Northwestern筛选蛋白表达文库实验
实验方法原理 Northwestern 筛选蛋白表达文库的方法是通过构建 IPTG 可诱导的融合蛋白表达文库（融合蛋白的 N 端由载体序列编码，C 端由克隆到载体的 cDNA 文库编码），进而诱导融合蛋白表达，并将蛋白质固定于硝酸纤维素滤膜上，以标记的 RNA 探针进行筛选，最终获取能与靶 RNA 分子特异性结合蛋白质的 cDNA。实验材料 表达库宿主菌抗生素试剂、试剂盒 SM 缓冲液IPTG封闭缓冲液漂洗缓冲液结合缓冲液洗脱缓冲液FicollPVPBSATorula yeast core RNA仪器、耗材 NZY 培养基LB 培养基NZY 顶层琼脂NZY 平板硝酸纤维素膜RNA 探针实验步骤 ―、材料与设备1. 表达库：多采用 λ 噬菌体载体构建表达库，可根据需要选取载体。可购买预先制备好的表达库（Stratagenc 公司，Clontech 公司等均有售），也可以自己制备载体库。如 λgt11、λZAP ......阅读全文
Northwestern筛选蛋白表达文库实验
实验方法原理 Northwestern 筛选蛋白表达文库的方法是通过构建 IPTG 可诱导的融合蛋白表达文库（融合蛋白的 N 端由载体序列编码，C 端由克隆到载体的 cDNA 文库编码），进而诱导融合蛋白表达，并将蛋白质固定于硝酸纤维素滤膜上，以标记的 RNA 探针进行筛选，最终获取能与靶
Northwestern筛选蛋白表达文库实验
Northwestern 筛选蛋白表达文库的方法是通过构建 IPTG 可诱导的融合蛋白表达文库（融合蛋白的 N 端由载体序列编码，C 端由克隆到载体的 cDNA 文库编码），进而诱导融合蛋白表达，并将蛋白质固定于硝酸纤维素滤膜上，以标记的 RNA 探针进行筛选，最终获取能与靶 RNA 分子特异性结合
Northwestern筛选蛋白表达文库实验
实验方法原理 Northwestern 筛选蛋白表达文库的方法是通过构建 IPTG 可诱导的融合蛋白表达文库（融合蛋白的 N 端由载体序列编码，C 端由克隆到载体的 cDNA 文库编码），进而诱导融合蛋白表达，并将蛋白质固定于硝酸纤维素滤
筛选质粒载体构建表达文库实验
检测结合抗体的方法有以下 3 种：放射化学筛选，生色反应筛选及化学发光反应筛选。3 种方法的优缺点在本章导言中有所论述。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。试剂、试剂盒封闭缓冲液氯仿裂解缓冲液检测抗原-抗体复合物所用试剂SMTNT 缓冲液洗涤缓
筛选质粒载体构建表达文库实验
试剂、试剂盒 封闭缓冲液 氯仿 裂解缓冲液 检测抗原-抗体复合物所用试剂 SM TNT 缓冲液 洗涤缓冲液
筛选质粒载体构建表达文库实验
试剂、试剂盒 封闭缓冲液氯仿裂解缓冲液检测抗原-抗体复合物所用试剂SMTNT 缓冲液洗涤缓冲液 125I 标记的蛋白质 A 或 125I 标记的免疫球蛋白放射性碘化第二抗体第一抗体LB 或 SOB 琼脂平板仪器、耗材 空气培养箱平头镊子 装有防水黑墨水（印度墨水）并带有 18 号针头的注射器硝酸纤维
液相法筛选cDNA表达文库中RNA结合蛋白实验
实验方法原理 将 cDNA 文库表达的蛋白固定于硝酸纤维素膜或尼龙膜上，然后用标记的 RNA 对其进行筛选的方法是筛选 RNA 结合蛋白研究中最常用的技术。实验材料 TY试剂、试剂盒 储存液溶菌酶干粉细菌裂解缓冲液甘油水溶液实验步骤 一、材料与设备1. 2X TY：16 g 蛋白胨，10 g 酵母提
液相法筛选cDNA表达文库中RNA结合蛋白实验
实验方法原理 将 cDNA 文库表达的蛋白固定于硝酸纤维素膜或尼龙膜上，然后用标记的 RNA 对其进行筛选的方法是筛选 RNA 结合蛋白研究中最常用的技术。 实验材料
液相法筛选cDNA表达文库中RNA结合蛋白实验
将 cDNA 文库表达的蛋白固定于硝酸纤维素膜或尼龙膜上，然后用标记的 RNA 对其进行筛选的方法是筛选 RNA 结合蛋白研究中最常用的技术。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。实验方法原理将 cDNA 文库表达的蛋白固定于硝酸纤维素膜或尼龙膜上，然后用标记的 RNA 对其进行筛选的方法
真核表达文库的构建与筛选实验
实验材料 宿主细胞 质粒或λ噬菌体表达载体 包装提取物 电转化感受态大肠杆菌 试剂、试剂盒
真核表达文库的构建与筛选实验
实验材料 宿主细胞质粒或λ噬菌体表达载体包装提取物电转化感受态大肠杆菌试剂、试剂盒 限制性内切核酸酶缓冲液限制性内切核酸酶通过 poly(A)+富集的 mRNAcDNA 文库含适当抗生素的 Terrific 球脂平板含适当抗生素的 Terrific 肉汤培养基仪器、耗材 cDNA 合成试剂盒实验步骤
真核表达文库的构建与筛选实验
类似方案 1、方案 2 描述了在真核表达载体上进行 cDNA 文库构建与筛选的方法, 流程分为以下两个阶段：1. 在真核表达载体上构建 cDNA 文库；2. 在真核表达载体上构建的 cDNA 文库的筛选。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）上册，作者：黄培堂。实验材料宿主细胞质粒或λ噬菌体表达载体
筛选构建于λ噬菌体载体的表达文库实验
试剂、试剂盒 封闭缓冲液 氯仿 IPTG 抗原-抗体复合物检测试剂 SM TNT 缓冲液 洗涤缓冲液 放射
筛选构建于λ噬菌体载体的表达文库实验
在典型的免疫筛选实验中，λ噬菌体表达载体构建的文库应铺在不含异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG) 的大肠杆菌菌株的平板上。诱导物的缺少保证了噬菌斑顺利形成前不产生对宿主有毒性的融合蛋白，2~4 h 后，将平板从 42°C 移到 37°C 以稳定温度敏感型的所有融合蛋白。本实验来源于分子克隆实验指
筛选构建于λ噬菌体载体的表达文库实验（一）
试剂、试剂盒 封闭缓冲液氯仿IPTG抗原-抗体复合物检测试剂SMTNT 缓冲液洗涤缓冲液放射性碘标记第二抗体第一抗体LB 琼脂板LB 顶层琼脂板硝酸纤维素滤膜λ噬菌体表达文库E.coli仪器、耗材 预设 42°C 的空气培养箱培养管平头镊子装有防水黑墨水（印度墨水）并带有 18 号针头的注射器实验步
筛选构建于λ噬菌体载体的表达文库实验（二）
方法λ噬菌体的平板培养1. 取适当大肠杆菌菌株的单克隆进行接种，按第 2 章方案 1 介绍的方法制备用于铺平板的培养细菌。2. 假定每个 90 mm 平皿和 150 mm 平皿分别可长出 2X104 个和 5X104 个噬菌斑，计算筛选文库所需平皿数。对应每个平皿准备一个无菌试管（13 mm
融合蛋白的免疫筛选实验
实验材料 大肠杆菌试剂、试剂盒 LB顶层琼脂糖叠氮钠第一抗体仪器、耗材 硝酸纤维素滤膜实验步骤 1. 在150 ml LB 平板上滴定λgt11 cDNA文库的滴度，宿主菌为大肠杆菌LE392菌株，每个平板使用7 ml 1%LB顶层琼脂。2. 选择适当的滴度铺平板，于37℃温育8 h。 3.
融合蛋白的免疫筛选实验
基本方案 IPTG法 实验材料 大肠杆菌 试剂、试剂盒
mRNA－显示蛋白的筛选与扩增实验
基本方案 实验方法原理 实验材料 纯化的 mRNA 显示蛋白
mRNA－显示蛋白的筛选与扩增实验
实验材料纯化的 mRNA 显示蛋白试剂、试剂盒NaOHHClNaClMgCl2乙醇1-丁醇苯酚 氯仿 异戊醇EDTAPCR 缓冲液ATP 琼脂糖ATP-适配体筛选结合缓冲液ATP-适配体筛选洗脱缓冲液鲑精 DNABSA3'引物5'引物Taq DNA 聚合酶仪器、耗材凝胶过滤柱实验步骤
mRNA－显示蛋白的筛选与扩增实验
实验方法原理 实验材料 纯化的 mRNA 显示蛋白试剂、试剂盒 NaOHHClNaClMgCl2 乙醇1-丁醇苯酚 氯仿 异戊醇EDTAPCR 缓冲液ATP 琼脂糖ATP-适配体筛选结合缓冲液ATP-适配体筛选洗脱缓冲液鲑精 DNABSA3'引物5'引物Taq DNA 聚合酶仪器、耗
利用λ噬菌体文库筛选－DNA－结合蛋白实验
试剂、试剂盒 ATP 结合缓冲液 变性溶液 二硫苏糖醇 EDTA 乙醇激酶 连接酶缓冲液 酚 氯
融合蛋白的免疫筛选实验——IPTG法
实验方法原理用抗体筛选λgt11 cDNA文库时，可待噬斑长到一定裎度方可诱导表达融合蛋白，筛选到阳性克隆的成功概率就可能大大增加。噬菌体生长3~4 h 后，将含诱导剂IPTG的滤膜放入噬斑平板，即可诱导β-半乳糖苷酶-cDNA融合蛋白的表达，继续在37℃培养，然后按基本方案用抗体对影印滤膜进行筛选
利用λ噬菌体文库筛选－DNA－结合蛋白实验
试剂、试剂盒 ATP结合缓冲液变性溶液二硫苏糖醇EDTA乙醇激酶 连接酶缓冲液酚氯仿筛选缓冲液SDS醋酸钠TET4 噬菌体 DNA 连接酶T4 噬菌体多核苷酸激酶合成的寡核苷酸[a-32P]ATP非变性聚丙烯酰胺凝胶仪器、耗材 烤盘结晶皿平头镊子装有防水黑墨水注射器硝酸纤维素滤膜Sephadex G
利用λ噬菌体文库筛选－DNA－结合蛋白实验
可利用合成双链寡核苷酸筛选构建于λ噬菌体的 cDNA 表达文库，以鉴定与特异 DNA 结合蛋白质相对应的克隆（Singhetal.1988,Vinsonetal.1988)。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。试剂、试剂盒ATP结合缓冲液变性溶
融合蛋白的免疫筛选实验——基本方案
实验材料大肠杆菌试剂、试剂盒LB顶层琼脂糖叠氮钠第一抗体仪器、耗材硝酸纤维素滤膜实验步骤1. 在150 ml LB 平板上滴定λgt11 cDNA文库的滴度，宿主菌为大肠杆菌LE392菌株，每个平板使用7 ml 1%LB顶层琼脂。2. 选择适当的滴度铺平板，于37℃温育8 h。 3. 将直径1
抑制细菌转录终止检测技术筛选RNA结合蛋白实验
实验方法原理 一种通过筛选重组 cDNA 文库研究多肽与 RNA 相互作用的细菌抗转录终止检测系统。 实验材料 N-表达质粒 E.coi
溶解膜蛋白用的去垢剂的筛选实验
虽然 TriumX-100 是从鼠肝质膜溶解胰岛素受体的一种良好的去垢剂，但它未必适合其他膜蛋白的溶解。这里，介绍一种筛选去垢剂的策略以确定它是否适于溶解某一待分离的膜蛋白。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。实验步骤操作程序1) 将膜制备物悬浮于所选的缓冲系统（如，磷酸缓冲液或 H
抑制细菌转录终止检测技术筛选RNA结合蛋白实验
一种通过筛选重组 cDNA 文库研究多肽与 RNA 相互作用的细菌抗转录终止检测系统。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。实验方法原理一种通过筛选重组 cDNA 文库研究多肽与 RNA 相互作用的细菌抗转录终止检测系统。实验材料N-表达质粒E.coil N567 感受态细菌试剂、试剂盒储
蛋白质库的设计和筛选概率计算实验
在设计蛋白质库进行筛选时，在能够进行筛选的物理极限内我们必须尽一切可能产生出蛋白质变体的多样性。本章的目标是将概率的语言引入蛋白质工程实验中，进而来回答一些常见的问题。本实验来源「现代蛋白质工程实验指南」〔德〕K.M.阿恩特、K.M.米勒编著。实验步骤此节主要分为两个子节。在 3.1 节中，我们提出