膜钳片实验

实验材料 细胞组织试剂、试剂盒 硅酮树脂电极液仪器、耗材 膜片微电极滤膜 防震工作台屏蔽罩仪器设备架单色光系统膜片钳放大器刺激器数据采集的设备微操纵器实验步骤 第一步是分两次拉制,第一次拉长7~10mm,直径小于200μm,在此基础上进行第二次拉制,最终使尖端的直径为1~2μm,两步拉制的目的主要是使电极前端的锥度变大,狭窄部长度缩短,因此可降低电极的串联电阻,也可减少全细胞记录时的电极液透析时间。由于膜片微电极最忌沾染灰尘和脏物,更忌触碰尖端附近部位,所以一般要求在使用前制作。 第二步是在电极前端涂以硅酮树脂(sylgard),其目的是为了降低电极与灌流液之间的电容,并形成一个亲水界面。经此处理后,上述电容可由6~8pF减少到1pF以下。硅酮树脂对形成Giga?鄄seals无影响,但可减少本底噪音,对单通道记录很重要。在进行全细胞记录时,不用硅酮树脂也可以得到满意的效果,通常微电极在涂抹硅酮树脂后再进行抛光,但最好是......阅读全文

膜钳片实验

实验材料 细胞组织试剂、试剂盒 硅酮树脂电极液仪器、耗材 膜片微电极滤膜 防震工作台屏蔽罩仪器设备架单色光系统膜片钳放大器刺激器数据采集的设备微操纵器实验步骤 第一步是分两次拉制,第一次拉长7~10mm,直径小于200μm,在此基础上进行第二次拉制,最终使尖端的直径为1~2μm,两步拉制的目的主要是

膜钳片

运用膜片钳 进行膜离子通道特性的研究,是一项艰辛、细致、繁杂的工作,要求较高的技术水平和实验条件作保证,现在大致介绍一下膜片钳 实验的过程。实验材料细胞组织试剂、试剂盒硅酮树脂电极液仪器、耗材膜片微电极滤膜 防震工作台屏蔽罩仪器设备架单色光系统膜片钳放大器刺激器数据采集的设备微操纵器实验步骤第一步是

膜钳片

膜钳片             实验材料 细胞组织 试剂、试剂盒

疟原虫薄血膜推片实验

实验步骤将一小滴外周血(采自耳垂或指尖)滴于一载玻片一侧,另取一载玻片为推片,使其一端接触血滴,使血滴向两侧分散,二玻片间保持30°~ 45°角度,将推片紧靠载玻片沿其表面迅速向前推动,形成分布均匀的血膜,自然干燥后用甲醇1~2滴固定。以稀释的姬氏染液染色30分钟晾干、镜检。或以 瑞氏染液染色3~5

疟原虫厚血膜推片实验

实验步骤取外周血一大滴,滴于薄血片的右端1/3处,以推片一角,将血滴自内向外作螺形摊开,形成直径1 cm大小的厚薄均匀的厚血膜。自然晾干后,用蒸馏水1滴加于血膜上,待血膜成灰白色时,将水倾去,再用甲醇固定。以稀释的姬氏染液染色30分钟晾干、镜检。或以瑞氏染液染色3~5分钟晾干、镜检。

疟原虫薄血膜推片实验

将一小滴外周血(采自耳垂或指尖)滴于一载玻片一侧,另取一载玻片为推片,使其一端接触血滴,使血滴向两侧分散,二玻片间保持30°~ 45°角度,将推片紧靠载玻片沿其表面迅速向前推动,形成分布均匀的血膜,自然干燥后用甲醇1~2滴固定。以稀释的姬氏染液染色30分钟晾干、镜检。或以 瑞氏染液染色3

疟原虫厚血膜推片实验

取外周血一大滴,滴于薄血片的右端1/3处,以推片一角,将血滴自内向外作螺形摊开,形成直径1 cm大小的厚薄均匀的厚血膜。自然晾干后,用蒸馏水1滴加于血膜上,待血膜成灰白色时,将水倾去,再用甲醇固定。以稀释的姬氏染液染色30分钟晾干、镜检。或以瑞氏染液染色3~5分钟晾干、镜检。

膜片钳实验操作

运用膜片钳进行膜离子通道特性的研究,是一项艰辛、细致、繁杂的工作,要求较高的技术水平和实验条件作保证,现在大致介绍一下膜片钳实验的过程,粗略地包括以下几个方面。1. 标本制备 根据研究目的的不同,可采用不同的细胞组织,如心肌细胞、平滑肌细胞、肿瘤细胞等,现在几乎可对各种细胞进行膜片钳的研究。对所

膜片钳操作实验

膜片钳技术可应用于:(1)膜离子通道特性的研究;(2)药物筛选。实验方法原理膜片钳技术是用微玻管电极(膜片电极或膜片吸管)接触细胞膜,以千兆欧姆以上的阻抗使之封接,使与电极尖开口处相接的细胞膜的小区域(膜片)与其周围在电学上分隔,在此基础上固定点位,对此膜片上的离子通道的离子电流(pA级)进行监测记

膜片钳实验操作

运用膜片钳进行膜离子通道特性的研究,是一项艰辛、细致、繁杂的工作,要求较高的技术水平和实验条件作保证,现在大致介绍一下膜片钳实验的过程,粗略地包括以下几个方面。 1. 标本制备 根据研究目的的不同,可采用不同的细胞组织,如心肌细胞、平滑肌细胞、肿瘤细胞等,现在几乎可对各种细胞进行膜片钳的研究。对所

膜片钳操作实验

运用膜片钳进行膜离子通道特性的研究,是一项艰辛、细致、繁杂的工作,要求较高的技术水平和实验条件作保证,现在大致介绍一下膜片钳实验的过程,粗略地包括以下几个方面。 1. 标本制备 根据研究目的的不同,可采用不同的细胞组织,如心肌细胞、平滑肌细胞、肿瘤细胞等,现在几乎可对各种细胞进行膜片钳的研究

膜片钳与植物膜生物学研究

何龙飞1 、2  沈振国1 刘友良1  王爱勤2 (1 南京农业大学农学系,南京210095   2 广西大学农学院,南宁530004 )   膜片钳技术(patch2clamp technique ,PC) 是原西德马普所Erwin Neher 和Bert Sakmann 于1976 年发明的

脑片膜片钳实验方法(三)

4、突触反应的判断及其波幅稳定性的评价突触信号的判断   突触信号样的假象波有三个来源。第一、邻近纤维的活动使静止细胞产生电压波动;第二、如果恒流刺激强度过大,电流就可被注入突触后神经元,使其产生失活时间类似EPSP或EPSC的信号,其信号幅度随刺激强度的变化而变化;第三、直接刺激突触后神经元诱导

脑片膜片钳实验方法(五)

(2) 自发性突触反应的分析  突触反应的检测   目前有三种方法判断自发性突触反应(Hwang,1999)。第一、峰值超过即定阈值,该方法受基线波动的影响较大,这可以通过基线加以弥补;第二、峰值相对于基线的变化量超过阈值,它受高频噪声的干扰较大,而且,很难设定一个合适的阈值,为克服这些不足,可以

脑片膜片钳实验方法(二)

二、海马脑片的膜片钳记录1、将刺激电极放置在含突触前纤维脑片区域附近在突触传递的研究中,应该同时记录突触前和突触后神经元的电信号,虽然,并不是所有突触前神经元胞体的动作电位均可传导至突触 (Vincent, 1996)。由于在突触前和突触后两个神经元上同时做膜片钳记录较困难,因此,需要用其它的方

脑片膜片钳实验方法(四)

5、突触反应的记录现在许多实验室都开始应用膜片钳技术记录培养神经元间、组织片中和异体移植组织中的突触传递。与尖电极记录相比,它具有明显的优势。如,记录的成功率较高,较高的信噪比,能较准确地钳制胞电位等。膜片钳甚至可以应用于在位突触活动的记录(Covey, 1996)。记录自发突触后反应   自发的

脑片膜片钳实验方法(一)

1966年,Yamamoto和McIlwain首次在脑片上记录了电生理活动(1966a, b),证实了脑组织在体外也能存活,并保持很好的活性状态。此后,该方法在生理学研究中的应用越来越广泛,并为中枢神经系统生理和药理学领域突飞猛进的发展奠定了基础。1989年,Blanton将脑片电生理记录与细胞

膜片钳实验系统配置

一个电生理配置有4个主要的需求:环境需求:保持标本的健康的手段。光学需求:显现标本以供观察的手段。机械结构需求:稳定定位微电极的手段。电子学需求:放大和测量信号的手段。我们将配置分成两种类型的“典型”配置:胞外记录和单通道膜片钳记录。胞外记录的配置该配置主要用于记录脑片的场电位。一般目标是将一个相对

培养细胞膜片钳记录实验

实验方法原理 培养细胞膜片钳记录是在无菌条件下将组织块经过机械分离和消化酶的处理后分离成单个细胞并在孵箱中培养数天后进行常规膜片钳记录的一种方法。细胞原代培养过程与急性分离细胞的过程基本一致,但前者需在无菌条件下进行实验材料 细胞试剂、试剂盒 细胞培养液一般用F-12medium细胞分离过程用液一般

组织薄片膜片钳全细胞记录实验

实验方法原理通过全细胞膜片钳技术来检测组织薄片(脊髓片或脑片)上神经元的突触后电位、突触后电流及该突触后电位或电流的可塑性改变等现象。组织薄片膜片钳技术与分散细胞膜片钳技术相比,具有的优点是组织薄片中的细胞更接近在体的原始环境,很好地保持了神经元之间的突触联系。实验材料神经细胞试剂、试剂盒孵育细胞外

培养细胞膜片钳记录实验

基本方案             实验方法原理 培养细胞膜片钳记录是在无菌条件下将组织块经过机械分离和消化酶的处理后分离成单个细胞并在孵箱中培养数天后进行常规膜片钳记录的一种方法。细

实验室检验检测工具坩埚钳

坩埚钳(crucible tongs),一种常见的化学仪器。通常用来夹取坩埚。一般由不锈钢,或不可燃、难氧化的硬质材料制成。夹持坩埚加热或从热源(煤气灯、电炉、马福炉、酒精灯)中取、放坩埚。夹持固体物质加热或燃烧。1.必须使用干净的坩埚钳。2.用坩埚钳夹取灼热的坩埚时,必须将钳尖先预热,以免坩埚因局

组织薄片膜片钳全细胞记录实验

实验方法原理 通过全细胞膜片钳技术来检测组织薄片(脊髓片或脑片)上神经元的突触后电位、突触后电流及该突触后电位或电流的可塑性改变等现象。组织薄片膜片钳技术与分散细胞膜片钳技术相比,具有的优点是组织薄片中的细胞更接近在体的原始环境,很好地保持了神经元之间的突触联系。实验材料 神经细胞试剂、试剂盒 孵育

组织薄片膜片钳全细胞记录实验

基本方案             实验方法原理 通过全细胞膜片钳技术来检测组织薄片(脊髓片或脑片)上神经元的突触后电位、突触后电流及该突触后电位或电流的可塑性改变等现象。组织薄片膜片

培养细胞膜片钳记录实验

实验方法原理培养细胞膜片钳记录是在无菌条件下将组织块经过机械分离和消化酶的处理后分离成单个细胞并在孵箱中培养数天后进行常规膜片钳记录的一种方法。细胞原代培养过程与急性分离细胞的过程基本一致,但前者需在无菌条件下进行实验材料细胞试剂、试剂盒细胞培养液一般用F-12medium细胞分离过程用液一般用Pu

钳形接地双钳特性与参数

  钳形接地双钳特性与参数   钳形接地电阻测试仪双钳特性   1.双钳法/地桩法双重测量方式:   适合任意接地场所,多点或单点接地,都可正常测试。   2.抗干扰能力强:   自产生高频电流,从而过滤市电中50HZ、100HZ等谐波干扰电流,即使在500KV变电站环境下,也能测量。

膜片钳的多种记录形式:细胞贴附模式、膜内面向外模...

膜片钳的多种记录形式:细胞贴附模式、膜内面向外模式、膜外面向外模式和穿孔膜片模式 在膜片钳技术的发展过程中,主要形成了四种记录模式,即细胞贴附模式(cell-attached mode或on-cell mode)、膜内面向外模式(inside-out mode)、膜外面向外模式(outsid

什么是全细胞膜片钳实验

  膜片钳技术被称为研究离子通道的“金标准”。是研究离子通道的最重要的技术。目前膜片钳技术已从常规膜片钳技术(Conventional patch clamp technique)发展到全自动膜片钳技术(Automated patch clamp technique)。  传统膜片钳技术每次只能记录

膜片钳实验系统震动消除和噪声消除

震动的消除方法通过仔细的设计,是可以避免震动的危害,例如在半夜的地下室,各种白天的震动都消失了。但预防震动比仅仅靠小心更重要。需要一个用来补偿微操纵器的复杂的空气隔离实验台和一个稳定良好设计的微操纵器。微操纵器必须是坚固而紧凑的。因此其移动部分(包括从微操纵器Holder、电极尖端、到chamber

神经组织块膜片钳全细胞记录实验

基本方案             实验方法原理 通过全细胞膜片技术来检测神经元兴奋性及其放电活动,是电生理实验的基本方法。神经组织块膜片钳技术相对于培养细胞膜片钳技术而言,细胞更接近