酵母细胞中质粒的加工实验
实验方法原理 在非选择性生长条件下，大多数大肠杆菌/酵母菌穿梭载体的丢失频率大约1%。 在本方案中含质粒的酵母菌株接种于非选择性平板上以分离质粒并可得到单菌落。然后通过影印到选择性平板上可以鉴别丢失了质粒的菌株实验材料 含质粒的酵母菌株试剂、试剂盒 YPD或其他非选择性液体培养基及平板CM缺失成分平板仪器、耗材 灭菌绒布及影印模板实验步骤 1) 挑取几个含质粒的酵母菌单克隆，分别接种于10 mL非选择性培养基，30℃培养过夜。如果没有其他的选择，可以用YPD培养基，如果要保留其他不稳定遗传标志或质粒，可以用添加了与可能丢失的可选择标志相应的营养成分的确定成分培养基。2) 涂布在相应的非选择性平板上以得到单菌落，30℃培养2天。3) 影印到选择性平板上以确定丢失了质粒选择标志的菌落。将选择性平板和非选择性主平板置30℃培养过夜。......阅读全文
酵母细胞中质粒的加工实验——从酵母细胞中分离质粒
利用一个假定的突变通过互补作用克隆酵母菌基因的一般方法。该突变为cdc101-1，它对酵母菌的生长来说既是隐性的又是温度敏感的。它使酵母可以很正常地在30°C生长，而不能在37°C形成菌落。如果用一个酵母菌基因组文库转化cdc101-1菌株，通过分离温度不敏感菌落，那么就可能分离到一个可以互补这种突
酵母细胞中质粒的加工实验_穿梭质粒
实验材料带有一个非URA3选择标记YCp载体试剂、试剂盒缺失成分平板+Ura含有5-FOAYCp质粒选择性培养基的平板YPD平板YIP5载体仪器、耗材培养皿实验步骤1) 构建染色体上重要基因被破坏的单倍体菌株以及含有完整重要基因和URA3选择标 记的YEp或YCp质粒。2) 对于诱发突变，将重要基因
酵母细胞质粒分离实验
实验材料 酵母试剂、试剂盒 YPD仪器、耗材 接种针培养瓶摇床实验步骤 1. 挑取几个含质粒的酵母宿主菌菌落，接种于10 ml 非选择性培养基，于30℃培养过夜。 2. 在非选择性平板上于30℃培养2天以得到单菌落，大多数情况下，可以得到约200~300个单菌落（约每平板100个菌落）。 3.
酵母细胞质粒分离实验
在非选择性生长条件下，大多数大肠杆菌/酵母菌穿梭载体的丟失频率大约1%，采用本方案不易分离除去的一个质粒是内源性2 μm 质粒，2 μm DNA自发丢失的频率约为每代10-4。实验材料酵母试剂、试剂盒YPD仪器、耗材接种针培养瓶摇床实验步骤1. 挑取几个含质粒的酵母宿主菌菌落，接种于10 ml 非
酵母细胞中质粒的加工实验
定位突变质粒缺口修复技术和等位基因修复技术实验材料酵母菌株试剂、试剂盒带选择标记的YRp或YCp质粒适当的限制性内切核酸酶相应选择标记突变的酵母菌质粒标记的选择培养基平板仪器、耗材培养皿实验步骤1）将目的基因亚克隆到带恰当的选择标记的YRp或YCp质粒上。2) 在基因内部的两个限制酶酶切位点上切割以
酵母细胞中质粒的加工实验
实验方法原理 在非选择性生长条件下，大多数大肠杆菌/酵母菌穿梭载体的丢失频率大约1%。 在本方案中含质粒的酵母菌株接种于非选择性平板上以分离质粒并可得到单菌落。然后通过影印到选择性平板上可以鉴别丢失了质粒的菌株实验材料 含质粒的酵母菌株试剂、试剂盒 YPD或其他非选择性液体培养基及平板CM缺失成分
酵母细胞质粒提取步骤和酵母细胞破壁方法
酵母细胞的细胞壁比较厚，不容易破壁，不如大肠杆菌的质粒 容易提取，最近做了些酿酒酵母的实验，从酿酒酵母中提取质粒，现在就总结下实验的方法和步骤。酵母细胞质粒提取 步骤1. 接种单菌落(待检测酵母细胞)于25mLYNB(补加氨基酸 营养物)培养基中，30℃振荡培养过夜。2.第二天取一滴菌液于进行显微镜
质粒的酵母直接转化
实验方法原理将待测基因与Gal4或LexA或其他合适蛋白的DNA结合域融合构建诱饵质粒；将诱饵质粒转化缺乏报告基因启动子的酵母细胞株中，选择被转化的酵母；再将文库质粒转化到酵母中实验材料单菌落试剂、试剂盒PLATE溶液载体DNA转化质粒DNA仪器、耗材离心管离心机实验步骤1、 用牙签从平板中挑取单菌
酵母质粒载体的特点
酵母质粒载体既可以在大肠杆菌复制与扩增、又可以在酵母系统中复制与扩增,故此类载体又称为穿梭载体(shuttlevector)。 在基因工程中,应用上述病毒表达载体在哺乳动物细胞中进行中、小规模的表达是十分实际的。还要有对组织培养技术十分熟悉的前提。但病毒载体的运用仍然存在技术较难、耗时间和不经
酵母质粒载体的特点
酵母质粒载体既可以在大肠杆菌复制与扩增、又可以在酵母系统中复制与扩增，故此类载体又称为穿梭载体(shuttlevector)。在基因工程中，应用上述病毒表达载体在哺乳动物细胞中进行中、小规模的表达是十分实际的。还要有对组织培养技术十分熟悉的前提。但病毒载体的运用仍然存在技术较难、耗时间和不经济的问题
质粒的酵母直接转化
1．用牙签从平板中挑取单菌落（直径2～3mm），转移到1.5ml的无菌离心管中。2．将10μl载体DNA（100μg）与10μl转化质粒DNA混合，振荡均匀。（若转化DNA是用未经RNA酶处理的“mini－prep DNA”方法制得，则不需加载体DNA）。3．加0.5ml PLATE溶液，振荡。PL
酵母菌落直接质粒转化法
酵母菌落直接质粒转化法1．用牙签从平板中挑取单菌落（直径2～3mm），转移到1.5ml的无菌离心管中。2．将10μl载体DNA（100μg）与10μl转化质粒DNA混合，振荡均匀。（若转化DNA是用未经RNA酶处理的“mini－prep DNA”方法制得，则不需加载体DNA）。3．加0.5ml PL
酵母质粒载体的概念和分类
酵母质粒载体是基因表达载体的一种，既可以在大肠杆菌中、又可以在酵母系统中进行复制与扩增，所以也称为穿梭载体。它分为整合载体和自我复制载体两类。①整合载体：它带有一个酵母URA3标志基因和大肠杆菌的复制和报告基因。②自我复制载体：该类载体在酵母中可以自我复制。
关于酵母质粒载体的基本介绍
酵母质粒载体是基因表达载体的一种,既可以在大肠杆菌中、又可以在酵母系统中进行复制与扩增,所以也称为穿梭载体。它分为整合载体和自我复制载体两类。 ①整合载体：它带有一个酵母URA3标志基因和大肠杆菌的复制和报告基因。 ②自我复制载体：该类载体在酵母中可以自我复制。
酵母质粒提取离心法操作步骤
酵母质粒提取离心法操作步骤：1.接种5 mL含有酵母携带所需质粒的YDP培养液，将其振荡培养在30℃16-24小时。2.取1-3ml酵母培养菌体(使用< 2×107细胞)，室温下5000× g离心5 min。3.弃培养液，收集菌体，加入480μL Buffer SE和30μL Lyticase so
酵母质粒载体具备的条件有哪些？
一个理想的基因载体应该具有以下几个基本条件： ①能在宿主细胞进行独立和稳定的DNA自我复制,并在其DNA中插入外源基因后,仍然保持着稳定的复制状态和遗传特性； ②易于从宿主细胞中分离,并进行纯化； ③在其DNA序列中,具有适当的限制性内切酶位点(最好是单一酶切位点)。这些位点位于DNA复制
酵母质粒载体的基本信息介绍
酵母质粒载体是基因表达载体的一种,既可以在大肠杆菌中、又可以在酵母系统中进行复制与扩增,所以也称为穿梭载体。它分为整合载体和自我复制载体两类。①整合载体：它带有一个酵母URA3标志基因和大肠杆菌的复制和报告基因。由于质粒DNA与酵母基因组DNA之间发生了同源重组,在转化的细胞中可以检测到质粒的整
为什么质粒酵母电转化不进去
酿酒酵母的电转感受态制备方法和电转化方法(1)接种工业酒精酵母至30 mL液体YEPD培养基，30度培养12 h；(2)取培养物以1%的接种量转接到30 mL新鲜YEPD液体培养基中，30度培养8 h，使菌体达到同步生长状态；(3)将酵母培养物置于冰上放置30 min后，6,000 r/min离心5
克隆化酵母DNA的操作实验——穿梭质粒
实验材料酵母实验步骤1. 构建其必需基因的染色体拷贝已被破坏的单倍体菌株，及带有完整的必需基因和URA3选择标志的YEp质粒。2. 将必需基因亚克隆到YCp载体（带有URA3以外的选择标志），取约10~20 μg 用羟胺或其他技术进行诱变。3. 转化至步骤1的菌株中，在添加了尿嘧啶的省却成分平
克隆化酵母DNA的操作实验——质粒缺口修复
实验材料酵母实验步骤1. 将目的基因亚克隆到YRp质粒，通过基因内的两个限制性位点在基因中创造一个缺口区，在缺口两侧留下≥100~250 bp 的同源区，凝胶电泳纯化质粒骨架大片段。 2. 用1~10 μg 缺口质粒DNA转化待拯救的含突变等位基因的酵母菌株，通过YRp质粒上的选择基因进行选择，
酵母遗传学方法4：质粒DNA的羟基突变
质粒DNA的羟基突变1．临用之前制备羟胺溶液，置冰上待用。2．将用氯化铯纯化的10μg质粒DNA加到含500μl羟胺溶液的微型离心管。3．在37℃下培养20小时。4．加入10μl的5mol/L NaCl、50μg 1mg/ml的牛血清蛋白（BSA）和1ml无水乙醇终止反应，置－70℃沉淀DNA10分
酵母活细胞染色
实验步骤展
细胞化学词汇质粒表型
中文名称：质粒表型英文名称：plasmid phenotype定 义：由于质粒的存在而赋予宿主细胞在一定环境条件下所表现的性状。包括对抗生素的抗性、产生抗生素、某些代谢特征和宿主控制的限制与修饰作用等。应用学科：生物化学与分子生物学（一级学科），核酸与基因（二级学科）
细胞化学词汇质粒获救
中文名称：质粒获救英文名称：plasmid rescue定 义：一种通过构建同源辅助质粒，使携带外源DNA的外来质粒能与之重组而被摄入细菌的技术。应用学科：生物化学与分子生物学（一级学科），核酸与基因（二级学科）
细胞化学词汇质粒复制
中文名称：质粒复制英文名称：plasmid replication定 义：质粒在宿主细胞内独立于细菌染色体通过复制机制增加其拷贝数的过程。应用学科：生物化学与分子生物学（一级学科），核酸与基因（二级学科）
细胞化学词汇质粒分配
中文名称：质粒分配英文名称：plasmid partition定 义：在原核细胞分裂过程中质粒从亲代细胞进入子代细胞的过程。该行为由质粒分子上特定的编码主动分配体系的par区段负责，其直接影响细胞分裂中质粒拷贝的分配行为。应用学科：生物化学与分子生物学（一级学科），核酸与基因（二级学科）
细胞化学词汇嵌合质粒
中文名称：嵌合质粒英文名称：chimeric plasmid定 义：一种在体外通过连接不同的质粒片段而构建成的杂合质粒分子。在转化进入宿主细胞后，会形成具有新的生物学功能的复制子。应用学科：生物化学与分子生物学（一级学科），核酸与基因（二级学科）
酵母细胞破碎实验
实验材料 酵母菌试剂、试剂盒 玻璃珠破菌缓冲液仪器、耗材 玻璃珠拍打器实验步骤 1. 培养并收集酵母菌细胞，在酵母消解酶缓冲液重悬菌体沉淀之前，测定压紧细胞的体积，以下所有步骤均在4℃进行。2. 用1体积的玻璃珠破菌缓冲液重悬细胞。3. 用2体积的玻璃珠破菌缓沖液与细胞混合，加4体积冰冷的酸洗
质粒DNA导入细菌细胞实验
实验材料 菌落质粒DNA试剂、试剂盒 CaCl2仪器、耗材 培养基平板实验步骤 1. 接种一个单菌落于50 ml LB培养液中，于37°C中速摇床培养过夜（250 r/min)。2. 往一个2 L的烧瓶中加人400 ml LB培养液，再加入4 ml过夜培养液，于37°C摇床（250 r/min）
质粒DNA导入细菌细胞实验
CaCl2转化法 一步法制备和转化感受态细菌实验 电转化法 实验材料 菌落 质粒DNA