从大规模裂解物中制备λ噬菌体颗粒实验
实验方法原理 从大规模培养物中制备的 λ 噬菌体,可在高盐存在下用聚乙二酵 ( PEG ) 沉淀的办法从裂解物中回收得到。残余的细胞碎片和 PEG 可用氯仿抽提。在进一步纯化之前,建议测定噬菌体制备物的得率。实验材料 大肠杆菌培养物试剂、试剂盒 氯仿NaCl聚乙二醇SM胰 DNaseⅠ仪器、耗材 Sorvall GSA 转子或相当型号量筒实验步骤 一、材料1. 缓冲液和溶液氯仿,NaCl ( 固体),聚乙二醇(PEG 8000)(每 500 ml 培养物大约用 50 g),SM。2. 酶和缓冲液 胰 DNase Ⅰ ( 1 mg/ml),胰 RNase ( 1 mg/ml ) 于 TE 中(pH 7.6 )。3. 离心机和转子Sorvall GSA 转子或相当型号。4. 专用设备量筒(2 L)。5. 载体和菌株大肠杆菌培养物,经 λ 噬菌体感染和裂解。二、方法用 PEG 沉淀噬菌体颗粒1. 将含有 λ 噬菌体的裂解培......阅读全文
从大规模裂解物中制备λ噬菌体颗粒实验
从大规模培养物中制备的 λ 噬菌体,可在高盐存在下用聚乙二酵 ( PEG ) 沉淀的办法从裂解物中回收得到。残余的细胞碎片和 PEG 可用氯仿抽提。在进一步纯化之前,建议测定噬菌体制备物的得率。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理从大规模培养物中制备的 λ 噬菌体,可在高盐存
从大规模裂解物中制备λ噬菌体颗粒实验
实验方法原理 从大规模培养物中制备的 λ 噬菌体,可在高盐存在下用聚乙二酵 ( PEG ) 沉淀的办法从裂解物中回收得到。残余的细胞碎片和 PEG 可用氯仿抽提。在进一步纯化之前,建议测定噬菌体制备物的得率。实验材料 大肠杆菌培养物试剂、试剂盒 氯仿NaCl聚乙二醇SM胰 DNaseⅠ仪器、耗材 S
从大规模裂解物中制备λ噬菌体颗粒实验
实验方法原理 从大规模培养物中制备的 λ 噬菌体,可在高盐存在下用聚乙二酵 ( PEG ) 沉淀的办法从裂解物中回收得到。残余的细胞碎片和 PEG 可用氯仿抽提。在进一步纯化之前,建议测定噬菌体制备物的得率。
从大规模裂解物中制备λ噬菌体颗粒
材料:缓冲液和溶液:氯仿NaCl(固体)聚乙二醇(PEG 8000)SM酶和缓冲液:胰Dnase I (1mg/ml)胰Dnase I (1mg/ml)于TE中(ph7.6)离心机和转子:Sorvall GSA 转子或相当型号专用设备:量筒(2L)载体和菌株:大肠杆菌培养物,经λ噬菌体感染和裂解方
制备DNA测序模板实验——小量裂解物中制备λ噬菌体DNA
实验材料重组λ噬菌体试剂、试剂盒DNA酶ⅠRNA酶ⅠPEGSMSDSEDTA异丙醇乙酸钠TE仪器、耗材巴斯德吸管试管离心机实验步骤1. 在新鲜配制的λ顶层琼脂糖和λ琼脂糖平板上,通过在平板上裂解适于λ噬菌体生长的大肠杆菌菌株,制备重组λ噬菌体毒种原液。2. 取700 μl 毒种液加入无菌的1.5
λ噬菌体分离物的快速分析(从平板裂解物中纯化λDNA)实验
实验方法原理 对有希望的基因组或 cDNA 克隆的分析,通常开始于用限制酶消化 λ 噬菌体 DNA 的小量制备物,并对消化产物进行琼脂糖凝胶电泳分析。所获得的 DNA 可用作限制酶的底物、RNA 合成(由噬菌体 SP6、T3 和 T7 编码的依赖于 DNA 的 RNA 聚合酶来完成)的模板以
λ噬菌体分离物的快速分析(从平板裂解物中纯化λDNA)实验
实验方法原理 对有希望的基因组或 cDNA 克隆的分析,通常开始于用限制酶消化 λ 噬菌体 DNA 的小量制备物,并对消化产物进行琼脂糖凝胶电泳分析。所获得的 DNA 可用作限制酶的底物、RNA 合成(由噬菌体 SP6、T3 和 T7
λ噬菌体分离物的快速分析(从平板裂解物中纯化λDNA)实验
对有希望的基因组或 cDNA 克隆的分析,通常开始于用限制酶消化 λ 噬菌体 DNA 的小量制备物,并对消化产物进行琼脂糖凝胶电泳分析。所获得的 DNA 可用作限制酶的底物、RNA 合成(由噬菌体 SP6、T3 和 T7 编码的依赖于 DNA 的 RNA 聚合酶来完成)的模板以及 PCR 的模板。本
用甲酰胺从大规模培养物中提取λ噬菌体DNA实验
实验方法原理 可用甲酰胺代替 SDS/蛋白酶 K 将纯化的噬菌体颗粒去除外壳。这种方法虽然不是很有效,但在某种意义上它比以前的操作方法更快。实验材料 限制性内切核酸酶λ 噬菌体颗粒试剂、试剂盒 EDTA乙醇甲酰胺NaClTETris-Cl仪器、耗材 琼脂糖凝胶硼硅酸盐巴斯德吸管实验步骤 一、材料1.
用甲酰胺从大规模培养物中提取λ噬菌体DNA实验
实验方法原理 可用甲酰胺代替 SDS/蛋白酶 K 将纯化的噬菌体颗粒去除外壳。这种方法虽然不是很有效,但在某种意义上它比以前的操作方法更快。 实验材料 限
用甲酰胺从大规模培养物中提取λ噬菌体DNA实验
可用甲酰胺代替 SDS/蛋白酶 K 将纯化的噬菌体颗粒去除外壳。这种方法虽然不是很有效,但在某种意义上它比以前的操作方法更快。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理可用甲酰胺代替 SDS/蛋白酶 K 将纯化的噬菌体颗粒去除外壳。这种方法虽然不是很有效,但在某种意义上它比以前的操
通过凝胶电泳测定λ噬菌体原种和裂解物中DNA的含量实验
实验方法原理 本方案阐述了一种快速估计 λ 噬菌体原种中 DNA 含量的方法。该方法首先可用于发现原种和裂解物中的噬菌体颗粒的得率是否能满足大量纯化的需要,其次可用于检测纯化过程,以找到出问题步骤。实验材料 λ 噬菌体 DNAλ 噬菌体裂解物或原种试剂、试剂盒 2.5X SDS-EDTA 染料混合物
通过凝胶电泳测定λ噬菌体原种和裂解物中DNA的含量实验
本方案阐述了一种快速估计 λ 噬菌体原种中 DNA 含量的方法。该方法首先可用于发现原种和裂解物中的噬菌体颗粒的得率是否能满足大量纯化的需要,其次可用于检测纯化过程,以找到出问题步骤。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理本方案阐述了一种快速估计 λ 噬菌体原种中 DNA 含量
培养细胞标记和裂解物的制备实验
实验材料 培养细胞试剂、试剂盒 DMEMHClTBSTris仪器、耗材 微量离心管Plexiglas盒吸头细胞刮子冷冻离心机实验步骤 1. 培养待标记的细胞至适当的生长期。 对于贴壁细胞: 2a. 吸去培养液,用37℃的含血清不加标记物的标记培养液洗尽残存的含磷酸盐培养液,吸尽该培养液。 3a.
培养细胞标记和裂解物的制备实验
温和去污裂解法 SDS煮沸法 实验材料 培养细胞 试剂、试剂盒
培养细胞标记和裂解物的制备实验
温和去污裂解法 SDS煮沸法 实验材料 培养细胞 试剂、试剂盒
通过凝胶电泳测定λ噬菌体原种和裂解物中DNA
实验方法原理 本方案阐述了一种快速估计 λ 噬菌体原种中 DNA 含量的方法。该方法首先可用于发现原种和裂解物中的噬菌体颗粒的得率是否能满足大量纯化的需要,其次可用于检测纯化过程,以找到出问题步骤。
利用-Trizol-从植物组织中制备-RNA-实验
实验材料 植物组织 试剂、试剂盒 Trizol 氯仿 异丙醇 乙醇
利用-Trizol-从植物组织中制备-RNA-实验
下述方案是经修改过的 Trizol 方案,用于从植物组织中分离 RNA,其中增加了一个高盐异丙酵沉淀步骤,以选择性地沉淀 RNA,而将多聚糖和蛋白多糖留在溶液里。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。实验材料植物组织试剂、试剂盒Trizol氯仿异丙醇乙醇DEPC处理过的水液态
利用-Trizol-从植物组织中制备-RNA-实验
实验材料 植物组织试剂、试剂盒 Trizol氯仿异丙醇乙醇DEPC处理过的水液态N2NaCl柠檬酸钠仪器、耗材 转子-定子均化器研钵和杵圆锥形管实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂Trizol(Invitrogen)氯仿异丙醇乙醇,70%,用焦碳酸二乙酯(DEPC) 处理过的水配制DEPC 处
λ噬菌体噬菌斑的挑取实验
遗传上同源的 λ 噬菌体原种是通过 "挑取” 一个完全独立的噬菌斑并将含有裂解物的琼脂/琼脂糖保存于贮存液中而获得的。获得的原种可用于制备噬菌体的平板裂解物或液体培养物,也可用于以后的分析。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理遗传上同源的 λ 噬菌体原种是通过 "挑取” 一个
杆状病毒储液制备实验——从单层培养中制备
实验材料单层培养的 Sf 9 细胞待接种的杆状病毒(野生型的或重组)试剂、试剂盒含10%胎牛血清的昆虫细胞培养液 TNM-FH仪器、耗材150 mm 培养瓶27℃ 培养箱倒置显微镜带有 GH-3.7 水平转子的4℃GPR离心机带螺口盖的冻存管液氮罐500 ml 旋转细胞培养瓶多转瓶的揽拌台实验步骤1
杆状病毒储液制备实验——从悬浮培养中制备
实验材料悬浮培养的 Sf 9 细胞待接种的杆状病毒(野生型的或重组)试剂、试剂盒含10%胎牛血清的昆虫细胞培养液 TNM-FH仪器、耗材150 mm 培养瓶27℃ 培养箱倒置显微镜带有 GH-3.7 水平转子的4℃GPR离心机带螺口盖的冻存管液氮罐500 ml 旋转细胞培养瓶多转瓶的揽拌台实验步骤1
用蛋白酶K和SDS从大规模培养物中提取λ噬菌体DNA实验
实验方法原理 通过一种有效的蛋白酶(如蛋白酶 K ) 的消化作用及随后的酚:氯仿抽提,就能从大规模制备的 λ 噬菌体中很好地分离到 DNA。该方法也适用于小量(50~100 ml ) 制备物。实验材料 蛋白酶 K限制性内切核酸酶λ 噬菌体颗粒试剂、试剂盒 氯仿透析缓冲液EDTA乙醇酚酚:氯仿SDS乙
用蛋白酶K和SDS从大规模培养物中提取λ噬菌体DNA实验
通过一种有效的蛋白酶(如蛋白酶 K ) 的消化作用及随后的酚:氯仿抽提,就能从大规模制备的 λ 噬菌体中很好地分离到 DNA。该方法也适用于小量(50~100 ml ) 制备物。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理通过一种有效的蛋白酶(如蛋白酶 K ) 的消化作用及随后的酚:
λ噬菌体的大规模培养(低倍数感染)实验
实验方法原理 λ 噬菌体的大量制备可通过低倍数感染细菌培养物或高倍数感染这两种方法获得。低倍数感染后,培养物立即被转接至大体积培养物中。因为在最初细菌培养物中只有小量的细胞被感染,所以转接后的细菌培养物中的未感染细胞在随后的数小时内将进一步分裂生长。实验材料 λ 噬菌体原种试剂、试剂盒 氯仿SM仪器
λ噬菌体的大规模培养(低倍数感染)实验
实验方法原理 λ 噬菌体的大量制备可通过低倍数感染细菌培养物或高倍数感染这两种方法获得。低倍数感染后,培养物立即被转接至大体积培养物中。因为在最初细菌培养物中只有小量的细胞被感染,所以转接后的细菌培养物中的未感染细胞在随后的数小时内将进一步分
λ噬菌体的大规模培养(低倍数感染)实验
λ 噬菌体的大量制备可通过低倍数感染细菌培养物或高倍数感染这两种方法获得。低倍数感染后,培养物立即被转接至大体积培养物中。因为在最初细菌培养物中只有小量的细胞被感染,所以转接后的细菌培养物中的未感染细胞在随后的数小时内将进一步分裂生长。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理λ
从石蜡包埋固定的组织中制备-RNA-实验
实验材料 石蜡包埋的组织样品 试剂、试剂盒 甲酰胺 消化缓冲液 乙醇 肝糖
从石蜡包埋固定的组织中制备-RNA-实验
实验材料 石蜡包埋的组织样品试剂、试剂盒 甲酰胺消化缓冲液乙醇肝糖异丙醇苯酚 氯仿蛋白酶 KTrizol二甲苯仪器、耗材 微量离心管恒温箱实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂去离子化的甲酰胺焦碳酸二乙酯(DEPC) 处理过的水消化缓冲液(lmol/L 异硫氰酸胍,25 mmol/Lβ-巯基乙醇