骨髓基质来源的间充质干/祖细胞(MSCs)的培养基本原则...
骨髓基质来源的间充质干/祖细胞(MSCs)的培养基本原则和鉴定实验方法原理 实验材料 骨髓基质试剂、试剂盒 完全培养基(CCM)无钙或镁的磷酸盐缓冲液无钙或镁的Hank’s平衡盐溶液Ficoll-Paque淋巴细胞分离液仪器、耗材 聚丙烯离心管 15 mL和50 mL塑料组织培养皿 直径15 cm塑料微量移液器枪头 10μL实验步骤 (a)去除抗凝管盖子,将骨髓液转移至50mL离心管中。加人室温的HBSS,确保体积达到25 mL。(b)取另一个50 mL离心管,加人20 mL Ficoll-Paque淋巴细胞分离液,将25 mL细胞悬液轻轻加到Ficoll上层。HBSS与Ficoll间的界面不能被破坏。(c)关闭闸,室温1800g离心30min。(d)离心完毕,于Ficoll和HBSS的界面收集白色细胞层,将其移至新的50 mL离心管中。(e)用HBSS将收集到的细胞悬液体积调至3倍,室温1000g离心10 min。重复洗涤。(......阅读全文
骨髓间充质干细胞(MSC)原代培养与传代培养实验步骤
准备工作(1)试管、试管架、滴管、吸管、小鼠固定架、玻璃瓶、玻璃皿、烧杯、橡皮头、剪刀、镊子、纱布、棉球、酒精灯、滴管、移液器、细胞计数器、生理盐水、PBS、双抗(青链霉素)、75%酒精、95%酒精、培养瓶(50ml,260ml)。(2)BALB/C小鼠(4~5周龄,18~22g,雌雄不限)、胎牛血
红细胞裂解液法体外分离培养兔骨髓间充质干细胞
骨髓间充质干细胞是存在于骨髓腔内具有很强增殖 能力及多向分化潜能的一类成体干细胞,在一定条件下其不仅可以分化为同源于中胚层的间质细胞,还可以诱导分化为骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、上皮样细胞、 心肌细胞、肝细胞等。近年来随着组织工程技术的快速发展,骨髓间充质干细胞的体外分离、培养及其增殖特 性的相关研
流产胎儿骨髓间充质干细胞的原代取材
实验概要流产胎儿骨髓间充质干细胞的原代取材主要试剂75%酒精、含2% SP(Pen Strep)的DPBS、间充质干细胞培养液主要设备眼科剪、眼科镊、手术剪、手术镊、5 mL注射器、10 mL注射器、7号针头、400目细胞筛、15 mL离心管、3.5 cm培养皿实验步骤人流产胎儿取材前需与患者签署知
樊代明院士组最新PLoSONE文章
来自第四军医大学樊代明院士研究组的研究人员发表了题为“Dynamic microRNA Profiles of Hepatic Differentiated Human Umbilical Cord Lining-Derived Mesenchymal Stem Cells”的文章,揭示出了人类
间充质干细胞的传代培养
间充质干细胞的传代培养试剂和材料:1. 完全培养基:α-MEM:α-低限量基础培养基,含谷氨酰胺,无核苷酸或脱氧核苷酸;添加:20%附加L-谷氨酰胺 2mmol/L、经FBS杂交瘤纯化,非热灭活、青霉素100U/ml、链霉素100μg/ml。过滤除菌。储存于4℃,不超过2周;2. PBSA;3. 胰
脐带间充质干细胞的分离培养的介绍
脐带间充质干细胞的获取主要有组织块贴壁法与酶消化法,由于酶对细胞的损伤较大,且细胞得率较低,费用昂贵,因此大多数实验室采取了组织块贴壁法进行培养。 取新鲜健康脐带,用PBS冲洗干净后,用剪刀镊子剔去血管,剥出里面的华氏胶组织,将所得组织充分剪碎至1 mm3大小,加入α-MEM培养液置于37℃,
脐带间充质干细胞移植或可治干眼病
海南省眼科医院刘红山教授5月初在美国举行的世界眼科大会上发表演讲称,通过脐带间充质干细胞移植治疗干眼病在小鼠实验中获得成功。 干眼病是一种多因子的泪液和眼表面疾病,患者眼睛敏感、怕光、有异物感、眼痒、充血,甚至会发生疼痛及视力下降。近年来,随着电脑、手机的普及,干眼病的患病率逐渐增加。
间充质细胞的概念
不含纤维。间充质细胞呈星状,细胞间以突起相互连接成细胞网。细胞核大,核仁明显,细胞质弱嗜碱性。间充质细胞分化程度低,有很强的增殖分化能力。在胚胎时期分化成多种结缔组织细胞、内皮细胞、平滑肌细胞等。
间充质细胞的概念
不含纤维。间充质细胞呈星状,细胞间以突起相互连接成细胞网。细胞核大,核仁明显,细胞质弱嗜碱性。间充质细胞分化程度低,有很强的增殖分化能力。在胚胎时期分化成多种结缔组织细胞、内皮细胞、平滑肌细胞等。
间充质细胞的功能
间充质干细胞可以分化为骨、软骨、肌肉或肌腱,为临床治疗各种创伤提供细胞来源;间充质干细胞还可以分化为心肌组织,在显微镜下,能观察到心肌组织中的细胞株出现自发搏动;用间充质干细胞分化为真皮组织,可覆盖于烧伤创面。
用于生产MSCs的大鼠骨髓原代培养
试剂和材料:1. 完全培养基(CCM):α-MEM:α-低限量基础培养基,含谷氨酰胺,无核苷酸或脱氧核苷酸;添加:20%附加L-谷氨酰胺 2mmol/L、经FBS杂交瘤纯化,非热灭活、青霉素100U/ml、链霉素100μg/ml。含0.2μg/ml两性霉素B。过滤除菌。储存于4℃,不超过2周
正常人骨间充质干细胞的培养
实验材料:1. 骨髓来源:骨髓材料由健康人提供;2. 清洗液:不含Ca2+和Mg2+的1&time,添加100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素,pH7.2;3. 分离液:密度为1.073g/ml的Percoll溶液;4. DMEM-LG培养液:含1000mg/L葡萄糖的DMEM培养液,补充1
脐带间充质干细胞的优势及分离培养
优势 脐带间充质干细胞(MSCs)具有较高的分化潜能,可向多个方向进行分化。它在骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、内皮和心肌等组织工程方面具有广阔的临床应用前景。有报道从人脐带中分离出MSCs,且细胞含量、增殖能力优于骨髓MSCs,免疫原性比骨髓MSCs低[1],并且具有取材方便,无伦理学
调节骨髓间充质干细胞的微环境因素研究进展
19世纪六七十年代,Bianco等发现骨髓中含有一种能自身繁殖的间质细胞群,简称成纤维细胞集落形成单位。研究发现,这是一类广泛存在于骨髓及间叶组织中的细胞,具有多向分化潜能,学者们将此类细胞称为间充质干细胞。MSC周围的细胞和微环境精确调节间充质干细胞的动态平衡。微环境因子失调会引起间充质干细胞
大鼠骨髓原代培养用于生产MSCs
试剂和材料:完全培养基(CCM):α-MEM:α-低限量基础培养基,含谷氨酰胺,无核苷酸或脱氧核苷酸;添加:20%附加L-谷氨酰胺 2mmol/L、经F杂交瘤纯化,非热灭活、青霉素100U/ml、链霉素100μg/ml。含0.2μg/ml两性霉素B。过滤除菌。储存于4℃,不超过2周;2.A;3.
间充质干细胞(MSC)如何培养与鉴定
相比于胚胎干细胞或神经干细胞,MSC具有易获取、易体外培养、传代稳定性、低免疫原性等优势,在体外经过多次传代后仍具有多向分化和自我复制的潜能,且MSCs多来自于成年的组织,研究过程的道德和伦理学问题较小。MSC的大小与形状具有异质性,即不同种属或不同组织的MSC具有不同的生长形态,例如三极形、长梭形
CloneSelect单细胞分离系统用于分选基因编辑的间充质干...
CloneSelect单细胞分离系统用于分选基因编辑的间充质干细胞 图1:CloneSelect f.sight单细胞分离系统 最近发表的一篇文章(Characterization of CRISPR/Cas9 RANKL knockout mesenchymal stem cell clone
大鼠MSCs的获得和扩增实验—大鼠骨髓原代培养用于MSCs生产
实验材料大鼠骨髓试剂、试剂盒灭菌CCM含0.2μg ml两性霉素B(两性霉素B洗剂)非灭菌0.85%台盼蓝盐溶液PBSA仪器、耗材聚丙烯离心管 15 ml或50 ml塑料组织培养Petri培养皿 直径15 cm改良的Neubauer血细胞计数器实验步骤(a)从一根股骨所得的骨髓悬液中取出10μL,与
培养间充质干细胞的培养基你选对了吗?
干细胞治疗也被称为再生医学,是指利用干细胞及其衍生物来促进受损、病变或功能丧失的组织进行修复。如今,许多白血病等患者已经受益于干细胞治疗。未来,骨关节炎、脑瘫、心脏衰竭、多发性硬化症、甚至是听力损失等都有望受益。干细胞治疗处在生命科学的最前沿,将会引起一场新的医学革命。“10至20年后,干细胞将会成
间充质干细胞的概念
间充质干细胞是一种多能干细胞,它具有干细胞的所有共性,即自我更新和多向分化能力。在临床应用也最多,与造血干细胞联合应用,可以提高移植的成功率,加速造血重建。当患者接受大剂量化疗后,将间充质干细胞与造血干细胞一同输入,可明显加速患者血细胞恢复时间,且安全无不良反应。间充质干细胞不仅存在于骨髓中,也存在
间充质干细胞的复苏
实验概要间充质干细胞的复苏主要试剂间充质干细胞培养液主要设备15 mL离心管、水浴锅、培养箱、离心机实验步骤(1)在15 mL离心管中准备9倍于冻存细胞悬液体积的间充质干细胞培养液。(2)在37℃水浴锅将冻存管中细胞悬液融化,迅速滴入事先准备好的离心管。(3)室温1000 r/min离心3 min,
间充质细胞的临床应用
1.造血干细胞移植:增强造血功能;促使造血干细胞移植物的植入;治疗移植物抗宿主病。2.组织损伤的修复:骨、软骨、关节损伤、心脏损伤;肝脏损伤;脊髓损伤和神经系统疾病。3.自身免疫性疾病:系统性红斑狼疮、硬皮病、炎性肠炎等。4.作为基因治疗的载体。其中移植物抗宿主病、克隆氏病的治疗在美国已经进入到三期
间充质干细胞的传代
实验概要间充质干细胞的传代主要试剂DPBS、0.05%的Trypsin、间充质干细胞培养液主要设备15 mL离心管、培养皿、离心机、培养箱、倒置显微镜实验步骤(1)37℃预热间充质干细胞培养液和0.05%胰蛋白酶胰蛋白酶。(2)弃掉旧培养液,加入室温放置的DPBS洗一遍,尽可能将残留的培养液洗净,吸
间充质干细胞的概念
间充质干细胞是一种多能干细胞,它具有干细胞的所有共性,即自我更新和多向分化能力。在临床应用也最多,与造血干细胞联合应用,可以提高移植的成功率,加速造血重建。当患者接受大剂量化疗后,将间充质干细胞与造血干细胞一同输入,可明显加速患者血细胞恢复时间,且安全无不良反应。间充质干细胞不仅存在于骨髓中,也存在
间充质干细胞的功能
间充质干细胞可以分化为骨、软骨、肌肉或肌腱,为临床治疗各种创伤提供细胞来源;间充质干细胞还可以分化为心肌组织,在显微镜下,能观察到心肌组织中的细胞株出现自发搏动;用间充质干细胞分化为真皮组织,可覆盖于烧伤创面。
间充质干细胞的定义
间充质干细胞(MSC, mesenchymal stem cells)是干细胞家族的重要成员,来源于发育早期的中胚层,属于多能干细胞,MSC最初在骨髓中发现,因其具有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我复制等特点而日益受到人们的关注。如间充质干细胞在体内或体外特定的诱导条件下,可分
间充质干细胞的特性
间充质干细胞是一种多能干细胞,它具有干细胞的所有共性,即自我更新和多向分化能力。在临床应用也最多,与造血干细胞联合应用,可以提高移植的成功率,加速造血重建。当患者接受大剂量化疗后,将间充质干细胞与造血干细胞一同输入,可明显加速患者血细胞恢复时间,且安全无不良反应。
如何进行兔骨髓间充质细胞ALP活性定量检测
髓核细胞与骨髓间充质干细胞共培养,影响髓核细胞的活性,经共培养的髓核细胞增殖速度、蛋白多糖合成量较对照组提高明显,髓核细胞活性上调。 睾丸支持细胞与骨髓间充质干细胞在体外共培养的早期,睾丸支持细胞可以显著促进间充质干细胞的生长,但在后期则反而抑制间充质干细胞的生长。
间充质干细胞最新研究进展
间充质干细胞具有低免疫原性及向缺血或损伤组织归巢的特征,输入宿主体内后,可归巢于特定部位,在微环境影响下定向分化为内胚层、中胚层以及外胚层3个胚层来源组织的细胞,如骨、软骨、肌腱、脂肪、肝、肾、皮肤、肌肉、神经甚至胰腺等10余种成熟细胞,因而成为再生医学中器官修复的理想种子细胞。最初是在骨髓中发现含
三维潮汐式生物反应器于间充质干细胞的应用
前 言 未来的细胞治疗需要大量的间充质干细胞(MSCs),每个剂量从1000万到2亿多个细胞不等。当需要超过5000万个细胞的大剂量使用时,传统的平板培养是不切实际的。而利用生物反应器并结合线性放大、过程控制和自动化,是解决这一需求的主要方法。然而许多生物反应器在MSCs培养方面都面临技术难题,比