双向免疫扩散实验
实验方法原理 双向免疫扩散试验不仅可对抗原或抗体进行定性鉴定和测定效价，还可对抗原或抗体进行纯度分析和同时对两种不同来源的抗原或抗体进行比较，分析其所含成分的异同。若在两孔内有两对或两对以上的抗原抗体系统，就能产生相应数量的分离的沉淀线（图 1）。因此，利用此法可进行抗原或抗体的纯度分析。图 1 双向免疫扩散平板所表现的沉淀线数量A. 单个抗原抗体系统B. 多个抗原抗体系统沉淀线形成的位置与抗原、抗体浓度有关，抗原浓度越浓，形成的沉淀线距离抗原孔越远，抗体浓度越浓，形成的沉淀线距抗体孔越远（图 2），因此，当固定抗体的浓度，稀释抗原，可根据已知浓度的抗原沉淀线的位置，测定未知抗原的浓度；反之固定抗原的浓度，亦可测定抗体的效价。图 2 双向免疫扩散平板中表现的沉淀线与各抗原孔的不同距离Ab：抗体，周围孔为抗原此外观察两个邻近孔的抗原与抗体所形成的两条线是交叉抑或相连，可用来判断该两抗原是否有共同成分（图 3）。假如同样的纯......阅读全文
双向凝胶荧光染色与成像实验
试剂、试剂盒 提取液洗涤液溶解液第一向电泳缓冲液还原溶液烷基化溶液琼脂糖溶液丙烯酰胺凝胶溶液仪器、耗材 双向凝胶电泳光扫描仪或密度计实验步骤 3.1 可溶性总蛋白的提取方法（三氯乙酸/丙酮法）( 1 ) 从拟南芥细胞悬浮培养液中收集细胞。( 2 ) 液氮中研磨细胞。( 3 ) 向研磨好的细胞粉末中加
双向凝胶荧光染色与成像实验
试剂、试剂盒：提取液 洗涤液 溶解液
免疫扩散的作用
根据沉淀线的有无、形状和位置对抗原或抗体进行定性分析，也可用于抗体的半定量检测，还可进行抗体效价的测定。
免疫扩散的定义
免疫扩散指可溶性抗原与相应抗体在琼脂介质中相互扩散，彼此相遇，在比例适当处形成沉淀线。
免疫扩散技术概述
抗原与抗体成分的一种定性与半定量分析方法，通常采用半固态透明琼脂凝胶作为支持介质。置于孔中的抗原和抗体相向扩散，在两者浓度比例适当处相遇后如能结合形成复合物则形成沉淀线。分为单向扩散（single immunodiffusion）、放射状扩散（radial immunodiffusion）和双向扩散
蛋白质的双向电泳实验
等电聚焦法 实验方法原理 蛋白质的双向电泳的第一向为等电聚焦( Isoelect rofocusing ,IEF) , 根据蛋白质的等电点不同进行分离;
双向电泳实验——ISODALT－方法
实验方法原理双向电泳（two-dimensional electrophoresis）是等电聚焦电泳和SDS-PAGE的组合，即先进行等电聚焦电泳（按照pI分离），然后再进行SDS-PAGE（按照分子大小），经染色得到的电泳图是个二维分布的蛋白质图。实验材料蛋白质样品试剂、试剂盒尿素去污剂仪器、耗材
蛋白质的双向电泳实验
实验方法原理 蛋白质的双向电泳的第一向为等电聚焦( Isoelect rofocusing ,IEF) , 根据蛋白质的等电点不同进行分离; 第二向为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳( SDS-PAGE ) , 按亚基分子量大小进行分离。经过电荷和分子量两次分离后, 可以得到蛋白质分子的等电点
双向琼脂糖凝胶电泳实验
【实验目的】了解和掌握双向电泳技术,并学习用它来研究与DNA 复制相关的问题.【实验原理】DNA 分子有线状的,还有一些非线状的,如复制叉和重组DNA 结构.双向琼脂糖凝胶电泳技术就是被人们开发用以研究一些非线状DNA 分子的.双向琼脂糖凝胶电泳技术(2-D gel)实际上可分为两类：中性/
双向电泳实验——IPGDALT－方法
试剂、试剂盒尿素去污剂还原剂载体两性电解质仪器、耗材IPG 凝胶实验步骤一、第一向1. 固相 pH 梯度凝胶或凝胶条的准备固相 pH 梯度凝胶的灌注及聚合方法请参阅 固相 pH 梯度等电聚焦 有关章节，如需要可切成 3~5 mm 宽的胶条在 -20℃ 保存一年。为避免繁琐和复杂的灌胶和切胶条程序和保
双向电泳的实验相关试剂配制
1． Bradford 工作液95%乙醇 25ml 先用乙醇溶解考马斯亮兰G250，溶解完后再加磷85%磷酸 52ml 酸，最后超纯水定容至500ml。过滤后置于棕色瓶考马斯亮兰G250 0.035g
免疫琼脂双向扩散实验具体步骤
琼脂扩散（ agar diffusion ）为可溶性抗原与抗体在琼脂凝胶中所呈现的一种沉淀反应。当对应的抗原、抗体在半固体琼脂终相遇，且二者比例适当时，便出现可见的白色沉淀线，这组沉淀线是一组抗原、抗体的特异性复合物。当琼脂中有多组不同的抗原、抗体存在时，便各自依其扩散速度的差异，再适当的部位形成独
单向免疫扩散的概念
中文名称单向免疫扩散英文名称single immunodiffusion定 义将一定量的抗体混于琼脂凝胶中制成琼脂板，在适当位置打孔后将抗原加入孔中扩散，抗原在扩散过程中与板中抗体相遇，形成以抗原孔为中心的沉淀环。应用学科免疫学（一级学科），应用免疫（二级学科），免疫学检测和诊断（三级学科）
免疫扩散的分型
单向免疫扩散和双向免疫扩散。
单向免疫扩散的概念
中文名称单向免疫扩散英文名称single immunodiffusion定 义将一定量的抗体混于琼脂凝胶中制成琼脂板，在适当位置打孔后将抗原加入孔中扩散，抗原在扩散过程中与板中抗体相遇，形成以抗原孔为中心的沉淀环。应用学科免疫学（一级学科），应用免疫（二级学科），免疫学检测和诊断（三级学科）
双向电泳实验过程及相关溶液配置
双向电泳实验过程及相关溶液配置A． 实验过程一、 实验原理：2-DE的第一向电泳等电聚焦是基于等电点不同而将蛋白粗步分离，第二向SDS-PAGE是基于蛋白质分子量不同，而将一向分离后的蛋白进一步分离。这样就可以得到蛋白质等电点和分子量的信息。二、 实验步骤：1. 样品的溶解取纯化后的晶体蛋白3.0m
双向凝胶电泳实验常见问题分析
(1)低拷贝蛋白的鉴定。人体的微量蛋白往往还是重要的调节蛋白。除增加双向凝胶电泳灵敏度的方法外，最有希望的还是把介质辅助的激光解吸/离子化质谱用到PVDF膜上，但当前的技术还不足以检出拷贝数低于1000的蛋白质。(2)极酸或极碱蛋白的分离。(3)极大（>200kD）或极小（
单向免疫扩散实验——人群血清IgG－正常值测定示例法
单项免疫扩散实验可以用于：检测正常人群或患者血清中 IgG、IgA 及IgM 的水平。实验方法原理在含有特异抗体的琼脂板中打孔，并在孔中加入定量的抗原，当抗原向周围扩散后与琼脂中抗体相结合，即形成白色沉淀环，其直径或面积与抗原浓度呈正相关。同时用标准抗原或国际参考蛋白制成标准曲线，即可用以定量检测未
抗血清的鉴定方法
1.抗体特异性的鉴定常用双向免疫扩散法。（1）粗抗原及纯抗原之间皆有一条沉淀线，且两者互相融合，则已产生单价特异性抗体；（2）若纯化抗原出现一条，而粗抗原出现多条线，且一条沉淀线与纯抗原沉淀线相连接，需去除杂抗。（3）若不出现沉淀线，表示免疫失败。2.抗体效价的测定颗粒性抗原采用凝集试验，可溶性抗原
抗血清有哪些鉴定方法？
1.抗体特异性的鉴定常用双向免疫扩散法。(1)粗抗原及纯抗原之间皆有一条沉淀线，且两者互相融合，则已产生单价特异性抗体;(2)若纯化抗原出现一条，而粗抗原出现多条线，且一条沉淀线与纯抗原沉淀线相连接，需去除杂抗;(3)若不出现沉淀线，表示免疫失败。2.抗体效价的测定 颗粒性抗原采用凝集试验，可溶性抗
免疫分析法免疫扩散
基本原理：可溶性的抗原和相应的抗体在溶液或凝胶中彼此接触，形成不溶性抗原-抗体复合物沉淀。 单向免疫扩散(Single immunodiffusion) 基本原理：指抗原和抗体两 种成分中只有一种扩散，另 一种被固定在凝胶中。 双向免疫扩散（Double immunodiffusion)
琼脂免疫扩散试验方法
材料与试剂 1、琼脂粉 2、平皿 3、打孔器 4、生理盐水或其他缓冲液，可加1/万的硫柳汞或叠氮钠防腐。 操作方法 1、称取一定量的琼脂粉，按1%左右（0.8%～1.5%）的比例加入生理盐水或缓冲液，水浴煮沸融化20min。 2、将融化的琼脂倒入平皿内，使厚度2mm～3mm。自然冷
单向、双向免疫琼脂扩散和免疫电泳（图）（二）
（二）人血清中IgG正常值的测定： 1．将已制备好的抗体琼脂板置打孔模板上，每一琼脂板可打孔4个（孔径3mm，孔距10mm）。 2．将单位正常人血清用PBS分别作1/50稀释。 3．用微量加样器分别取1/50稀释的单人份血清标本10µl加入孔中，每份标本应各加两孔。 4．作好标记放湿
电泳分析仪免疫电泳相关介绍
免疫电泳 免疫电泳（Immunoelectrophoresis）是琼脂平板电泳和双向免疫扩散两种方法的结合。将抗原样本在琼脂平板上先进行电泳，使其中的各种成份彼此分开，然后加入抗体做双向免疫扩散，已分离的各抗原成分与抗体在琼脂中扩散而相遇，在两者比例适当的地方形成复合物，呈现出可见的沉淀弧。
固相化－pH－梯度双向凝胶电泳实验
方案1 双向凝胶电泳鼠肝蛋白质提取物的制备实验 方案2 双向凝胶电泳真核生物细胞裂解物的制备实验 方案3 双向凝胶电泳大肠杆菌裂解液的制备实验 方案4 双向凝胶电泳脑脊液蛋白样品的制备实验 方案5 第一向：蛋白质的等电聚焦电泳实验
固相化－pH－梯度双向凝胶电泳实验
方案4 双向凝胶电泳脑脊液蛋白样品的制备实验实验方法原理可用乙醇沉淀人类脑脊液以浓缩其中的蛋白质和除去盐分，否则这些物质会干扰第一向 IEF。实验材料人类脑脊液试剂、试剂盒乙醇NaOH增溶溶液β-巯基乙醇仪器、耗材离心管冷冻离心机超声波仪实验步骤1.在室温下解冻脑脊液样品。当样品解冻后，旋紧试管盖，
固相化－pH－梯度双向凝胶电泳实验
实验方法原理 肝与其他动物组织一样，可制备用作双向电泳的材料。离心之后，溶于合适的溶液中即可。不需要浓缩蛋白质或去除干扰物质等额外步骤。所用抽提溶液包括脲、硫脲和酰胺烷基硫代甜采碱去垢剂ASB-14，它们配合使用可最大量地溶解蛋白质。实验材料 鼠肝试剂、试剂盒 二硫苏糖醇（DTT)抽提溶液苯甲基硫酰
蛋白质的双向电泳实验方法
第一向（等电点聚焦，IEF）1）凝胶条的准备1．以帽凝胶端（2个校准环：4mm和10mm）朝下，将4根玻璃管插入两个凝胶灌注装置的每个托架中，这样玻璃管恰好站在两个分隔室之一的“充填船”上。从玻璃管顶端到玻璃管底端拉入PP线（小心，线不易移动），否则以后将不能用它们将胶溶液拉上来。2．溶解分离胶溶液
免疫学检测抗原、抗体检测原理和应用
免疫学检测即根据抗原、抗体反应的原理,利用已知的抗原检测未知的抗体或利用已知的抗体检测未知的抗原。由于外源性和内源性抗原均可通过不同的抗原递呈途径诱导生物机体的免疫应答,在生物体内产生特异性和非特异性T细胞的克隆扩增,并分泌特异性的免疫球蛋白(抗体)。由于抗体-抗原的结合具有特异性和专一性的特点,这
双向电泳
蛋白质组研究的发展以双向电泳技术作为核心. 双向电泳由O’Farrell’s于1975年首次建立并成功地分离约1 000个E.coli蛋白，并表明蛋白质谱不是稳定的，而是随环境而变化. 双向电泳原理简明，第一向进行等电聚焦，蛋白质沿pH梯度分离，至各自的等电点；随后，再沿垂直的方向进行分子量