蛋白质纯度测定实验（二）
方法制样的方法根据所选用电泳方法的性质而定。读者可参考本卷其他章节中有关非变性凝胶电泳和等电聚焦电泳的讨论。最常用的 SDS 凝胶电泳是蛋白质纯度检测的「第一线」(front-line) 方法。由于通常纯度评价是非定量的，因此不需要关心诸如极端大小分子的非线性迁移、蛋白质修饰造成的迁移异常以及 SDS 结合不均勻等 Rhodes 等 (2009) 讨论过的问题。另外，需要考虑样品处理和制备过程中的一致性和均一性，以及分离过程中样品所处的环境。例如，制备均一的蛋白质样品时，未彻底还原二硫键将会使结果表现出异质性。同样，凝胶交联不均一导致的胶内迁移率差异，也会造成对结果的错误判断，但是适当的重复和对照会使这种可能性降到最低。通常，实验者并不知道一个样品中所有蛋白质组分的大小，因此很难预测胶的浓度，从而以最佳效果分离一组蛋白质组分。梯度胶 (gradientgel), 也称为分级孔隙胶 (gelsofgradedp......阅读全文
蛋白质纯度测定实验（二）
方法制样的方法根据所选用电泳方法的性质而定。读者可参考本卷其他章节中有关非变性凝胶电泳和等电聚焦电泳的讨论。最常用的 SDS 凝胶电泳是蛋白质纯度检测的「第一线」(front-line) 方法。由于通常纯度评价是非定量的，因此不需要关心诸如极端大小分子的非线性迁移、蛋白质修饰造成的迁移异常以
蛋白质纯度测定实验
蛋白质纯度测定实验 实验步骤 在评价样品纯度之前，首先需要鉴定待测杂质的类型，如核酸、碳水化合物、脂
蛋白质纯度测定实验
实验步骤在评价样品纯度之前，首先需要鉴定待测杂质的类型，如核酸、碳水化合物、脂质、无关蛋白质、同工酶类、失活蛋白质，进而确定在特定溶液条件中, 能够区分假定杂质和目标蛋白质的理化特性 (化学分析或物理特征）。而纯度则是指待测杂质含量低于某个特定水平。需要注意的是，上述说明中并没有要求描述杂质的性质。
蛋白质纯度测定实验（一）
在评价样品纯度之前，首先需要鉴定待测杂质的类型，如核酸、碳水化合物、脂质、无关蛋白质、同工酶类、失活蛋白质，进而确定在特定溶液条件中, 能够区分假定杂质和目标蛋白质的理化特性 (化学分析或物理特征）。而纯度则是指待测杂质含量低于某个特定水平。需要注意的是，上述说明中并没有要求描述杂质的性质。
电导法测定水的纯度实验
实验方法原理 电解质水溶液中的离子在电场作用下能产生定向移动，因此，具有电导率。其导电能力的大小称电导。在一定范围内，电解质溶液的浓度与其电导率的大小成线性关系。所以，根据测量水的电导率可知水中离子的浓度，即知道了水的纯度。测量电导的方法，可用两个电极插入溶液中，测量两电极间的电阻 R。R＝ρ（L/
电导法测定水的纯度实验
实验方法原理电解质水溶液中的离子在电场作用下能产生定向移动，因此，具有电导率。其导电能力的大小称电导。在一定范围内，电解质溶液的浓度与其电导率的大小成线性关系。所以，根据测量水的电导率可知水中离子的浓度，即知道了水的纯度。测量电导的方法，可用两个电极插入溶液中，测量两电极间的电阻 R。R＝ρ（L/A
核酸纯度、浓度与分子量测定实验
实验方法原理 溴化乙锭是一种荧光染料，在凝胶电泳中，EB分子可嵌入核酸双链的碱基对之间，在紫外线激发下发出荧光,其强度与DNA量成正比。同时核酸最大吸收波长在260 nm，在此波长下，吸光度1 A相当于一定浓度的核酸，可以通过A260/A280 的比值，来测定所得核酸的纯度。实验材料 DNA试剂
核酸纯度、浓度与分子量测定实验
实验方法原理 溴化乙锭是一种荧光染料，在凝胶电泳中，EB分子可嵌入核酸双链的碱基对之间，在紫外线激发下发出荧光，其强度与DNA量成正比。同时核酸最大吸收波长在260 nm，在此波长下，吸光度1 A相当于一定浓度的核酸，可以通过A260/A
二喹啉甲酸（BCA）检测法测定蛋白质浓度实验
二奎琳甲酸检测法 实验方法原理 在碱性环境下蛋白质分子中的肽键结构能与 Cu2＋络合生成络合物，同时将 Cu2＋还原成 Cu＋。而 BCA 试剂可敏感特异地与
二喹啉甲酸（BCA）检测法测定蛋白质浓度实验
实验方法原理 在碱性环境下蛋白质分子中的肽键结构能与 Cu2＋络合生成络合物，同时将 Cu2＋还原成 Cu＋。而 BCA 试剂可敏感特异地与结合，形成稳定的有颜色的复合物。 在 562nm 处有高的光吸收值。颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，可根据吸收值的大小来计算蛋白质的含童。实验材料 待测蛋
二喹啉甲酸（BCA）检测法测定蛋白质浓度实验
二喹啉甲酸（BCA）检测法是近来新研制的一种改进的 Lowery 测定法，反应简单而且几乎没有干扰物质的影响。实验方法原理在碱性环境下蛋白质分子中的肽键结构能与 Cu2＋络合生成络合物，同时将 Cu2＋还原成 Cu＋。而 BCA 试剂可敏感特异地与结合，形成稳定的有颜色的复合物。 在 562nm 处
SDSPAGE测定蛋白质分子量及蛋白质的纯度鉴定
一、实验目的与原理蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，它的迁移取决于它所带电荷以及分子大小和形状等因素。1967年Shapiro等人发现，如果在聚丙烯酰胺系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠（SDS），大多数蛋白质能与SDS按一定比例结合，即每克蛋白质结合1.4g的SDS－复合物都带上相同密度的负电荷，
蛋白质纯度分析方法介绍
在评价样品纯度之前，首-先需要鉴定待测杂质的类型，如核酸、碳水化合物、脂质、无关蛋白质、同工酶类、失活蛋白质，进而确定在特定溶液条件中, 能够区分假定杂质和目标蛋白质的理化特性 (化学分析或物理特征）。而纯度则是指待测杂质含量低于某个特定水平。需要注意的是，上述说明中并没有要求描述杂质的性质。纯化过
圆二色蛋白质测定
圆二色性（Circular dichroic，CD）测定 1%(w/w)的蛋清溶液调节到pH 4.0，6.0，10.0，在85oC加热不同时间，离心，取上清液，然后稀释至100~200μg/mL溶液。对照组为天然蛋清样品。用Jasco J-715光度计测定样品的CD谱。测定条件设定：测定波长范围
蛋白质含量测定实验
Bradford法 实验材料 蛋白质 试剂、试剂盒
蛋白质含量测定实验
实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 牛血清NaCl考马斯亮蓝仪器、耗材 分光光度计离心机实验步骤 分别在两组微量离心管中各加入0.5 mg/ml 牛血清白蛋白，以 0.15 mmol/l NaCl补足至100 μl，同时以两管100 μl 的0.15 mmol/l NaCl作空白对照。2. 每管各加
蛋白质含量测定实验
folin—酚试剂法 考马斯亮蓝法 实验方法原理 这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。过去此法是应用最广泛的一种方法，由于其试剂乙的配制较为困难（
蛋白质含量的测定方法（二）
（二）试剂与器材1.试剂（1）试剂甲：（A） 10克Na2CO3，2克NaOH和0.25克酒石酸钾钠（KNaC4H4O6·4H2O）。溶解于500毫升蒸馏水中。（B） 0.5克硫酸铜（CuSO4·5H2O）溶解于100毫升蒸馏水中，每次使用前，将50份（A）与1份（B）混合，即为试剂甲。（2）试剂乙
脑脊液蛋白质总量测定实验
实验方法原理饱和硫酸铵可以沉淀球Pr．正常脑脊液中球Pr含量很低．故现阳性结果，若球Pr增多，则Ross－jones试管阳性，除去球Pt后再以乙酸沸法则ALB（白Pr）．实验材料脑脊液试剂、试剂盒饱和硫酸铵溶液乙酸实验步骤一、实验试剂：l、饱和硫酸铵溶液，硫酸铵85g加蒸馏水至100ml即得．2、0
蛋白质含量的测定实验
实验方法原理 FOLIN 酚法所用的试剂有两部分组成。试剂甲可与蛋白质中的肽键起显色反应, 试剂乙在碱性条件下极不稳定, 易被酚类化合物还原成蓝色(蛋白质中的酚基将磷钼酸-磷钨酸还原成蓝色复合物)。在一定条件下, 蓝色强度与蛋白质的量成正比, 范围约在25～250 μg/ ml 蛋白质浓
蛋白质紫外分光测定实验
蛋白质紫外分光测定实验 实验方法原理 由于蛋白分子中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，因此蛋白质具有吸收紫外线的性质，吸收高峰在280nm波长处。在此波长范围内，蛋白质溶液的光吸收值（A280）与其含量呈正比关系，可用作定量测定。
蛋白质紫外分光测定实验
蛋白质紫外分光测定实验 实验方法原理 由于蛋白分子中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，因此蛋白质具有吸收紫外线的性质，吸收高峰在280nm波长处
蛋白质紫外分光测定实验
实验方法原理 由于蛋白分子中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，因此蛋白质具有吸收紫外线的性质，吸收高峰在280nm波长处。在此波长范围内，蛋白质溶液的光吸收值（A280）与其含量呈正比关系，可用作定量测定。 由于核酸在280波长处也有光吸收，对蛋白质的测定有干扰作用，但
蛋白质的定量测定实验
试剂、试剂盒 Bradford 试剂 牛血清白蛋白 (BSA) 标准溶液 Tris-缓冲盐溶液 仪器、耗材
蛋白质的定量测定实验
试剂、试剂盒Bradford 试剂牛血清白蛋白 (BSA) 标准溶液Tris-缓冲盐溶液仪器、耗材微量滴定板分光光度计或酶联仪实验步骤材料与设备牛血清白蛋白 (BSA) 标准溶液 (2 mg/ml 水溶液）Bradford 试剂（CoomassiePlus,PierceChemicalCo.)分光光
蛋白质紫外分光测定实验
由于蛋白分子中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，因此蛋白质具有吸收紫外线的性质，吸收高峰在280nm波长处。在此波长范围内，蛋白质溶液的光吸收值（A280）与其含量呈正比关系，可用作定量测定。 由于核酸在280波长处也有光吸收，对蛋白质的测定有干扰作用，但核酸的最大吸收峰在
蛋白质紫外分光测定实验
实验方法原理由于蛋白分子中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，因此蛋白质具有吸收紫外线的性质，吸收高峰在280nm波长处。在此波长范围内，蛋白质溶液的光吸收值（A280）与其含量呈正比关系，可用作定量测定。由于核酸在280波长处也有光吸收，对蛋白质的测定有干扰作用，但核酸的最大吸收峰在260nm处
蛋白质的定量测定实验
试剂、试剂盒 Bradford 试剂牛血清白蛋白 (BSA) 标准溶液Tris-缓冲盐溶液仪器、耗材 微量滴定板分光光度计或酶联仪实验步骤 材料与设备牛血清白蛋白 (BSA) 标准溶液 (2 mg/ml 水溶液）Bradford 试剂（CoomassiePlus,PierceChemicalCo.)
脑脊液蛋白质总量测定实验
实验方法原理 饱和硫酸铵可以沉淀球Pr．正常脑脊液中球Pr含量很低．故现阳性结果，若球Pr增多，则Ross－jones试管阳性，除去球Pt后再以乙酸沸法则ALB（白Pr）．实验材料 脑脊液试剂、试剂盒 饱和硫酸铵溶液乙酸实验步骤 一、实验试剂：l、饱和硫酸铵溶液，硫酸铵85g加蒸馏水至100ml即得
蛋白质含量的测定实验
FOLIN酚法 考马斯亮蓝法 实验方法原理 FOLIN 酚法所用的试剂有两部分组成。试剂甲可与蛋白质中的肽键起显色反应, 试剂乙在碱性条件下极