GFP和荧光共振能量转移技术测定蛋白质相互作用实验2
16. 标记反应以后，采用下述公式计算标记率： Aλ X M / [ ( A280-ƒ X Aλ ) X ελ ]式中 Aλ是染料在其最大吸收波长λ处的吸收度，A280 是蛋白质在 280nm 的吸收度，M 是以 kDa 为单位的蛋白质分子质量，ελ是染料在波长 λ 处的摩尔消光系数，以 L•mmol-1•cm-1 为单位。公式以染料在 280nm 处的吸收进行校正。系数ƒ是染料在 280nm 和最大可见吸收波校λ的吸收度比值。例如，Cy3 标记抗体的标记率公式就变为： &nbs......阅读全文
蛋白互作研究技术：「FRET」VS「Duolink－PLA」
荧光能量共振转移 （FRET）检测活体中生物大分子纳米级距离和纳米级距离变化的有力工具，广泛应用于生物大分子相互作用分析、细胞生理研究、免疫分析等。原理当供体荧光分子的发射光谱与受体荧光分子的吸收光谱重叠，并且两个分子的距离在 10nm 范围以内时，就会发生一种非放射性的能量转移，即 FRET 现象
适用于TRFRET的荧光染料：trFluor－链霉亲和素
时间分辨荧光：理论上，荧光是最灵敏的检测手段，由于许多分子间和分子内的变化会改变标记物的荧光发射。因此，很早就把它作为均相分析技术可能的新的手段。而现在偏振，淬灭，时间关联，荧光寿命改变以及荧光共振能量转移（FRET）已经被广泛应用在对分子间作用的研究中。在生物溶液或血清中的很多化合物和蛋白质是自发
FRET成像在生物医药领域中的应用（一）
随着显微成像技术的发展，科研工作者对成像分辨率的要求越来越高，为此Leica在最新一代SP8共聚焦显微镜的基础上相继推出了超高分辨的STED和高分辨的Hyvolution；另一方面，简单的图像采集和分辨率的提升已经不能满足很多科研工作者的需求，他们需要更高级更强大的成像功能与图像处理功能。LAS
多肽FRET荧光标记技术
荧光标记所依赖的化合物称为荧光物质。荧光物质是指具有共轭双键体系化学结构的化合物，受到紫外光或蓝紫光照射时，可激发成为激发态，当从激发态恢复基态时，发出荧光。荧光标记技术指利用荧光物质共价结合或物理吸附在所要研究分子的某个基团上，利用它的荧光特性来提供被研究对象的信息。荧光标记的无放射物污染，操作简
激光扫描共焦显微镜技术及应用（二）
五、激光扫描共焦显微镜技术的应用定位、定量三维重组动态测量¨ 活细胞或组织内游离Ca2+浓度的测量¨ 活细胞内H+浓度（ pH值）的测量¨ 自由基的检测¨ 药物进入细胞的动态过程、定位分布及定量 应用：细胞膜电位的测量 荧光漂白恢复（FRAP）的测量 笼锁解笼锁的测量
活体GFP绿色荧光成像系统
系统提供动物活体绿色荧光蛋白的实时观察与成像等一系列的荧光检测。能够应用在像深度肿瘤，大动物等活体肿瘤追踪观察成像研究。 该设备是一个高灵敏度的图像成像工作系统，主要利用特定波长的激光进行激发后，通过高灵敏度的致冷CCD进行实时检测后，获得所需的各类 特性的图像，有利于进一步的分析作用 。
绿色荧光蛋白GFP性质
GFP荧光极其稳定，在激发光照射下，GFP抗光漂白（Photobleaching）能力比荧光素（fluorescein）强，特别在450～490nm蓝光波长下更稳定。 GFP需要在氧化状态下产生荧光，强还原剂能使GFP转变为非荧光形式，但一旦重新暴露在空气或氧气中，GFP荧光便立即得到恢复。而
GFP：荧光蛋白的起源
作者： 罗辑科学 绿色荧光蛋白(简称GFP)，是一个由约238个氨基酸组成的蛋白质，从蓝光到紫外线都能使其激发，发出绿色荧光。GFP的荧光非常稳定，在激发光照射下，其抗光漂白能力比荧光素强很多。因此GFP及其变种被广泛地用作分子标记；此外，GFP还被用作砷和一些重金属的传感器。
GFP：荧光蛋白的起源
绿色荧光蛋白(简称GFP)，是一个由约238个氨基酸组成的蛋白质，从蓝光到紫外线都能使其激发，发出绿色荧光。GFP的荧光非常稳定，在激发光照射下，其抗光漂白能力比荧光素强很多。因此GFP及其变种被广泛地用作分子标记；此外，GFP还被用作砷和一些重金属的传感器。 1962年，下村脩和约翰逊在一
GFP：荧光蛋白的起源
绿色荧光蛋白(简称GFP)，是一个由约238个氨基酸组成的蛋白质，从蓝光到紫外线都能使其激发，发出绿色荧光。GFP的荧光非常稳定，在激发光照射下，其抗光漂白能力比荧光素强很多。因此GFP及其变种被广泛地用作分子标记；此外，GFP还被用作砷和一些重金属的传感器。 1962年，下村
维生素B2－(核黄素)－荧光测定法实验_荧光测定法2
实验方法原理核黄素在pH 4～9 的条件下，用450 nm波长的光激发，可发出波长为520 nm的荧光。在核黄素的含量为0.1～10 μg范围内，荧光的强度，与核黄素浓度成正比，硫代硫酸钠可消除核黄素的荧光性。实验材料核黄素试剂、试剂盒荧光红钠 硫代硫酸钠 盐酸仪器、耗材荧光分光光度计 容量瓶实验步
生物学家转移研究重点－开始关注基因调控
随着人类和许多其他物种基因组测序工作的完成，生物学家开始将研究重点转移到调控基因如何开启和关闭功能基因的表达上，该类研究的进行需要依靠新技术和新工具的发明应用。近期在《自然—方法学》(Nature Methods)杂志上发表的相关文章表明，美国佛罗里达州立大学国家高磁实验室研究人员与加拿大阿尔伯塔大
BLT小课堂丨植物蛋白互作技术（一）
植物蛋白互作技术我们的世界物种多种多样，而与我们人类生存关系最密切的就是植物。随着时间的推移与科技的进步，人类在逐步揭示自身基因真相的同时，也在不断探寻植物基因的种种功能。其中，蛋白质是植物生命活动的主要承担者。因此，在植物学相关研究中，蛋白质之间的相互作用是研究的重要基础和手段。目前，研究蛋白质-
单分子荧光分析技术揭示解旋酶作用机制
单分子荧光分析技术揭示解旋酶作用机制：类似解旋酶的蛋白与核酸相互位置的转变具有重要的细胞生物学意义，但是至今科学家们还并不清楚这个过程如何解开DNA结合蛋白，而且这一过程的基本特征迄今为止仍然倍受争议。 DNA修复指双链DNA上的损伤得到修复的现象，这个过程可能使DNA结构恢复原样，重新能执行它原来
单分子荧光分析技术揭示解旋酶作用机制
类似解旋酶的蛋白与核酸相互位置的转变具有重要的细胞生物学意义，但是至今科学家们还并不清楚这个过程如何解开DNA结合蛋白，而且这一过程的基本特征迄今为止仍然倍受争议。 DNA修复指双链DNA上的损伤得到修复的现象，这个过程可能使DNA结构恢复原样，重新能执行它原来的功能，DNA修复是探索生命的一个
单分子荧光分析技术揭示解旋酶作用机制
类似解旋酶的蛋白与核酸相互位置的转变具有重要的细胞生物学意义，但是至今科学家们还并不清楚这个过程如何解开DNA结合蛋白，而且这一过程的基本特征迄今为止仍然倍受争议。 DNA修复指双链DNA上的损伤得到修复的现象，这个过程可能使DNA结构恢复原样，重新能执行它原来的功能，DNA修复是探索生命的一个重要
单分子荧光分析技术揭示解旋酶作用机制
类似解旋酶的蛋白与核酸相互位置的转变具有重要的细胞生物学意义，但是至今科学家们还并不清楚这个过程如何解开DNA结合蛋白，而且这一过程的基本特征迄今为止仍然倍受争议。 DNA修复指双链DNA上的损伤得到修复的现象，这个过程可能使DNA结构恢复原样，重新能执行它原来的功能，DNA修复是探索生命的一个
BLT小课堂丨植物蛋白互作技术（二）
免疫共沉淀技术(CoIP)：借助抗体和抗原之间的专一性，确定两种蛋白质在完整细胞内生理性的相互作用。当用预先固化在argarose beads上的蛋白质A的抗体免疫沉淀A蛋白，那么与A蛋白在体内结合的蛋白质B也能一起沉淀下来。再通过蛋白变性分离，对B蛋白进行检测，进而证明两者间的相互作用。优
高校实验室如何去观察绿色荧光蛋白GFP？
绿色荧光蛋白是一类存在于包括水母、水螅和珊瑚等腔肠动物体内的生物发光蛋白，当受到紫外或蓝光激发时，发射绿色荧光。其特点在于：它产生荧光无需底物或辅因子，发色团是其蛋白质一级序列固有的来源于水母的氨基酸残基组成。水母的绿色荧光蛋白很稳定，无种属限制，已在多种动植物细胞中表达成功并产生荧光。GFP 的荧
新生物学活性测定方法介绍
近年来，抗体药物的接连上市和重磅销售引发国内外抗体类生物治疗药物的研发热潮。活性测定是对药物的有效成分和含量以及药物效价的测定，是确保抗体类药物有效性的重要质控指标。现阶段抗体药物的活性分析方法主要是体外( in vitro) 检测，主要有基于细胞、转基因细胞以及新技术应用三方面对抗体药物活性测定的
绿色荧光蛋白（GFP）的应用
骨架和细胞分裂 Kevin Sullivan's 实验室 酵母菌内SPB 和微管动力学 酵母菌中肌动蛋白的动力 果蝇中MEI-S332蛋白 果蝇有丝分裂和mRNA运输 网丙菌属细胞骨架 RNA剪切因子的核内运输 网丙菌属的趋化作用 网丙菌属中细胞骨架动力和细胞运动 核
如何检测丝氨酸蛋白酶的活性？
检测丝氨酸蛋白酶活性通常涉及几种不同的实验方法。 首先，可以使用光谱法来监测底物在丝氨酸蛋白酶作用下的分解情况，因为丝氨酸蛋白酶的活性会导致底物特定光谱性质的改变。 其次，荧光共振能量转移（FRET）技术可以用来检测丝氨酸蛋白酶与其特异性底物之间的相互作用，并量化酶的活性。 此外，基于色谱
绿色荧光蛋白融合技术在激素类兴奋剂检测中的应用
实验方法原理重组人生长激素（rhGH）与胰岛素生长因子-1（ICF-Ⅰ）是目前运动员滥用严而又难以检测的内源性激素类兴奋剂。以IGF-Ⅰ作为目标分析物，利用分子生物学方法构建绿色荧光蛋白（GFP）与IGF-Ⅰ的融合蛋白GFP-IGF。GFP是目前应用广泛的一种生物报告分子，具有稳定、无毒害、无需底物
如何使用Molecular－Devices－SpectraMax－Paradigm多功能读扳机进...
如何使用Molecular Devices SpectraMax Paradigm多功能读扳机进行HTRF人肿瘤坏死因子实验？本应用记录了我们如何使用Spectramax Paradigm 多功能读扳机执行稳定，免洗细胞因子实验，并具有良好的Z因子。HTRF是由Cisbio试剂公司研发的多功能技术，
各种蛋白互作检测方法优缺点分析
聚焦蛋白质互作研究进展与实验方法研究蛋白-蛋白相互作用是理解生命活动的基础。蛋白质—蛋白质互作网络是生物信息调控的主要实现方式，是决定细胞命运的关键因素。检测蛋白质间相互作用的实验方法有哪些？这些检测方法各有什么优缺点?总结如下。1. 生化方法●共纯化、共沉淀，在不同基质上进行色谱层析(需要补充)●
iRNA干扰GFP表达实验
实验概要本文介绍了iRNA干扰GFP表达实验的原理及方法步骤。实验原理RNA沉默是发生在植物（转录后基因沉默或共抑制）、动物（RNA干扰，RNAi）和真菌（消除作用）等真核生物细胞中的的特异性和高效率的mRNA降解机制。在哺乳动物细胞中，RNAi通常用于阻断特定基因的表达从而研究基因的功能。将靶向特
iRNA干扰GFP表达实验
【原理】RNA沉默是发生在植物（转录后基因沉默或共抑制）、动物（RNA干扰，RNAi）和真菌（消除作用）等真核生物细胞中的的特异性和高效率的mRNA降解机制。在哺乳动物细胞中，RNAi通常用于阻断特定基因的表达从而研究基因的功能。将靶向特定基因的大约21碱基长短的双链siRNAs(smallinte
新药活性一测便知新生物学活性测定方法介绍
近年来，抗体药物的接连上市和重磅销售引发国内外抗体类生物治疗药物的研发热潮。活性测定是对药物的有效成分和含量以及药物效价的测定，是确保抗体类药物有效性的重要质控指标。现阶段抗体药物的活性分析方法主要是体外( in vitro) 检测，主要有基于细胞、转基因细胞以及新技术应用三方面对抗体药物活性测
一种针对活细胞膜界面膜蛋白动力学测量的高精度方法
细胞膜既是保护细胞的重要屏障，也是细胞与外界物质和信息交换的界面。空间总厚度约为10纳米的细胞膜（含突出于细胞膜两侧的膜蛋白结构）可被视为准二维凝聚相体系。磷脂双层膜及镶嵌于膜上的众多蛋白质，整体上具有“多重界面复杂流体”的行为和特征。膜本身的二维流动性和三维起伏涨落为膜蛋白动力学的精密测量造成
31项与免疫学有关的分子生物学实验技术（二）
十二、大肠杆菌感受态细胞（E.coli DH5α）制备E.coli DH5α制备主要操作步骤：1）挑取受体菌（DH5或DH10B）的单菌落于LB培养基中37℃摇床培养过夜（约16小时）；2）取1ml过夜培养物转接于100ml LB培养基中，在37℃摇床上剧烈振荡培养约2.5-3小时（250-30