蛋白质浓缩和溶质的去除实验（二）
5 生 产 规 模 的 层 析类似于分析用的小规模提取，制备规模和生产规模的蛋白质回收往往包括浓缩和脱盐 。柱层析仍然是蛋白质纯化的核心技术，这归因于其可实现的高选择性，同时具有方便耐用的填充树脂床，原料在树脂中通过流动而进行传送。商业化生产酶和生物药品通常需要加工数千升的初始原料。为了尽量减少操作的复杂性，减少加工时间，同时有效的控制成本，可能有必要在下游操作过程的早期对原料进行浓缩，去除大部分杂质和不必要的盐分。这可以通过使用直径达2 m 的大的树脂层析柱床经结合-洗脱层析来实现, 其产生的洗脱组分小于上样体积。此外, 可开发选择性的树脂，用以纯化相应的蛋白质产品。一个 著 名 的 例 子 是 使 用 Protein A 亲 和 树 脂 来 生 产 哺 乳 动 物 细 胞 所 表 达 的 抗 体 蛋 白 。在亲和 捕 获（由 目 标 分 子 F c 区 域 的 特 定 表 位 所 介 导 )过 程 中 ......阅读全文
蛋白质浓缩和溶质的去除实验（二）
5 生 产 规 模 的 层 析类似于分析用的小规模提取，制备规模和生产规模的蛋白质回收往往包括浓缩和脱盐 。柱层析仍然是蛋白质纯化的核心技术，这归因于其可实现的高选择性，同时具有方便耐用的填充树脂床，原料在树脂中通过流动而进行传送。商业化生产酶和生物药品通常需要加工数千升的初始原料。为了尽量
蛋白质浓缩和溶质的去除实验
预计在新奇的一级分子和生物仿制药实体方面将会有突出的增长。一些进步的是改良的分析、开发和相互作用。现在已有许多用于去除關的方法，包括冻干、反向萃取、溶质析出，precipitation、透析(溶剂交换） 、超滤和层析技术。值得注意的是，在众多微和设备发展的支持下，小型化和高通量的蛋白质分析取得了极大
蛋白质浓缩和溶质的去除实验
蛋白质浓缩和溶质的去除实验 实验步骤 一、层析 在过去的 2 0 年中，蛋白质组学技术的日益
蛋白质浓缩和溶质的去除实验（三）
三、透析透析是基于分子质量大小的液相分离技术，它由透过半透膜的选择性扩散来实现。这种技术被认为是从大分子蛋白质中去除小分子溶质的最流行方法。特别是，这种非变性的脱盐技术允许在良性或生理条件下更换缓冲液，其影响目标蛋白质性质的风险可降到最低限度。过去的十年里，透析的原理并没有改变，但用于透析的技术和工
蛋白质浓缩和溶质的去除实验（四）
1.超滤膜一 般 情 况 下 ，大 多 数 超 滤 膜 包 含 一 个 坚 固 的 支 撑 结 构 (如 T y v e k ® ) ，并 在 这 一 基 础 上附加了一个非常薄的聚合物层。实际上正是这一薄层提供了选择性通透膜所需的性质，并决定了流阻。用于超滤的膜的生产技术在过去几十年里都没
蛋白质浓缩和溶质的去除实验（一）
一、层析在过去的 2 0 年中，蛋白质组学技术的日益广泛应用，使蛋白质浓缩和脱盐的层析技术得到不断革新。蛋白质组学通常需要从少量复杂的混合物中富集蛋白质，包括选择性地浓缩特定种类的蛋白质。由于质谱 (M S ) 和基于抗体检测技术的高灵敏度及可提供详细生化特征的性质，它们在临床诊断、
蛋白质浓缩和溶质的去除实验（五）
五、冷 冻 干 燥溶液中溶质的浓缩可以从热力学上通过驱使溶剂变成气态进人顶部空间 (蒸发) 或煮沸而实现。不幸的是，不稳定的溶质(如蛋白质分子)可以被用于除去溶剂所需的热量快速降解。由于溶液的沸点是溶液的蒸气压等于大气压 (顶部空气压力） 时的温度，因此，通过增加溶液的温度或通过降低大气压力
聚乙二醇沉淀法浓缩蛋白质实验
实验方法原理聚乙二醇（PEG）是一个非离子水溶性多聚体，使用 PEG 沉淀蛋甶质时，只在个别浓度下才使蛋白质稍有变性。由于 PEG 溶解时散热低，形成沉淀的子衡时间短等特点，使它在蛋白质的组分分离以及结晶中成为一个有用的试剂。通常 PEG 终浓度达 30％ 时，蛋白质就能够达到最大量沉淀。实验材料蛋
聚乙二醇沉淀法浓缩蛋白质实验
聚乙二醇法 实验方法原理 聚乙二醇（PEG）是一个非离子水溶性多聚体，使用 PEG 沉淀蛋甶质时，只在个别浓度下才使蛋白质稍有变性。由于 PEG 溶解时散
聚乙二醇沉淀法浓缩蛋白质实验
实验方法原理 聚乙二醇（PEG）是一个非离子水溶性多聚体，使用 PEG 沉淀蛋甶质时，只在个别浓度下才使蛋白质稍有变性。由于 PEG 溶解时散热低，形成沉淀的子衡时间短等特点，使它在蛋白质的组分分离以及结晶中成为一个有用的试剂。通常 PEG 终浓度达 30％ 时，蛋白质就能够达到最大量沉淀。
溶质的种类和应用
溶质，溶液中被溶剂溶解的物质。溶质可以是固体（如溶于水中的糖）、液体（如溶于水中的酒精）、或气体（如溶于碳酸饮料中的二氧化碳）。其实在溶液中，溶质和溶剂只是一组相对的概念。一般来说，相对较多的那种物质称为溶剂，而相对较少的物质称为溶质。
批量层析法浓缩蛋白质实验
实验方法原理批量层析的特点在于层析用树脂不放在柱中，而是放在烧杯或瓶子的容器中；通过搅拌或摇动而混内层析；以过滤或离心的办法分出层析液。实验材料蛋白质溶液仪器、耗材离子交换层析装置实验步骤1. 在烧杯或锥形瓶中平衡树脂，不断搅拌以促进平衡；2. 倾泻掉大部分溶液，保留的溶液置要使树脂能轻松的搅拌；3
超滤法浓缩蛋白质溶液实验
超滤法 实验方法原理 超滤浓缩蛋白质是通过外力使蛋白质溶液通过滤膜而仍保留目的蛋白质的方法。实验室超滤主要是针对小体积蛋白质溶液（几毫升），用离心力的方法使溶
超滤法浓缩蛋白质溶液实验
实验方法原理 超滤浓缩蛋白质是通过外力使蛋白质溶液通过滤膜而仍保留目的蛋白质的方法。实验室超滤主要是针对小体积蛋白质溶液（几毫升），用离心力的方法使溶液很容易通过滤膜。我们以 Amicon 系作为超滤的实例进行描述。这个方法不易引起蛋白质变性。微型浓缩器初始容量有 2 ml 以及更小的，2 mg
批量层析法浓缩蛋白质实验
批量层析法 实验方法原理 批量层析的特点在于层析用树脂不放在柱中，而是放在烧杯或瓶子的容器中；通过搅拌或摇动而混内层析；以过滤或离心的办法分出层析液。
批量层析法浓缩蛋白质实验
实验方法原理 批量层析的特点在于层析用树脂不放在柱中，而是放在烧杯或瓶子的容器中；通过搅拌或摇动而混内层析；以过滤或离心的办法分出层析液。实验材料 蛋白质溶液仪器、耗材 离子交换层析装置实验步骤 1. 在烧杯或锥形瓶中平衡树脂，不断搅拌以促进平衡；2. 倾泻掉大部分溶液，保留的溶液置要使树脂能轻松的
超滤法浓缩蛋白质溶液实验
实验方法原理超滤浓缩蛋白质是通过外力使蛋白质溶液通过滤膜而仍保留目的蛋白质的方法。实验室超滤主要是针对小体积蛋白质溶液（几毫升），用离心力的方法使溶液很容易通过滤膜。我们以 Amicon 系作为超滤的实例进行描述。这个方法不易引起蛋白质变性。微型浓缩器初始容量有 2 ml 以及更小的，2 mg/ml
使用Microlute－P3－PL微孔板去除板去除蛋白质和磷脂
P3板去除蛋白质类似，确定了从生物样品中去除不需要的磷脂。 P3 PL板结合了我们备受推崇的蛋白质沉淀技术和可以选择性去除血清样品中离子化磷脂的部分。已知这些会引起离子抑制，在使用最敏感的仪器（例如三重四极杆和TOF-MS单元）进行LC-MS分析时，可能导致假阳性或假阴性结果。 该装备易于使用且遵循
免疫沉淀法浓缩蛋白质实验
实验方法原理通过免疫沉淀，用蛋白质特异性抗体能够定量分离目的蛋白。免疫沉淀法由三个步骤组成。首先将特异性抗体加入细胞提取物，第二步加入经化学固定的金黄色葡萄球菌，以确保形成大量沉淀。这些细菌通过蛋白质 A 和抗体形成复合物，蛋白质 A 与免疫球蛋白的 Fe 部分有高度的亲和性。或者说，纯化的蛋白质
免疫沉淀法浓缩蛋白质实验
免疫沉淀法 实验方法原理 通过免疫沉淀，用蛋白质特异性抗体能够定量分离目的蛋白。免疫沉淀法由三个步骤组成。首先将特异性抗体加入细胞提取物，第二步加入经化学固定
免疫沉淀法浓缩蛋白质实验
实验方法原理 通过免疫沉淀，用蛋白质特异性抗体能够定量分离目的蛋白。免疫沉淀法由三个步骤组成。首先将特异性抗体加入细胞提取物，第二步加入经化学固定的金黄色葡萄球菌，以确保形成大量沉淀。这些细菌通过蛋白质 A 和抗体形成复合物，蛋白质 A 与免疫球蛋白的 Fe 部分有高度的亲和性。或者说，纯化的蛋
用酸沉淀法浓缩蛋白质实验
三氯醋酸沉淀法 丙酮沉淀法 实验方法原理 实验材料 含蛋白质的样品
用酸沉淀法浓缩蛋白质实验
实验方法原理 实验材料 含蛋白质的样品试剂、试剂盒 100％三氯醋酸（TCA）0.1N NaOH（400 mg NaOH 溶于 100 ml 蒸馏水）实验步骤 1. 在 1ml 样品中至少要含有 5mg 蛋白质。加 100 ul 100％ 的三氯醋酸（TCA），混匀；2. 将蛋白质在冰浴中沉淀 30
蛋白质的浓缩技术
蛋白质浓缩技术是免疫学中常用的手段，现介绍几种常用的浓缩技术。（一）透析袋浓缩法利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最广的一种。将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋（无透析袋可用玻璃纸代替），结扎，把高分子（6 000－12 000）聚合物如聚乙二醇（碳蜡）、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。也可将吸
蛋白质的浓缩方法
蛋白质浓缩技术是免疫学中常用的手段，现介绍几种常用的浓缩技术。（一）透析袋浓缩法利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最广的一种。将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋（无透析袋可用玻璃纸代替），结扎，把高分子（6 000－12 000）聚合物如聚乙二醇（碳蜡）、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。也可将吸水剂
蛋白质的浓缩方法
蛋白质浓缩技术是免疫学中常用的手段，现介绍几种常用的浓缩技术。（一）透析袋浓缩法利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最广的一种。将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋（无透析袋可用玻璃纸代替），结扎，把高分子（6 000－12 000）聚合物如聚乙二醇（碳蜡）、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。也可将吸水剂
蛋白质的浓缩技术
实验概要蛋白质浓缩技术是免疫学中常用的手段，现介绍几种常用的浓缩技术。实验步骤1. 透析袋浓缩法利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最广的一种。将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋（无透析袋可用玻璃纸代替），结扎，把高分子（6000－12000）聚合物如聚乙二醇（碳蜡）、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。
有机溶剂沉淀法浓缩蛋白质实验
有机溶剂沉淀法 实验方法原理 将有机溶液例如丙酮和乙醇加入蛋白质溶液时，和高浓度盐类似产生沉淀，这是因为它们能够降低蛋白质的溶解度。在温度为 10 ℃ 左
有机溶剂沉淀法浓缩蛋白质实验
实验方法原理 将有机溶液例如丙酮和乙醇加入蛋白质溶液时，和高浓度盐类似产生沉淀，这是因为它们能够降低蛋白质的溶解度。在温度为 10 ℃ 左右时蛋白质在有机溶剂中容易变性，所以在沉淀时必须特别注意冷却溶液和离心转头（0 ℃～4 ℃ 为佳），建议离子强度为 0.05～0.2 mol/L。有机溶剂
翻译后修饰蛋白质的定性和定量实验（二）
二、用 于 鉴 定 P T M 的富 集 技 术2.1 磷酸化丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸残基的可逆磷酸化也许是研究最为深人的 PT M 。蛋白质磷酸化信号网络介导细胞对与不同的应激因子、生长因子、细胞因子以及细胞间相互作用作出响应。憐酸化还影响多种细胞进程，如增殖、凋亡 、迁移 、转录和蛋白