用于免疫沉淀的培养细胞的裂解实验
实验方法原理 培养的动物细胞一般使用温和去垢剂来裂解。如果低浓度的去垢剂就能引起细胞的充分裂解（如1%NP-40或1%TritonX-100)，那么这对目标蛋白的影响可能比匀浆方法更温和。去垢剂的选择必须根据免疫沉淀所用的抗体的识别表位的性质来决定。实验材料 单层细胞或悬浮细胞试剂、试剂盒 裂解缓冲液PBS仪器、耗材 离心机实验步骤 ①去掉培养基，并用冷PBS洗细胞2次。②把培养瓶置于冰上。③100mm的培养瓶（预冷至4℃)中加入10ml裂解缓冲液，裂解缓冲液的体积应根据培养瓶的大小来调整。④冰上孵育细胞10〜30min(取决于所孵育的细胞系），并不时地摇动瓶子。⑤在冰上倾斜瓶子，使缓冲液流向一边，用吸管将裂解液转移到一个微量离心管或其他合适的离心管中。其他培养瓶均如此操作。有些研究者喜欢把细胞从培养瓶中刮下来，但这可能产生细胞张力，只在特殊情况下使用。⑥4℃条件下20000g离心裂解液10min。⑦小心地把上清移到另一个试管中......阅读全文
DNA裂解分析实验
实验材料 细胞试剂、试剂盒 溶解缓冲液RNA 酶A T1 混合液蛋白酶 KDNA 加样缓冲液仪器、耗材 Eppendorf 管移液管琼脂糖凝胶实验步骤 1. 将 5X105 细胞移入无菌的 1.5 ml Eppendorf 管中，4℃ 2000 r/min 离心 5 分钟，弃上清。2. 加入 20
DNA裂解分析实验
琼脂糖凝胶电泳 个体核的PI荧光 乙醇固定后PI染色 JAM分析 实验材料 细胞
DNA裂解分析实验
琼脂糖凝胶电泳 个体核的PI荧光 乙醇固定后PI染色 JAM分析 实验材料 细胞
标记裂解培养细胞实验
基本方案 温和去垢剂裂解法（对贴壁细胞）基本方案 温和去垢剂裂解法（对非贴壁细胞）SDS煮沸法裂解细胞实验方法原理实验材料待标记的培养细胞 试剂、试剂盒37℃标记培养液
DNA裂解分析实验_JAM分析
实验材料细胞试剂、试剂盒胸腺嘧啶脱氧核苷HBSSPBSEDTA仪器、耗材新鲜培养基组织培养板实验步骤1. 实验前一天，将细胞接种于新鲜培养基。对数生长期细胞可更好地渗入 [3H]-胸腺嘧啶脱氧核苷。2. 收获细胞，在新鲜培养基中以 1X106 细胞/ml 重悬，用 5 μCi/ml [3H]-胸腺嘧
细胞裂解方法：化学裂解、酶裂解和机械裂解
裂解方法包括化学裂解、酶裂解和机械裂解。化学裂解和酶裂解通常是比较温和的方法，通常会很少使DNA 断裂。这两种方法（包括SDS 和溶菌酶处理等）提取纯化DNA中常用的方法。机械裂解可以更均一的裂解细胞，同化学裂解相比，机械处理具有更高的裂解效率和更低的选择性。机械处理可以更剧烈和全面的裂解细胞，
32－P－标记裂解培养细胞实验——SDS煮沸法裂解细胞
实验材料待标记的培养细胞固相化金黄色葡萄球菌（可选）试剂、试剂盒37℃标记培养液1 Ci／ml H3(32)PO4(溶于 HCl)冰冷 Tris 平衡盐水(TBS) ／磷酸盐平衡盐水(PBS)SDS裂解缓冲液RIPA 校正液免疫沉淀洗液仪器、耗材橡皮细胞刮子Sorvall 冷冻离心机(或其他)树脂玻
SDS裂解法提取质粒DNA实验
这种温和的方法（改进自 Godson and Vapnek 1973 ) 在处理大质粒（>15 kb ) 时较碱裂解法和煮沸法好。但温和的代价是产量低：有相当数量的质粒 DNA 混于细胞渣滓中，在操作的早期步骤中丢失。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理这种温和的方法（改进自
琼脂板上裂解性感染实验
实验材料 λgtll 噬菌体重组体E.coli Y1090 hsdR 菌株试剂、试剂盒 对照覆盖溶液IPTG 覆盖溶液SM 溶液LB 琼脂板LB 培养液LB 顶层琼脂仪器、耗材 Sorvall SS-34 转子或同等产品空气培养箱实验步骤 材料缓冲液及溶液关于贮存液，缓冲液，试剂组分见附录 I。用前
用于激酶分析的细胞裂解实验
基本方案 实验方法原理 实验材料 培养细胞（贴壁贴壁细胞在100 mm 组织培养板中约 7
32－P－标记裂解培养细胞实验
实验方法原理 实验材料 待标记的培养细胞试剂、试剂盒 37℃标记培养液1 Ci／ml H3(32)PO4(溶于 HCl)冰冷 Tris 平衡盐水(TBS) ／磷酸盐平衡盐水(PBS)温和裂解缓冲液／RIPA 裂解缓冲液仪器、耗材 树脂玻璃挡板(1 in 厚)取液器吸头树脂玻璃盒37℃微量离心管一次性
用于激酶分析的细胞裂解实验
实验方法原理 实验材料 培养细胞（贴壁贴壁细胞在100 mm 组织培养板中约 70% 生长成片／悬浮细胞浓度 为 10^6 细胞／ml）试剂、试剂盒 PBS裂解缓冲液蛋白酶抑制剂储存液仪器、耗材 微量离心机实验步骤 1. 用预冷的 PBS 洗细胞 2 次，将最后的洗液尽可能吸尽。2. 加入 0.
琼脂板上裂解性感染实验
λ噬菌体重组体编码的融合蛋白可通过大肠杆菌株 Y1089 溶源化菌落来制备。但从大量单个噬菌斑制备溶源菌工作量大，且并不一定每次成功（Huynh et al.1985)。另外，裂解性噬菌体感染可通过软琼脂（本方案）或液体培养（方案 9) 获得。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕
质粒的制备实验——碱裂解法
实验方法原理质粒是携带外源基因进入细菌中扩增或表达的主要载体，它在基因操作中具有重要作用。质粒的分离与提取是最常用、最基本的实验技术。质粒的提取方法很多，大多包括3个主要步骤：细菌的培养、细菌的收集和裂解、质粒DNA的分离和纯化。本实验以碱裂解法为例，介绍质粒的抽提过程。在pH 12.0 ~ 12.
用于激酶分析的细胞裂解实验
实验材料培养细胞（贴壁贴壁细胞在100 mm 组织培养板中约 70% 生长成片／悬浮细胞浓度 为 10^6 细胞／ml）试剂、试剂盒PBS裂解缓冲液蛋白酶抑制剂储存液仪器、耗材微量离心机实验步骤1. 用预冷的 PBS 洗细胞 2 次，将最后的洗液尽可能吸尽。2. 加入 0.75 ml 裂解缓冲液重悬
SDS裂解法提取质粒DNA实验
实验方法原理 这种温和的方法（改进自 Godson and Vapnek 1973 ) 在处理大质粒（>15 kb ) 时较碱裂解法和煮沸法好。但温和的代价是产量低：有相当数量的质粒 DNA 混于细胞渣滓中，在操作的早期步骤中丢失。试剂、试剂盒 抗生素氯霉素氯仿EDTA乙醇NaClSDSSTETri
琼脂板上裂解性感染实验
实验材料 λgtll 噬菌体重组体 E.coli Y1090 hsdR 菌株 试剂、试剂盒 对照覆盖溶液
钙调蛋白的溴化氰裂解实验
试剂、试剂盒 甲酸纯的钙调蛋白 溴化氰乙腈实验步骤 材料甲酸（市售最髙级（如AldrichChemicalCo.，Inc.)纯的钙调蛋白（干粉；无盐（0.1~1 mg)溴化氰（CNBr)(晶体）（如AldrichChemicalCo.，Inc.)乙腈（如Burdick&Jackson或J,T.Bak
钙调蛋白的溴化氰裂解实验
钙调蛋白的溴化氰裂解实验 试剂、试剂盒 甲酸 纯的钙调蛋白 溴化氰
32－P－标记裂解培养细胞实验
基本方案 温和去垢剂裂解法（对贴壁细胞） 基本方案 温和去垢剂裂解法（对非贴壁细胞） SDS煮沸法裂解细胞 实验方法原理
SDS裂解法提取质粒DNA实验
实验方法原理 这种温和的方法（改进自 Godson and Vapnek 1973 ) 在处理大质粒（>15 kb ) 时较碱裂解法和煮沸法好。但温和的代价是产量低：有相当数量的质粒 DNA 混于细胞渣滓中，在操作的早期步骤中丢失。
钙调蛋白的溴化氰裂解实验
试剂、试剂盒甲酸纯的钙调蛋白溴化氰乙腈实验步骤材料甲酸（市售最髙级（如AldrichChemicalCo.，Inc.)纯的钙调蛋白（干粉；无盐（0.1~1 mg)溴化氰（CNBr)(晶体）（如AldrichChemicalCo.，Inc.)乙腈（如Burdick&Jackson或J,T.Baker)
培养细胞标记和裂解物的制备实验——温和去污裂解法
实验材料培养细胞试剂、试剂盒DMEMHClTBSTris仪器、耗材微量离心管Plexiglas盒吸头细胞刮子冷冻离心机实验步骤1. 培养待标记的细胞至适当的生长期。 对于贴壁细胞： 2a. 吸去培养液，用37℃的含血清不加标记物的标记培养液洗尽残存的含磷酸盐培养液，吸尽该培养液。 3a. 加入
免疫沉淀的培养细胞的裂解实验_单层培养的细胞的裂解
实验方法原理培养的动物细胞一般使用温和去垢剂来裂解。如果低浓度的去垢剂就能引起细胞的充分裂解（如1%NP-40或1%TritonX-100)，那么这对目标蛋白的影响可能比匀浆方法更温和。去垢剂的选择必须根据免疫沉淀所用的抗体的识别表位的性质来决定。实验材料单层细胞或悬浮细胞试剂、试剂盒裂解缓冲液PB
液体培养液中裂解感染实验
本方法适用于对可免疫检测的融合蛋白进行快速筛选λgtll 重组噬菌体。但在其他条件下（如：对感染率的优化，42°C λ噬菌体基因的失活及裂解前收集)，此方法亦可用于产生制备量的融合蛋白 (Runge1992)。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔
纯化DNA实验_纯化质粒（碱裂解法）
实验材料大肠杆菌试剂、试剂盒LB葡萄糖缓冲液乙酸钾仪器、耗材离心管实验步骤1. 单个大肠杆菌克隆接种到 2 ml 含适当抗生素的 LB 中。37℃ 剧烈振荡孵育 5~8 小时。或者可以培养过夜使饱和。2. 倒 1.5 ml 培养液到已作标记的微量离心管中。把剩下的培养液存放在 4℃。3. 在微量离心
氮舱减压法裂解培养细胞实验
基本方案 实验方法原理 通过来自增压舱中的氮气减压膨胀来破碎细胞是一种快速、有效的细胞和组织的匀浆方法，能释放完整的细胞器和制备细胞膜。该方法的原理很简单：细
质粒DNA大量制备实验——碱裂解法
用碱和SDS处理可以大规模的细菌培养物中分离质粒DNA，所获得的质粒则可通过柱层析或CsCl- 溴化乙锭梯度离心进一步纯化。了解质粒的特性及其在分子生物学研究中的作用；掌握质粒DNA分离和纯化的原理；学习碱裂解法和煮沸法分离质粒DNA的方法。实验方法原理这一方案科能是最常用的质粒制备方法，该法不仅相
液体培养液中裂解感染实验
实验材料 λgtll 重组噬菌体 大肠杆菌 Y1090 hsdR 菌株 试剂、试剂盒 细胞裂解液
液体培养液中裂解感染实验
实验材料 λgtll 重组噬菌体大肠杆菌 Y1090 hsdR 菌株试剂、试剂盒 细胞裂解液IPTGMgS04•7 H20苯甲基磺酰氯SMLB 培养液仪器、耗材 SorvallSS-34 转子或同等产品沸水水浴液氮实验步骤 材料缓冲液剂及溶液贮存液，缓冲液及试剂的组分见附录 1。将贮存液稀释至合适浓