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荧光定量PCR实验指南5

您可以选择荧光染料SYBGREEN体系,具体请参照说明书。您可灵活使用20-50ul间其他体积,注意保证终浓度相同。A2010A0106试剂盒:反应体系终浓度(自配热启动荧光系统):1-2U的hotstartTaq酶、3-5.5mM的Mg2+ 、0.2mM的dNTPs、1×PCRbuffer(A2010A0106);50-900nM的上游引物(可先设200nM)、 50-900nM的下游引物(可先设200nM)、200nM的探针、通常取2-5ul的模板,无菌去离子水补足,反应总体积通常为 20-50ul自配热启动荧光-UNG体系:1-2U的Taq酶、1×PCRbuffer、 2.5-4.0mM的Mg2+(A2010A0105);0.2-1U的UNG酶(A2010A0107)(可先设为 0.5U)、0.2mM的d(A,C,G)TPs、0.2-0.4mMdUTP(要调整)(A2010A0108);50-900nM的上......阅读全文

如何做好荧光定量PCR实验

荧光定量PCR实验指南一、基本步骤:1、目的基因(DNA和mRNA)的查找和比对;2、引物、探针的设计;3、引物探针的合成;4、反应体系的配制;5、反应条件的设定;6、反应体系和条件的优化;7、荧光曲线和数据分析;8、标准品的制备;二、技术关键:1、 目的基因(DNA和mRNA)的查找和比

BCEIA 2015之PCR仪大盘点

  分析测试百科网讯 2015年10月27日,国内分析测试行业影响力最大的展会2015 BCEIA在北京国家会议中心举办。作为业内规模和质量最高的盛会之一,此次BCEIA上主要有三家厂商展出了四款最新的PCR技术,分析测试百科网小编进行了详细盘点。 

数字PCR助力新型冠状病毒药物临床试验及治疗监测

  2019新型冠状病毒,即“2019-nCoV”,2020年1月12日被世界卫生组织命名。冠状病毒是一个大型病毒家族,其中SARS-CoV、MERS-CoV和2019-nCoV均属于β属冠状病毒。  截止最新的确诊病例信息显示,新型冠状病毒的传播能力比SARS更强,导致疫情传播速度较快,给疾病防控

新冠病毒检查哪些项目?这篇文章告诉你

  一、血液学检查  病毒感染相关的血液学检查主要包括血常规、血生化以及其他针对性的检测项目,相关指标为临床常用的病毒感染诊断指标,为疾病的辅助诊断提供依据。  1、血常规  血常规中的许多项具体指标都是一些常用的敏感指标,对机体内许多病理改变都有敏感反映,其中又以白细胞计数、红细胞计数、血红蛋白和

长知识了!新冠病毒2019-nCoV实验室检测内容全都在这里

  当下我国正处于新型冠状病毒2019-nCoV疫情发展阶段,该病毒感染主要会造成的新型的急性肺炎症状(WHO已将其名为NCOVID19),疫情已在全国范围内肆虐超过20天,对我国民生健康和经济造成极大影响。目前网上涌现多篇关于新型冠状病毒2019-nCoV实验室检测技术的文章,文章质量水平千差万别

特朗普又来“直播带货”啦 这次看上了核酸提取仪和定量PCR

  分析测试百科网讯 特朗普在白宫举行的最新的新冠疫情说明会上,介绍了美国在新冠病毒检测方面领先世界的技术产品——各种用于新冠病毒测试的产品,其中就包括了赛默飞KingFisher Flex高通量自动化核酸提取仪和QuantStudio 系列实时荧光定量PCR系统。这次在白宫的新冠疫情说明会通过美国

定量PCR

定量PCR可以用于:(1)以外参或内参为标准,通过对PCR终产物的分析或PCR过程的监测,进行PCR起始模板量的定量;(2)用外标法(荧光杂交探针保证特异性)通过监测PCR过程(监测扩增效率)达到精确定量起始模板数的目的,同时以内对照有效排除假阴性结果(扩增效率为零)。实验方法原理定量PCR(即时聚

检验检疫系统内国家级重点实验室仪器设备的配置指南

  总则   适用范围:本指南适用于检验检疫系统内国家级重点实验室仪器设备的配置。   1术语和定义   重点实验室:是指国质检科[2003]366号文中公布的188个国家级重点实验室和国质检科函[2006]136号公布的1个国家级重点实验室。   2仪器设备配置原则

定量PCR

            实验方法原理 定量PCR(即时聚合酶链锁反应,Real-time Polymerase Chain Reaction,简称 Real-time PCR、即时PCR),又称定量即时

TORCH感染筛查、诊断与干预原则和工作流程专家共识

近年来,国内外均发表了与TORCH感染相关的临床实践指南,但仍有内容需要加以补充和明确。国内部分专家就TORCH感染筛查、诊断及干预的临床路径进行了专题研讨,达成共识如下:(1)不是所有的TORCH病原体都需要孕前或孕期筛查;对围孕期妇女不需要进行单纯疱疹病毒抗体分型检测,若无临床症状,不需要等待其

大规模 PCR 制作 cDNA 微阵列实验

本方案描述了通过 PCR 扩增产物,来制作 cDNA 微阵列的实验步骤。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。试剂、试剂盒缓冲液、溶液和试剂生物分子酶和酶缓冲液核酸和寡核苷酸凝胶仪器、耗材专用设备实验步骤第 1 阶段:影印铺板与工作库的制备一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂羧苄

PCR 产物定量实验

测序之前对模板精确定量至关重要。根据 DNA 用量的多少,有几种不同的方法可供选择。下面介绍另外两种方法:荧光测定法和比较溴化物染色法。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。试剂、试剂盒DNA 标准TEPCR 产物仪器、耗材荧光计金属箔纸微量离心管实验步骤方法 A: 荧光测定

遗传修饰(转基因)风险评估(二)

3. 慎重向环境释放未经事先批准的转基因植物是不能够释放到环境中去的。在欧洲,2001/18 号欧盟指令( 见注 7 ) 专门规定了慎重向环境中释放转基因植物。该指令涵盖了两种类型的环境释放: 实验释放 ( B 部分)和投放市场的商业释放( C 部分)( 见注 8) 。对于每个授权的 B 释

CFX96荧光定量PCR中文操作手册

CFX96是一款中高端荧光定量PCR,  越来越多的被国内使用者们采用,  下面是这台机器的中文手册,  可以打印出来放在机器边上方便学生使用。   CFX96 实时荧光定量PCR仪器的操作流程及注意事项1、开始运行仪器1.1打开

如何做好荧光定量PCR实验?(一)

荧光定量PCR实验指南一、基本步骤:1、目的基因(DNA和mRNA)的查找和比对;2、引物、探针的设计;3、引物探针的合成;4、反应体系的配制;5、反应条件的设定;6、反应体系和条件的优化;7、荧光曲线和数据分析;8、标准品的制备;二、技术关键: 1、 目的基因(DNA和mRNA)的查找和比对;从h

赛默飞重推移动检测解决方案 定制化快速筛选

  2014年9月24日,赛默飞世尔科技亮相于上海新国际博览中心召开的2014慕尼黑上海分析生化展,隆重推出了赛默飞移动检测解决方案并召开新闻发布会,赛默飞中国

激活的热稳定 DNA 聚合酶进行反转录和 DNA 扩增实验

本实验介绍激活的热稳定 DNA 聚合酶进行反转录和 DNA 扩增。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。试剂、试剂盒RNA寡核苷酸引物脱氧核苷三磷酸RT RNA PCR 酶AccuRT 缓冲液UNG琼脂糖溴化乙锭二甲基亚砜乙酸镁去除 RNA 酶的水SYBRGreen I Dy

实时 PCR 的参数实验

LUX 引物用 FAM(6-羧基荧光素)或 JOE(6-羧基-4',5'-二氯-2',7'-二甲氧基荧光素)标记。在没有特异模板的反应中,LUX 引物可以对 100 个拷贝或更少的目的基因进行定量,定量范围可以从不足 100 到 107 个拷贝。运用 FAM

Western Blot详解

  Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。   本文主要通过以下几个方面来详细地介绍一下Western Blot技术:   一、原理   二、分类

常用的分子生物学基本技术1

DNA重组技术(或基因工程)是20世纪生物学的伟大成就,并已渗透到生命科学包括医学 各个领域,为肿瘤的实验研究和临床诊断及治疗提供了崭新的技术和有用的工具。本附录扼要介绍在分子肿瘤学领域中常用的分子生物学基本技术及其在肿瘤研究中的应用,着重介绍它们的原理和应用。至于具体的技术方法和操作步骤可参阅《分

2016科学仪器重大专项指南发布

  分析测试百科网讯 今天,科技部发布了《“重大科学仪器设备开发”重点专项2016年度申报指南》,详情如下。  附1:申报相关要求和规定  附2:“重大科学仪器设备开发”重点专项2016年度申报指南  科学仪器设备是科学研究和技术创新的基石,是经济社会发展和国防安全的重要保障。为

盘点医学SCI论文中常见Figure类型及各自要点

  在这个读图的时代,凡是能用一张图片描述清楚的问题都不是问题,如果不够,那就两张~  比如这段:“姑娘相貌娇美,肤色白腻, 她身穿一件靛青织锦的上衣,颜色甚是鲜艳,但在她容光映照之下,再灿烂的锦缎也已显得黯然无光……”  用图片说就是:  是不是既简单又粗暴?  同样的,一张好的Figure胜过千

国务院发文:如何才能准确检测农贸市场的新冠病毒?

  关于印发农贸(集贸)市场新型冠状病毒环境监测技术规范的通知  联防联控机制综发〔2020〕221号  各省、自治区、直辖市及新疆生产建设兵团应对新冠肺炎疫情联防联控机制(领导小组、指挥部):  为科学规范指导开展农贸(集贸)市场新冠病毒环境监测工作,深入开展病毒溯源和疫情防控,我们组织编制了《农

利用核苷酸交换和剪切技术进行DNA碎裂和定向

利用核苷酸交换和剪切技术进行DNA碎裂和定向进化             实验材料 T4 DNA 连接

Western Blot实验技术详解和常见问题解答

Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。一、原理与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被

中检院发布二代测序试剂质量评价通用原则

  一.前言  本指导原则主要针对第二代测序(next generation sequencing,NGS)技术检测试剂(以下简称“NGS检测试剂”)产品质量提出指导性要求,涉及基本原则、主要原材料、检测流程及性能评价等方面。  本指导原则是对企业和检验人员的指导性文件,但不包括注册审批所涉及的行政

NGS检测试剂生产应获得《医疗器械生产许可证》

  为加强第二代测序技术检测试剂的规范和指导,进一步保证和提高相关产品的质量,8月8日,中国食品药品检定研究院(中检院)组织制定了《第二代测序技术检测试剂质量评价通用技术指导原则》(下称《指导原则》)。  该文件是中检院发布的首个质量评价技术指导原则,旨在对产品设计、研发及验证的各关键环节进行规范,

中国、美国及WHO新冠病毒核酸检测试剂审评要求简要对比

  自2019年12月新冠肺炎疫情发生到如今全球呈多区域爆发情况下,各国监管机构和IVD企业陆续采取积极措施。为积极应对新冠肺炎疫情,国家药监局于第一时间启动应急审批程序。1月20日,器审中心起草《2019新型冠状病毒核酸检测试剂注册技术审评要点》,并于2月12日在中心官网率先对外发布。  世界卫生

戊巴比妥钠和异氟烷对大鼠急性应激反应的影响(一)

研究背景:麻醉后处死动物在应激方面的研究是普遍的,但是麻醉对结果的影响研究不足。我们的目的是探究不同麻醉剂的影响,如在大鼠急性应激反应时腹腔注射戊巴比妥钠或吸入异氟烷。方法:将大鼠随机分为电击(FS)和非应激对照组,进一步设定处死程序:直接斩首,腹腔注射戊巴比妥钠或吸入异氟烷后斩首。再设定一组对照组

利用核苷酸交换和剪切技术进行DNA碎裂和定向进化实验

3.5 片段纯化经酶解和化学裂解得到的基因片段(见 10.3.3 ) 即可通过硅胶树脂直接从切割反应液中纯化(见 10.3. 5.1),也可通过制备型尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化(见 10.3.5.2) 。最初我们认为如想得到特定大小的片段必须通过凝胶电泳来纯化,以确保在重组装反应中没有较长片段甚