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筛选构建于λ噬菌体载体的表达文库实验(一)

试剂、试剂盒 封闭缓冲液氯仿IPTG抗原-抗体复合物检测试剂SMTNT 缓冲液洗涤缓冲液放射性碘标记第二抗体第一抗体LB 琼脂板LB 顶层琼脂板硝酸纤维素滤膜λ噬菌体表达文库E.coli仪器、耗材 预设 42°C 的空气培养箱培养管平头镊子装有防水黑墨水(印度墨水)并带有 18 号针头的注射器实验步骤 材料缓冲液贮存液、缓冲液及试剂的组分请见附录 1, 贮存液稀释至含适浓度。封闭缓冲液10mmol/L Tris-Cl(pH8.0)150 mmol/L NaCl0.05%(V/V) Tween-2020%(V/V) 胎牛血淸另外,也可用 5%(V/V) 脱脂奶粉或含 1% 明胶 (m/V) 和 3%(m/V) 牛血清白蛋白的 TNT 缓冲液作封闭缓冲液。至于哪种试剂最好,不同实验室各执一辞。建议研究者通过预实验来决定最佳选择。封闭缓冲液于 4°C 保存,可反复使用数次。洧液中加入终浓度为 0.05% 的叠氮化钠抑制微生......阅读全文

编码DNA结合蛋白的cDNA克隆的检测、纯化和鉴定实验1

一个DNA位点识别探针被用来从表达文库中检测合适的重组克隆,并对 之进行纯化,证明其中编码了具有一定序列特异性的DNA结合域。这种策略排除了为 分离其基因而对序列特异性DNA结合蛋白进行纯化的过程;只需要一个合适的构建于 λgtll载体中的cDNA文库和一个DNA识别位点的探针。用位点识别DNA筛选