单克隆抗体制备技术
单克隆抗体制备技术 单克隆抗体制备标准化操作方案(McAb-sop) 第一章: 小鼠免疫 第二章: 细胞融合 第三章: 细胞建株 第四章: 细胞株鉴定 第五章: 腹水制备 第六章: 抗体纯化和鉴定（略） 第一章. 小鼠免疫(BALB/c) 小鼠免疫是单抗制备的关键一环,质控小鼠免疫是制备优质单抗的唯一保证。 一.小鼠免疫分两程方案:根据免疫学原理小鼠免疫方案设计如下: 1.短程免疫方案: 第一次: 1d 100ug(可溶性Ag)+等体积完全佐剂. 腹腔注射. 0.4ml/只 第二次: 7d 100ug+等体积不完全佐剂 腹腔注射. 0.4ml/只 第三次: 12d 50ug IV 0.3ml/只 (强化)第四次: 15d 20ug IV 0.3ml/只 第17 d~24d内融合 2长程免疫方案: ......阅读全文
淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体制备技术5
免疫组化染色方法 SP法1）脱蜡、水化；2）PBS洗2～3次各5分钟；3）3%H2O2（80%甲醇）滴加在TMA上，室温静置10分钟；4）PBS洗2～3次各5分钟； 5）抗原修复；6）PBS洗2～3次各5分钟；7）滴加正常山羊血清封闭液,室温20分钟。甩去多余液体。8）滴加Ⅰ抗50μl，室温静置1小
淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体制备技术4
（二）细胞融合 1．细胞融合前准备 （1）骨髓瘤细胞系的选择：骨髓瘤细胞应和免疫动物属于同一品系，这样杂交融合率高，也便于接种杂交瘤在同一品系小鼠腹腔内产生大量McAb。常用的骨髓瘤细胞系见表2-4。表2-4用于融合试验的主要骨髓瘤细胞系名 称来 源耐 受 药 物Ig链H LP3/X63-Ag
淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体制备技术1
1975年，Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交细胞既可产生抗体，又可无限增殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破不仅为医学与生物学基础研究开创了新纪元，也为临床疾病的诊、防、治提供了新的工具。 制备单克隆抗体包括动物免
淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体制备技术2
检测抗体的方法应根据抗原的性质、抗体的类型不同，选择不同的筛选方法，一般以快速、简便、特异、敏感的方法为原则。 常用的方法有: 1. ELISA用于可溶性抗原蛋白质、细胞和病毒等McAb的检测。 2. RIA用于可溶性抗原、细胞McAb的检测。 3. FACS荧光激活细胞分类仪用于检查细胞
方案27.11－单克隆抗体的制备
方案27.11 单克隆抗体的制备 实验方法原理 使用聚二乙醇（PEG ) 将抗原免疫过的小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞（P3. 653 )进行融合。用 HAT
单克隆抗体上清的制备实验
实验材料 杂交瘤试剂、试剂盒 完全培养基仪器、耗材 培养箱转子离心机实验步骤 1. 将杂文瘤置于一个盛有完全DMEM-10培养基的175 cm2组织培养瓶中，置37 ℃CO2培养箱中，直至生长旺盛适于分传。2. 按1：10的比例将细胞分传到一个新的175 cm2的培养瓶中，加入完全DMEM-10
单克隆抗体是怎么制备的
单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤（hybridoma）抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。
单克隆抗体的腹水制备实验
实验材料 杂交瘤细胞试剂、试剂盒 完全DMEM-10HEPES丙酮酸钠PBS仪器、耗材 注射针头离心管转子离心机实验步骤 1. 用20G或22G的注射针，小鼠腹膜内注射降植烷，每只鼠0.5 ~ 1 ml，1周后接种细胞。 2. 在175 cm2培养瓶中加完全DMEM-10/HEPES/丙酮酸钠培
单克隆抗体的制备方法2
（2）饲养细胞：在组织培养中，单个或少数分散的细胞不易生长繁殖，若加入其它活细胞，则可促进这些细胞生长繁殖，所加入的这种细胞数被称为饲养细胞。在制备McAb的过程中，许多环节 需要加饲养细胞，如在杂交瘤细胞筛选、克隆化和扩大培养过程中，加入饲养细胞是十分必要的。常用的饲养细胞有：小鼠腹腔巨噬细胞（较
单克隆抗体的腹水制备实验
实验材料杂交瘤细胞试剂、试剂盒完全DMEM-10HEPES丙酮酸钠PBS仪器、耗材注射针头离心管转子离心机实验步骤1. 用20G或22G的注射针，小鼠腹膜内注射降植烷，每只鼠0.5 ~ 1 ml，1周后接种细胞。 2. 在175 cm2培养瓶中加完全DMEM-10/HEPES/丙酮酸钠培养液，进
单克隆抗体的制备方法1
动物的选择与免疫 1．动物的选择 纯种BALB/C小鼠，较温顺，离窝的活动范围小，体弱，食量及排污较小，一般环境洁净的实验室均能饲养成活。目前开展杂交瘤技术的实验室多选用纯种BALA/C小鼠。 2．免疫方案 选择合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功，获得高质量的McAb至关重要。一般在
简述单克隆抗体的制备过程
1.对小鼠注射特定的抗原蛋白，使小鼠产生免疫反应；2.得到相应的B淋巴细胞；3.将小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合，再用特定的选择培养基进行筛选；4.在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂种细胞才能生长（这种杂种细胞的特点是既能迅速大量繁殖又能产生专一的抗体）5.
单克隆抗体的制备方法3
（4）融合 ①将骨髓瘤细胞与脾细胞按1：10或1：5的比例混合在一起，在50ml离心管中用无血清不完全培养液洗1次，离心，1200rpm,8min;弃上清，用吸管吸净残留液体，以免影响聚乙二醇（PEG）浓度。轻轻弹击离心管底，使细胞沉淀略松动。 ②90s内加入37℃预温的1ml 45%PEG
单克隆抗体的制备方法4
（5）在第7天换液，以后每2～3天换液1次。 （6）8～9天可见 细胞克隆形成，及时检测抗体活性。 （7）将阳性孔的细胞移至24孔板中扩大培养。 （8）每个克隆应尽快冻存。 2．软琼脂培养法克隆 （1）软琼脂的配制：含有20%NCS（小牛血清）的2倍浓缩的RPMI1640。
单克隆抗体的制备原理简介
原理1：单克隆抗体（MAb）与抗血清（又称多克隆抗体，PAb）最主要的区别是MAb为单一种B细胞克隆所产生的一种均一的免疫球蛋白分子。所以MAb是B细胞克隆的标志，是一种独特型的抗体，它的特异性是针对一个抗原决定簇的。制备单克隆抗体不能用化学分离的方法从多克隆抗体中去分离纯化得到它，而是用分离产
单克隆抗体制备的流程
原理：B淋巴细胞在抗原的刺激下，能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力。B细胞的这种能力和量是有限的，不可能持续分化增殖下去，因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的。将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，再进一步克隆化，这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤的无限生长的能力
大量单克隆抗体的制备方法
目前制备大量单克隆抗体的方法主要有两种：一种是动物体内诱生法；另一种是体外培养法。 背景BACKGROUND 困惑PUZZLED 体外培养法有哪几种培养方式？何谓无血清培养？探索在体外培养法中,目前各个实验室普遍采用细胞单层法,就是将杂交瘤细胞加入培养瓶中，用完全培养基培养，细胞浓度以1.0X100
概述单克隆抗体的制备过程
1.免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。 2.细胞融合 采用二
详解单克隆抗体的制备过程
单克隆技术又名杂交瘤技术。由G.KÖhler和Milstein1975年创立。主要原理是利用产生抗体的B细胞与肿瘤细胞杂交融合成杂交瘤细胞，生产抗体。 单克隆抗体的制备过程主要有以下六个环节，具体为抗原指标、免疫动物选择、免疫程序的确定、免疫、细胞杂交与选择培养。下面详细介绍单克隆抗体制备过程每一
单克隆抗体技术
实验概要显微镜下观察血片或骨髓片，找出异常细胞。实验原理B淋巴细胞能够产生抗体，但在体外不能进行无限分裂；而骨髓瘤细胞可以在体外无限传代，但不能产生抗体。将这两种细胞融合后，用一特殊选择培养基(HAT)阻断正常细胞或自体融合细胞的DNA合成通路，而杂交瘤细胞可利用补救通路合成DNA得以生存，且既能产
单克隆抗体技术
实验概要显微镜下观察血片或骨髓片，找出异常细胞。实验原理B淋巴细胞能够产生抗体，但在体外不能进行无限分裂；而骨髓瘤细胞可以在体外无限传代，但不能产生抗体。将这两种细胞融合后，用一特殊选择培养基(HAT)阻断正常细胞或自体融合细胞的DNA合成通路，而杂交瘤细胞可利用补救通路合成DNA得以生存，且既能产
单克隆抗体技术
实验原理 B淋巴细胞能够产生抗体，但在体外不能进行无限分裂；而骨髓瘤细胞可以在体外无限传代，但不能产生抗体。将这两种细胞融合后，用一特殊选择培养 基（HAT）阻断正常细胞或自体融合细胞的DNA合成通路，而杂交瘤细胞可利用补救通路合成DNA得以生存，且既能产生抗体，又能无限增殖，并以此生产抗
上海巴斯德所合作开发出人单克隆抗体新型制备技术
2011年12月25日，Molecular Biotechnology 在线发表了中科院上海巴斯德研究所周保罗研究组题为“用波浪生物反应器进行灌注培养稳转了人单克隆抗体基因的果蝇细胞系高产人单克隆抗体”的文章。这是首次关于用波浪生物反应器灌注培养稳转了人单克隆抗体基因的果蝇S2细胞来产生人单克隆
单克隆抗体上清的制备实验——单抗上清大量制备
实验材料抗体试剂、试剂盒DMEM-10乙醇仪器、耗材离心机培养瓶转子实验步骤1. 重复基本方案1步骤1，按1：10分传到终体积100 ml 的完全DMEM-10/HEPES中。 2. 准备传代细胞时，应将175 cm2培养瓶中的内容物（100 ml）转移到—个850 cm2旋转培养瓶中，另加15
单克隆抗体上清的制备实验2
实验材料抗体试剂、试剂盒PBS仪器、耗材离心机离心管实验步骤1. 同备择方案1中大规模制备MAb上清的步骤1~4，但等细胞长到合适的密度时就应收获细胞，或者是在细胞生长的平台期收获。 2. 将细胞倒入无菌的250 ml 锥形离心管中，于4℃ 250 g 离心15 min，弃上清。 3. 置细胞
单克隆抗体上清的制备实验1
实验材料杂交瘤试剂、试剂盒完全培养基仪器、耗材培养箱转子离心机实验步骤1. 将杂文瘤置于一个盛有完全DMEM-10培养基的175 cm2组织培养瓶中，置37 ℃CO2培养箱中，直至生长旺盛适于分传。2. 按1：10的比例将细胞分传到一个新的175 cm2的培养瓶中，加入完全DMEM-10培养液到
抗海藻糖酶单克隆抗体的制备
通过腹腔注射加佐剂的重组蛋白或合成的多肽来免疫8周龄的雌性小鼠BALB/c，第一次免疫问隔两周后，每周连续注射3-4次。最后一次注射后3-4天杀死小鼠，用改良的Kohler和Milstein方法将脾细胞与B细胞瘤株P3-X63-Ag8融合。细胞融合产生8种杂交瘤克隆株：KM2275、KM2276、K
鼠源单克隆抗体制备原理
鼠源单克隆抗体制备原理是一种从鼠源抗体库中制备单克隆抗体的技术，它首先需要将鼠源抗体从细胞中分离出来，然后经过PCR扩增其VH和VL基因片段，再把这些片段构建成单克隆抗体的基因载体，最后将其转染到细菌或哺乳动物细胞中，通过筛选和纯化步骤来获得单克隆抗体的纯化产物。首先，将鼠源抗体从细胞中分离出来，可
鼠源单克隆抗体制备原理
鼠源单克隆抗体制备原理是一种从鼠源抗体库中制备单克隆抗体的技术，它首先需要将鼠源抗体从细胞中分离出来，然后经过PCR扩增其VH和VL基因片段，再把这些片段构建成单克隆抗体的基因载体，最后将其转染到细菌或哺乳动物细胞中，通过筛选和纯化步骤来获得单克隆抗体的纯化产物。首先，将鼠源抗体从细胞中分离出来，可
单克隆抗体制备过程与原理
单克隆抗体(MAb)是针专一的抗原决定簇产生的抗体，单克隆技术又名杂交瘤技术起源于1975年，由G.KÖhler和Milstein创立。主要原理是利用产生抗体的B细胞与肿瘤细胞杂交融合成杂交瘤细胞，生产抗体。单克隆抗体制备过程有以下几个步骤，下面讲简要介绍。1、免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠