核提取物的制备实验
实验材料 哺乳动物试剂、试剂盒 PBS低渗缓冲液低盐缓冲液透析缓冲液仪器、耗材 转子离心机电导计透析膜匀浆机离心管实验步骤 1a. 收集转瓶培养的细胞：将浓度为5~10×108细胞/l 的培养液用1 L 的塑料瓶1 850 g 离心20 min，将细胞收入50 ml 锥形离心管中（每管收2~3 L 培养液中的细胞）。进行步骤2。1b. 收集单层培养的细胞：单层细胞长满后去掉培养液。用PBS洗1次。将细胞刮入新鲜PBS液里，倒进锥形离心管中。进行步骤2。2. 1 850 g 离心10 min。3a. 转瓶培养细胞：测量压紧后细胞的体积。将细胞重悬于约5倍于其pcv的PBS液中，1 850 g 离心10 min。进行步骤4。3b. 单层培养细胞：测量pcv，进行步骤4。4. 快速地将沉淀的细胞重悬于5倍体积的低渗缓冲液中，1 850......阅读全文
哺乳动物细胞中制备核和细胞质提取物—细胞质组分制备
实验材料细胞质提取物试剂、试剂盒10× 细胞质提取缓冲液仪器、耗材Beckman 50型固定角转子或相当的转子实验步骤1) 仔细测量细胞质提取物的体积（见基本方案步骤 7 中的上清）。加入 0.11 倍体积的10×细胞质提取缓冲液，充分混合。2)100 000 g 离心 1 h。3)将上清（± 10
核纤层和富含核纤层组分的制备实验——SPISULA
实验材料海蚌试剂、试剂盒溶液 S仪器、耗材Millipore 滤器离心机实验步骤卵母细胞收集和制备1. 从成年海蚌中剥离卵巢和卵母细胞。然后在 1 g 重力作用下，用经 0.22 μm Millipore 滤器过滤的海水清冼几次卵母细胞。匀浆2. 为了在不激活卵母细胞的情况下使卵黄膜去稳定，将洗过的
细胞核连缀分析实验_从组织中制备细胞核
实验材料动物组织试剂、试剂盒PBS蔗糖仪器、耗材电动匀浆器特氟隆研杵实验步骤一、用超速离心法从组织中分离细胞核1. 切下动物组织，放入置于冰上的平皿中，用冰冷的 PBS 冲洗。2. 加少量蔗糖Ⅰ溶液，用剪刀或剃须刀片将组织切碎，转入一个干净试管中，加蔗糖Ⅰ溶液至终体积为每克组织 10 ml。3. 用
从哺乳动物细胞中制备核和细胞质提取物
核提取物的制备 核提取物制备优化 细胞质（S-100)组分的制备 实验方法原理 实验材料
从哺乳动物细胞中制备核和细胞质提取物
实验方法原理 实验材料 转瓶或单层培养的哺乳动物细胞（如HeLa细胞）试剂、试剂盒 PBS低渗缓冲液高盐缓冲液含1. 2 mol L KCl透析缓冲液液氮仪器、耗材 贝克曼 JS4. 2 转子或相当的转子50 mL 圆锥形刻度聚丙烯离心管（对较小体积的提取物也可用 15 mL 的离心管）Doun
从哺乳动物细胞中制备核和细胞质提取物
核提取物的制备核提取物制备优化细胞质（S-100)组分的制备实验方法原理实验材料转瓶或单层培养的哺乳动物细胞（如HeLa细胞） 试剂、试剂盒PBS
核纤层和富含核纤层组分的制备实验——果蝇胚
实验材料果蝇胚试剂、试剂盒溶液 E仪器、耗材研杵匀浆器实验步骤胚收集和制备1. 可用任一种方法收集果蝇胚（Oregon R P2 或任何其他的野生系）。制备匀浆2. 直接在 9 倍体积的抽提缓冲液（溶液 E ) 中融化冻存胚。溶液 E：250 mmol/L 蔗糖50 mmol/L NaCl50 mm
酵母细胞核制备实验——差速离心法
细胞核（nucleus）是细胞中最大、最重要的细胞器（初中老教材认为细胞核不是细胞器，大学细胞生物学则认为是细胞器，这里以大学教材为准），它是由核膜（nuclear membrane）、核骨架（nuclear scaffold）、核仁(nucleolus) 几部分组成。实验材料酵母菌试剂、试剂盒细胞
蛋白质纯化所需的生物提取物制备的实验
实验步骤 一、化学法和酶法细胞裂解 微量的细胞裂解经常通过化学法或酶法或二者共同采用来完成。例如, 超声和弗式细胞压碎器 (Frenchpress 均质机) 都不便于用在收集小于或等于 5 mL 的培养液的情况，而且应用这些
蛋白质纯化所需的生物提取物制备的实验
实验步骤一、化学法和酶法细胞裂解微量的细胞裂解经常通过化学法或酶法或二者共同采用来完成。例如, 超声和弗式细胞压碎器 (Frenchpress 均质机) 都不便于用在收集小于或等于 5 mL 的培养液的情况，而且应用这些机械的方法经常会遇到过度的产热和样品被氧化等问题。微量细胞裂解的简化方面的重大进
核纤层和富含核纤层组分的制备实验——爪蟾卵母细胞
实验材料卵巢试剂、试剂盒NaClKClMgSO4Ca（NO3）2CaCl2NaHCO3苯青霉素硫酸链霉素Na-HEPES仪器、耗材培养皿实验步骤卵母细胞收集和制备1. 从成熟的雌性非洲爪蟾取整个或部分卵巢，在含 88 mmol/L NaCl，1 mmol/L KCl，0.9 mmol/L MgSO4
蛋白质纯化所需的生物提取物制备的实验（一）
一、化学法和酶法细胞裂解微量的细胞裂解经常通过化学法或酶法或二者共同采用来完成。例如, 超声和弗式细胞压碎器 (Frenchpress 均质机) 都不便于用在收集小于或等于 5 mL 的培养液的情况，而且应用这些机械的方法经常会遇到过度的产热和样品被氧化等问题。微量细胞裂解的简化方面的重大进
蛋白质纯化所需的生物提取物制备的实验（二）
二、机械法裂解细胞超声和高压裂解已经被高效地应用于微生物、植物和动物细胞的裂解。这些方法已经采用了几十年，其设备和原理已经被详细阐明（Harrison,1991;Hopkins，1991;Mid-delberg，1995)。超声裂解是通过调谐的探头或机臂的共鸣（15~25kHz) 所引发的髙
蛋白质纯化所需的生物提取物制备的实验（三）
四、细胞裂解的流程、试剂和技巧下文所述的以细胞提取物的产品质量为出发点的各种策略和指导方针适用于大多数下游纯化及分析过程。尽管介绍的重点是在小规模或较大的实验室规模的大肠杆菌裂解上，但是一些技术还是可以用于其他来源的细胞裂解和细胞内蛋白质提取，并且是可以放大的。广泛的蛋白质纯化方面的文献为这里列出的
蛋白质纯化所需的生物提取物制备的实验（四）
小规模大肠杆菌细胞裂解规程1.去垢剂为基础的裂解试剂10 mL 裂解试剂溶液的配方：10 mLB-Per 或 BugBuster,20/iLLysonaseBioprocessingReagent。如果需要减少蛋白质水解和增加目标蛋白质可溶性及稳定性可以添加，如 EDTA、蛋白酶抑制剂、
HeLa－细胞核提取物的－Sephacryl－S300－HR－柱层析实验
试剂、试剂盒 HeLa 细胞核提取物Sephacryl S-300 HR液氮TM 缓冲液+0.1mol LKCl仪器、耗材 XK26 40 柱实验步骤 材料与设备HeLa 细胞核提取物（从 12L 细胞培养物制得，见 pp.9l~93)(5-ml 样品)XK26/40 柱（PharmaciaBiot
通过高等真核生物无细胞提取物分析mRNA的降解实验
实验方法原理 细胞的环境、复制周期的状态和分化状态的改变会引起一些 mRNA 半衰期的改变。实验材料 DEPC细胞多聚核糖体RNA底物试剂、试剂盒 乙酸钾乙酸镁DTTTris-乙酸组织培养液无菌去离子水磷酸肌酸ATPGTP乙酸钾精胺RNase 抑制剂仪器、耗材 高温烤箱匀浆器研杵低速离心机超速离心机
通过高等真核生物无细胞提取物分析mRNA的降解实验
实验方法原理 细胞的环境、复制周期的状态和分化状态的改变会引起一些 mRNA 半衰期的改变。 实验材料 DEPC 细胞
HeLa－细胞核提取物的－Sephacryl－S300－HR－柱层析实验
HeLa 细胞核提取物Sephacryl S-300 HR液氮TM 缓冲液+0.1mol LKCl仪器、耗材XK26 40 柱实验步骤材料与设备HeLa 细胞核提取物（从 12L 细胞培养物制得，见 pp.9l~93)(5-ml 样品)XK26/40 柱（PharmaciaBiotech，Inc.)
通过高等真核生物无细胞提取物分析mRNA的降解实验
细胞的环境、复制周期的状态和分化状态的改变会引起一些 mRNA 半衰期的改变。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。实验方法原理细胞的环境、复制周期的状态和分化状态的改变会引起一些 mRNA 半衰期的改变。实验材料DEPC细胞多聚核糖体RNA底物试剂、试剂盒乙酸钾乙酸镁DTTTris-乙酸
分离核仁实验——HeLa细胞细胞核或核仁的制备
实验材料HeLa细胞试剂、试剂盒PBS仪器、耗材Teflon-玻璃匀浆器实验步骤1. 准备溶液：PBSRSB-8 10 mmol/L Tris；10 mmoI/L NaCl，8 mmoI/L 乙酸镁，pH 7.4RSB 10 mmol/L Tris；10 mmol/L NaCl，1.5 mmol/L
抗核提取物抗体测定是什么
抗核提取物抗体测定指自身免疫性疾病筛选试验。抗核抗体（antinuclear antibody，ANA），又称抗核酸抗原抗体，是一组对细胞核内的DNA、RNA、蛋白或这些物质的分子复合物产生的自身抗体。按其核内各个分子的性能不同可将各ANA区分开来，如：抗DNA抗体；抗组蛋白抗体；抗非组蛋白抗体；抗
抗核提取物抗体测定是什么
抗核提取物抗体测定指自身免疫性疾病筛选试验。抗核抗体（antinuclear antibody，ANA），又称抗核酸抗原抗体，是一组对细胞核内的DNA、RNA、蛋白或这些物质的分子复合物产生的自身抗体。按其核内各个分子的性能不同可将各ANA区分开来，如：抗DNA抗体；抗组蛋白抗体；抗非组蛋白抗体；抗
酵母细胞核制备
实验材料 酵母菌试剂、试剂盒 细胞核缓冲液Ficoll缓冲液仪器、耗材 匀浆机实验步骤 1. 将酵母菌接种于YPD培养基（100 ml 到20 L），剧烈摇动或强制通气条件下培养至对数中期（OD600≈1~5）。培养物在预称重的离心瓶中于4℃， 1 500 g 离心5 min。 2. 确定酵母细
核纤层和富含核纤层组分的制备实验——哺乳动物组织细胞
实验材料组织试剂、试剂盒溶液 H仪器、耗材尼龙网匀浆器实验步骤组织制备1. 切碎组织，用加 250 mmol/L 蔗糖的 H 溶液清洗组织/组织培养物：溶液 H：15 mmol/L PIPES，pH 7.280 mmol/L KCl15 mmol/L NaCI0.5 mmol/L 精咪0.2 mmo
抗核提取物（ENA）抗体检测的介绍
核抗原有三个部分组成：组蛋白，DNA，可溶性核抗原。后者是一组可溶于磷酸缓冲液中的多肽抗原，故名可提取的核抗原。随着分子水平识别ENA多肽抗体研究的重大进展，现已发现有临床诊断价值的这类抗体有10余种，抗ENA为其总称。主要包括Sm、BNP、SSA、SSB、Jo-1、Scl-70抗原，不同的自身
原代细胞核基质的制备
试剂和器材： 1. 硫酸铵（含10mmol/L Tris-HCl，（pH7.4）及0.2mmol/L MgCl2的1mol/L与0.2mol/L硫酸铵溶液）；2. 氯化镁（1mol/L储存液）；3. 苯甲基磺酰氟（PMSF）（无水乙醇配制的1mol/L储存液）；4. 纯化的细胞核保存于含0.25mo
脾脏单个核细胞悬液如何制备
(1)大鼠断颈处死后，无菌取脾置于消毒平皿中称重;(2)超净工作台上置10cm直径无菌平皿，加入5～10ml D-hanks平衡液 ，置一80目的不锈钢筛于平皿中，脾脏置于筛网中，用剪刀剪碎脾，用5ml玻璃注射器针芯轻轻捻磨脾脏，使分散的细胞滤过金属网进入平皿的液体中， D-hanks冲洗一次；(3
外周血单个核细胞样本的制备
实验方法原理 血液是天然的单个细胞分散的细胞悬液，血细胞在生理状态下呈分散的游离状态。它是流式细胞分析的理想样品。血液中的主要细胞成分为白细胞、红细胞和血小板；而其中白细胞主要成分又分为淋巴细胞、单核细胞和粒细胞。但在血细胞中一般检测单个核细胞较为多见。实验材料 外周血试剂、试剂盒 肝素生理盐水实验
外周血单个核细胞样本的制备
实验方法原理血液是天然的单个细胞分散的细胞悬液，血细胞在生理状态下呈分散的游离状态。它是流式细胞分析的理想样品。血液中的主要细胞成分为白细胞、红细胞和血小板；而其中白细胞主要成分又分为淋巴细胞、单核细胞和粒细胞。但在血细胞中一般检测单个核细胞较为多见。实验材料外周血试剂、试剂盒肝素生理盐水实验步骤一