蛋白质浓缩和溶质的去除实验（二）
5 生 产 规 模 的 层 析类似于分析用的小规模提取，制备规模和生产规模的蛋白质回收往往包括浓缩和脱盐 。柱层析仍然是蛋白质纯化的核心技术，这归因于其可实现的高选择性，同时具有方便耐用的填充树脂床，原料在树脂中通过流动而进行传送。商业化生产酶和生物药品通常需要加工数千升的初始原料。为了尽量减少操作的复杂性，减少加工时间，同时有效的控制成本，可能有必要在下游操作过程的早期对原料进行浓缩，去除大部分杂质和不必要的盐分。这可以通过使用直径达2 m 的大的树脂层析柱床经结合-洗脱层析来实现, 其产生的洗脱组分小于上样体积。此外, 可开发选择性的树脂，用以纯化相应的蛋白质产品。一个 著 名 的 例 子 是 使 用 Protein A 亲 和 树 脂 来 生 产 哺 乳 动 物 细 胞 所 表 达 的 抗 体 蛋 白 。在亲和 捕 获（由 目 标 分 子 F c 区 域 的 特 定 表 位 所 介 导 )过 程 中 ......阅读全文
蛋白质的浓缩技术方法
（一）浓缩胶浓缩法 浓缩胶是一种高分子网状结构的有机聚合物，具有很强的吸水性能。每克干胶可吸水120ml～150ml。它能吸收低分子量的物质，如水、葡萄糖、蔗糖、无机盐等，适宜浓缩10 000分子量以上的生物大分子物质。浓缩后，蛋白质的回收率可达80％～90％。比浓缩胶应用方便，直接加入被
蛋白质的浓缩技术方法
（一）浓缩胶浓缩法 浓缩胶是一种高分子网状结构的有机聚合物，具有很强的吸水性能。每克干胶可吸水120ml～150ml。它能吸收低分子量的物质，如水、葡萄糖、蔗糖、无机盐等，适宜浓缩10 000分子量以上的生物大分子物质。浓缩后，蛋白质的回收率可达80％～90％。比浓缩胶应用方便，直接加入被
蛋白质的浓缩技术方法
（一）浓缩胶浓缩法浓缩胶是一种高分子网状结构的有机聚合物，具有很强的吸水性能。每克干胶可吸水120ml～150ml。它能吸收低分子量的物质，如水、葡萄糖、蔗糖、无机盐等，适宜浓缩10 000分子量以上的生物大分子物质。浓缩后，蛋白质的回收率可达80％～90％。比浓缩胶应用方便，直接加入被浓缩
蛋白质的浓缩技术方法
蛋白质浓缩技术是免疫学中常用的手段，现介绍几种常用的浓缩技术。（一）透析袋浓缩法利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最广的一种。将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋（无透析袋可用玻璃纸代替），结扎，把高分子（6 000－12 000）聚合物如聚乙二醇（碳蜡）、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。也可将吸水剂
蛋白质的浓缩技术方法
蛋白质浓缩技术是免疫学中常用的手段，现介绍几种常用的浓缩技术。（一）透析袋浓缩法利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用zui广的一种。将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋（无透析袋可用玻璃纸代替），结扎，把高分子（6 000－12 000）聚合物如聚乙二醇（碳蜡）、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。也可将吸
从稀释水溶液中萃取和浓缩蛋白质
《从稀释水溶液中萃取和浓缩蛋白质》(Extraction and Concentration of Protein from Dilute Aqueous Solution) 应用领域：生物/生物科技 目标分析物：牛血清白蛋白BSA 样品基质：水 萃取柱：BAKERBOND s
Norgen试剂盒在总蛋白浓缩去污剂和内毒素去除的应用
蛋白质浓缩技术属于生物大分子的浓缩技术，目的是利用物理或化学的方法，除去蛋白质溶液中的水分、离子和其它小分子物质，使单位体积内的蛋白质浓度大幅度提高。蛋白质样品经过一系列的分离提取和层析会导致样品的稀释，而许多分析和研究都需要高浓度或高纯度的样品，所以蛋白质样品的浓缩至关重要。蛋白质浓缩技术主要有透
蛋白质沉淀浓缩方法
在生化制备中，沉淀主要用于浓缩目的，或用于除去留在液相或沉淀在固相中的非必要成分。在生化制备中常用的有以下几种沉淀方法和沉淀剂： 1．盐析法 多用于各种蛋白质和酶的分离纯化。 2．有机溶剂沉淀法 多用于生物小分子、多糖及核酸产品的分离纯化，有时也用于蛋白质沉淀。 3．等电点沉淀法 用于氨基酸、
硫酸铵沉淀法浓缩蛋白质实验
硫酸铵沉淀法 实验方法原理 当高浓度盐存在时，蛋白质往往凝聚并析出沉淀。这一技术称为「盐析」。不同的蛋白质在不同浓度的盐中形成沉淀，所以盐析常用于蛋白质的分离
硫酸铵沉淀法浓缩蛋白质实验
实验方法原理 当高浓度盐存在时，蛋白质往往凝聚并析出沉淀。这一技术称为「盐析」。不同的蛋白质在不同浓度的盐中形成沉淀，所以盐析常用于蛋白质的分离纯化。几种因素如 pH 、温度、蛋白质纯度在测定各种蛋白质的盐析时起着重要作用。选择硫酸铵是因为它具有一些优良性质，如盐析的有效性、pH 范围广、溶解度高、
蛋白质纯度测定实验（二）
方法制样的方法根据所选用电泳方法的性质而定。读者可参考本卷其他章节中有关非变性凝胶电泳和等电聚焦电泳的讨论。最常用的 SDS 凝胶电泳是蛋白质纯度检测的「第一线」(front-line) 方法。由于通常纯度评价是非定量的，因此不需要关心诸如极端大小分子的非线性迁移、蛋白质修饰造成的迁移异常以
蛋白质浓缩、干燥及贮存
一、样品的浓缩生物大分子在制备过程中由于过柱纯化而样品变得很稀，为了保存和鉴定的目的，往往需要进行浓缩。常用的浓缩方法的： 减压加温蒸发浓缩 通过降低液面压力使液体沸点降低，减压的真空度愈高，液体沸点降得愈低，蒸发愈快，此法适用于一些不耐热的生物大分子的浓缩。 空气流动蒸发浓缩 空
有机溶剂浓缩蛋白质
蛋白质浓缩有多种方法，有盐析，超滤，离子交换，有机溶剂沉淀等方法有机溶剂沉淀法在多肽分离中用的特别多，现简要说明如下，希望对各位新虫有所帮助有机溶剂沉淀法：有机溶剂能降低溶液的电解常数，从而增加蛋白质分子上不同电荷的引力，导致溶解度的降低；另外，有机溶剂与水的作用，能破坏蛋白质的水化膜，故蛋白质在一
植物蛋白质组学和糖基化实验（二）
刀豆球蛋白 A (ConA)- 过氧化物酶方法（根据参考文献 20 修改的方法)。( 1 ) 通过 1D 或 2D 电泳分离，并转移到硝酸纤维素膜上。( 2 ) 用 TTBS 缓冲液浸泡印迹膜 1 h。( 3 ) 将印迹膜在含有 ConA ( 25 μg/ml）的 TTBS 缓冲液中，室温下温育 2
用于蛋白质表达的标签实验（二）
二、可溶性标签在重组蛋白表达中，特别是当在细菌中表达真核蛋白时，主要的瓶颈在于蛋白质的正确折叠与可溶性。一些可溶性蛋白已被作为标签用来改善目标蛋白质的折叠。这些标签应该与其他方法共同使用来促进蛋白质的折叠，如诱导后降低培养温度或者共表达伴侣蛋白（BaneyxandMujacic,2004;deMar
用酸沉淀法浓缩蛋白质实验——丙酮沉淀法
实验材料含蛋白质的样品试剂、试剂盒丙酮（或其他有机溶剂如乙醇或甲醇）仪器、耗材Eppendorf 管（小塑料离心管）Eppendorf 管离心机（小型台式离心机）混旋器实验步骤1. 加 1 ml冷丙酮（-20℃）至 200 ul 样品溶液，混匀。2. -20℃： 放置 10 min。3. 小型台式离
DNA－污染的柱上去除实验
试剂、试剂盒 DNA 酶 I 缓冲液 DNA 酶 I 仪器、耗材 细胞裂解液
DNA－污染的柱上去除实验
该方案可用于使用硅基 RNA 结合柱的 RNA 分离策略，例如方案 6。然而，可能不会 实现 100% 除去 DNA。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒DNA 酶 I 缓冲液DNA 酶 I仪器、耗材细胞裂解液实验步骤一、材料1. 酶和酶缓冲液DNA 酶 I，扩
DNA－污染的洗脱后去除实验
试剂、试剂盒 EDTA DNA 酶Ⅰ DNA 酶Ⅰ缓冲液 RNA 样品 仪器、耗材
DNA－污染的洗脱后去除实验
述方案是 Dilworth 和 Huang 方案的修改（DilworthandMcCarey1992;Huangetal.2000)。它可以用于从大多数商用试剂盒和试剂制备的 RNA 中去除 DNA 污染。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒EDTADNA 酶Ⅰ
DNA－污染的柱上去除实验
试剂、试剂盒 DNA 酶 I 缓冲液 DNA 酶 I仪器、耗材 细胞裂解液实验步骤 一、材料1. 酶和酶缓冲液DNA 酶 I，扩增级（无 RNA 酶）DNA 酶 I 缓冲液，10X2. 细胞和组织利用总 RNA 纯化试剂盒（例如 Madigen 总 RNA 快速纯化系统）获得的细胞裂解液。二、方法1
DNA－污染的洗脱后去除实验
试剂、试剂盒 EDTADNA 酶ⅠDNA 酶Ⅰ缓冲液RNA 样品仪器、耗材 水浴锅实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂用焦碳酸二乙酯（DEPC) 处理过的水EDTA,25 mmol/L2. 酶和酶缓冲液DNA 酶Ⅰ, 扩增级（无 RNA 酶）DNA 酶Ⅰ缓冲液，10X3. 核酸和寡核苷酸RNA
透析法浓缩蛋白质溶液
实验方法原理透析法主要用于更换蛋白质的缓冲溶液，如果在真空或吸湿环境中也可作为浓缩蛋白质溶液的一种方法（例如 PEG、Sephadex）。将蛋白质溶液盛在一个半透膜袋内，此膜能防止蛋白质丢失而无论在常压或减压下可与周围的缓冲溶液进行溶质交换。除小体积样品之外，根据扩散原理进行的透析法非常耗时，因此蛋
透析法浓缩蛋白质溶液
透析法 实验方法原理 透析法主要用于更换蛋白质的缓冲溶液，如果在真空或吸湿环境中也可作为浓缩蛋白质溶液的一种方法（例如 PEG、Sephadex）。将蛋白质溶
透析法浓缩蛋白质溶液
实验方法原理 透析法主要用于更换蛋白质的缓冲溶液，如果在真空或吸湿环境中也可作为浓缩蛋白质溶液的一种方法（例如 PEG、Sephadex）。将蛋白质溶液盛在一个半透膜袋内，此膜能防止蛋白质丢失而无论在常压或减压下可与周围的缓冲溶液进行溶质交换。除小体积样品之外，根据扩散原理进行的透析法非常耗时，因此
应用切向流技术的DNA/蛋白质样品制备方案
生命科学研究中应用切向流技术（TFF）的DNA/蛋白质样品制备方案 生命科学实验室的超滤设备 密理博提供的实验室超滤全套解决方案 尽管切向流过滤Amicon® Ultra的超速装置，提供优良的性能（使用水平吊篮转子尤佳）。更多的用于与大规模操作
尿液的浓缩和稀释
一、尿液的稀释当小管液中的溶质被重吸收而水不易被重吸收时,则造成尿液的稀释。这种情况主要发生在髓袢升支粗段。由于髓袢升支粗段能主动重吸收Na+和C1-，而对水不通透，故水不被重吸收，造成髓袢升支粗段小管液为低渗。在体内水过剩而抗利尿激素释放被抑制时，集合管对水的通透性非常低。因此，髓袢升支粗段的小管
蛋白质的生物合成标记实验（二）
实验材料细胞试剂、试剂盒PBS甲硫氨酸仪器、耗材培养箱离心机实验步骤1. 在100 mm 直径的培养皿上培养贴壁细胞（0.5~2×107）至70%~90%汇片，吸去培养液，用10 ml 于37℃短时间标记培养基轻轻搖晃冼两次细胞。2. 加入5 ml 于37℃短时间标记培养基，在5%CO2的加湿培
实验动物被毛去除方法
动物实验前应去除实验操作局部的被毛，以免影响实验操作和观察。常用的被毛去除方法有拔毛法、剪毛法、剃毛法和脱毛法四种。一、拔毛法 实验动物被固定后，用食指和拇指将暴露部位的毛拔去。进行采血或动、静脉穿刺时，常用此方法暴露血管穿刺的部位。拔毛不但暴露了血管，而且刺激了局部组织产生扩张血管的作用
Spectra/Gel浓缩剂使蛋白质溶液的浓缩过程及使用步骤
Spectra/Gel浓缩剂使蛋白质溶液的浓缩过程及使用步骤： 1、Spectra/Gel使蛋白质溶液的浓缩过程变得快捷，其以聚丙烯酸酯-多元醇制成，高亲水性，吸水后膨胀，吸水力强。 2、这种高分子聚合物可与截留分子量(MWCO)从100到1,000,000道尔顿的透析膜配用，且不会污染样品。