应。但若环境改变,如在紫外线下,激发
噬菌体培养法
一. 液体培养法1. 将指定之寄主细菌以液体培养法于适当温度下培养,一般培养16~24小时2. 将噬菌体原液100 μl 与寄主细菌悬浮液300 μl均匀混合,静置15分钟使其感染。3. 将混合液接至含10 ml新鲜液体培养基的试管中,于适当温度下振荡培养约8~24小时,培养时间依噬菌体之不同而异。
怎样培养噬菌体
将指定之寄主细菌以液体培养法于适当温度下培养,一般培养16~24小时。2. 将噬菌体原液100 μl 与寄主细菌悬浮液300 μl均匀混合,静置15分钟使其感染。3. 将混合液接种至含10 ml新鲜液体培养基的试管中,于适当温度下振荡培养约8~24小时,培养时间依噬菌体之不同而异。4. 将培养液移入
噬菌体如何培养
用大肠杆菌来培养。先制备培养大肠杆菌的培养基,培养大肠杆菌。然后用噬菌体再感染大肠杆菌。噬菌体就是细菌病毒,他是严格的活细胞寄生生物,所以要用活细胞来培养。
用蛋白酶K和SDS从大规模培养物中提取λ噬菌体
实验方法原理 通过一种有效的蛋白酶(如蛋白酶 K ) 的消化作用及随后的酚:氯仿抽提,就能从大规模制备的 λ 噬菌体中很好地分离到 DNA。该方法也适用于小量(50~100 ml ) 制备物。
用小量液体培养物制备λ噬菌体原种实验
实验方法原理 可通过小量液体培养物制备高滴度 λ 噬菌体原种。这一方法最早由 Leder 等(1977)采用。一般来说,它所得到的 λ 噬菌体的产量比平板裂解低且不稳定,另外噬菌体最初的接种量也大。但是,在液体培养物中制备的 λ 噬菌
用小量液体培养物制备λ噬菌体原种实验
实验方法原理 可通过小量液体培养物制备高滴度 λ 噬菌体原种。这一方法最早由 Leder 等(1977)采用。一般来说,它所得到的 λ 噬菌体的产量比平板裂解低且不稳定,另外噬菌体最初的接种量也大。但是,在液体培养物中制备的 λ 噬菌体原种将更清亮,并且也不含污染平板裂解物的硫酸盐多糖。
用小量液体培养物制备λ噬菌体原种实验
可通过小量液体培养物制备高滴度 λ 噬菌体原种。这一方法最早由 Leder 等(1977)采用。一般来说,它所得到的 λ 噬菌体的产量比平板裂解低且不稳定,另外噬菌体最初的接种量也大。但是,在液体培养物中制备的 λ 噬菌体原种将更清亮,并且也不含污染平板裂解物的硫酸盐多糖。本实验来源「分子克隆实验指
Nature捕捉噬菌体感染特写
科学家们发现了,某种类型的病毒在感染过程中会暂时形成一种管状结构传递它的DNA,而在完成任务后则会将这一管状结构溶解。这项研究工作发表在12月15日的《自然》(Nature)杂志上。 在新文章中,研究人员揭示了phiX174病毒攻击大肠杆菌的机制。由于phiX174病毒能够感染细菌,它实质
293细胞的大规模培养
293细胞是腺病毒载体的包装细胞。腺病毒是继逆转录病毒后用于基因治疗研究的热门载体。直接将腺病毒载体导入人体内表达目的基因,治疗恶性肿瘤,心血管疾病或一些遗传疾病已取得可喜进展;利用腺病毒载体在包装细胞 293中表达分泌性蛋白质,如蛋白酪氨酸激酶 1C等亦成为生产重组蛋白的一条途径。因此完善 293
293细胞的大规模培养
293细胞是腺病毒载体的包装细胞。腺病毒是继逆转录病毒后用于基因治疗研究的热门载体。直接将腺病毒载体导入人体内表达目的基因,治疗恶性肿瘤、心血管疾病或一些遗传疾病已取得可喜进展;利用腺病毒载体在包装细胞293中表达分泌性蛋白质,如蛋白酪氨酸激酶1C等亦成为生产重组蛋白的一条途径。因此完善293细胞的
关于温和噬菌体的感染过程介绍
这类噬菌体感染它的宿主细菌后,可把它的DNA整合到细菌染色体中,随着细菌染色体的复制而同时复制。这时不能用任何方法在细菌体内检出噬菌体颗粒的存在,细菌继续生存并进行分裂繁殖。这种携带噬菌体DNA的细菌叫溶原性细菌。在一般外界条件下,溶原性细菌只有极少数发生裂解性反应。但若环境改变,如在紫外线下,
植物细胞大规模培养
植物细胞培养技术就是为了某种目的而在细胞水平上对离体植物细胞或原生质体进行的一系列生物工艺学操作。它包括分离、培养、再生以及一系列相关的操作。就有用化合物的生产来说,它主要是指在无菌条件下通过培养植物细胞生产有用化合物的过程。一、植物细胞培养的特性(1)植物细胞较微生物细胞大得多,有纤维素细胞壁.细
关于噬菌体的培养和应用
可以用M13噬菌体展示系统来构建cDNA文库吗?A: 通常M13不适合cDNA表达,因为M13噬菌体展示需要前导序列(分泌所需)和外壳蛋白pIII或pVIII的N末端之间的框内表达。为了将相应的蛋白质适当地融合到外壳蛋白中,插入物必须在两端的正确阅读框中并且不包含框内终止密码子。这导致M13 c
液体培养液中裂解感染实验
实验材料 λgtll 重组噬菌体 大肠杆菌 Y1090 hsdR 菌株 试剂、试剂盒 细胞裂解液