TAILPCR(TermalAsymmetricInterlacedPCR)基础知识
很早就有用随机引物的PCR,但由于无法有效地控制由随机引物引发的非特异产物的产生,所以一直未能广泛应用。近年来由IJiu等设计的TAIL- PCR(Termal Asymmetric Interlaced PCR)又叫热不对称交错PCR,则解决了这个问题,后来有研究表明,经改良过的TAIL-PCR成功地从突变体中克隆到外源插入基因的旁侧序列,从而为启动子的克隆提供了有效的新方法。在利用特异引物和随机引物进行PCR中一般有3种产物生成:(1)由特异性引物和简并引物扩增出的产物; (2)由同一特异性弓l物扩增出的产物;(3)由同一简并引物扩增出的产物。在TAIL-PCR反应中,其中后2种目标产物可以通过以嵌套的特异性引物进行的后续反应来消除。TAIL-PCR的基本原理是利用目标序列旁的已知序列设计3个嵌套的特异性引物(specialprimer,简称 sp1,sp2,sp3,约20bp),用它们分别和1个具有低Tm值......阅读全文
标准样品基础知识
一、 引言简单地说,标准样品就是实物标准,它是标准的另一种存在形式,它与文字标准合在一起构成完整的标准形态。根据GB/T15000.1-94《标准样品工作导则<1>在技术标准中陈述标准样品的一般规定》的规定:"在技术标准中规定的各项技术指标以及有关标准分析试验方法,凡需要标准样品配合才能确保这些技术
HPLC基础知识(七)
V.HPLC应用一、样品测定1.流动相比例调整:由于我国药品标准中没有规定柱的长度及填料的粒度,因此每次新开检新品种时几乎都须调整流动相(按经验,主峰一般应调至保留时间为6~15分钟为宜)。所以建议第一次检验时请少配流动相,以免浪费。弱电解质的流动相其重现性更不容易达到,请注意充分平衡柱。2.样品配
HPLC基础知识(五)
4.与检测器有关的故障及其排除1)流动池内有气泡 如果有气泡连续不断地通过流动池,将使噪音增大,如果气泡较大,则会在基线上出现许多线状“峰”,这是由于系统内有气泡,需要对流动相进行充分的除气,检查整个色谱系统是否漏气,再加大流量驱除系统内的气泡。如果气泡停留在流动池内,也可能使噪音增大,可采
凝胶成像基础知识
(1)分辨率 分辨率的大小和像素值是分不开的,像素指得是CCD能分别的*小的感光元件,我们平时说的多少万像素就是这些感光元件的个数了。所以一般来讲像素越多,成像也就越清晰细腻,当然这其中还要受许多因素限制,下面会慢慢提到的。但是高像素也不一定是好的CCD,其原因就是像素大小(Pixel Size
病毒基础知识(7)
三、病毒的化学组成及其功能 病毒的基本化学组成是核酸和蛋白质。有包膜的病毒和某些无包膜的病毒除核酸和蛋白质外,还含有脂类和糖类。有的病毒还含有聚胺类化合物,无机阳离子等组分。1.病毒的核酸: 核酸是病毒的遗传物质,是病毒遗传和感染的物质基础。一种病毒的病毒颗粒只含有一种核酸,DNA或者RNA。除
XRF选购基础知识
1仪器品牌& 公司实力这点和购买其他商品一样,我们都会注意到这点,购买XRF我们要看这个品牌是不是在RoHS指令执行期间才冒出来的,大家都知道仪器技术都是要靠积累和沉淀的,还有大家关心的是会不会这个公司应为RoHS而生,因为RoHS而亡.如果这个公司赚够钱,突然蒸发了,那用户怎么办,售后服务由谁
病毒基础知识(3)
(四)分子病毒学的研究时期 自从1953年DNA双螺旋结构理论建立以来,由于分子生物学的迅速发展,新技术和新方法的应用,使得病毒学的研究步入了分子病毒学的发展时期。50年代至60年代是分子生物学的奠基时代,而病毒特别是噬菌体和植物病毒为此做出了巨大的贡献,因此分子病毒学也正是分子生物学的发展过程中
气质联用基础知识
GC/MS被广泛应用于复杂组分的分离与鉴定,其具有GC的高分辨率和质谱的高灵敏度,是生物样品中药物与代谢物定性定量的有效工具。 质谱仪的基本部件有:离子源、滤质器、检测器三部分组成,它们被安放在真空总管道内。 接口:由GC出来的样品通过接口进入到质谱仪,接口是色质联用系统的关键。l接口作用:l压力匹
质谱基础知识
◇常用的质量单位◇原子结构及其质量◇原子量◇同位素及同位素丰度同位素即具有相同的原子序数而又具有不同的质量数的原子叫作同位素。同位素丰度即自然界中某同位素原子所占的百分数叫做该同位素的天然丰度。◇同位素表示法
生物光学基础知识
光的概念光是一种电磁波,它具有波动和微粒的双重性。与其它所有的波一样,光波也具有波长,波长用λ表示。光波最常用的单位是纳米(nm)。把光波波长按照从短到长的顺序进行排列就得到了光谱。光谱中随着波长由短到长依次出现ґ射线、x射线、紫外线、可见光、红外线、无线电波等。 可见光可见光就是不需借助任何仪器设
病毒基础知识(8)
四、病毒的增殖 病毒缺乏增殖所需要的酶系统,只能在活的宿主细胞内增殖(自我复制)。绝大多数病毒复制过可分为下列六步:吸附、侵入、脱壳、生物合成、组装和释放。1. 吸附 是决定感染成功与否的关键环节。需要病毒表面特异性的吸附蛋白(Virus attachment Protein, VAP)与细
病毒基础知识(2)
三、病毒学的发展历程病毒病害的病原研究阶段; 病毒化学和结构研究阶段。(一)病毒病害的病原研究阶段 自病毒发现直到上个世纪30年代初,病毒学研究主要集中在:分离和鉴定引起各种病毒性疾病的病毒;病毒对疾体所引起的特异性病理效应;病毒的传播方式和感染宿主范围;各种理化因子对病毒感染的影响等方面。 在
物理吸附基础知识
如何确定热自由空间?测定热自由空间有两种方法:方法一:在歧管中充入V1体积的氦气后,压力为P1,打开歧管和样品管间的隔离阀,使气体扩散到原本已经抽空的样品管中,平衡后的压力为P2,此时样品管并未浸没在冷浴中,温度为Tw。根据质量平衡方程可得:其中,Vfw代表热自由空间体积,是样品管的体积与样品占据体
XRF选购基础知识
1.仪器品牌&公司实力 这点和购买其他商品一样,我们都会注意到这点,购买XRF我们要看这个品牌是不是在RoHS指令执行期间才冒出来的,大家都知道仪器技术都是要靠积累和沉淀的,还有大家关心的是会不会这个公司应为RoHS而生,因为RoHS而亡.如果这个公司赚够钱,突然蒸发了,那用户怎么办,售后
HPLC基础知识(三)
3.柱外效应速率理论研究的是柱内峰展宽因素,实际在柱外还存在引起峰展宽的因素,即柱外效应(色谱峰在柱外死空间里的扩展效应)。色谱峰展宽的总方差等于各方差之和,即: σ2=σ2柱内+σ2柱外+σ2其它柱外效应主要由低劣的进样技术、从进样点到检测池之间除柱子本身以外的所有死体积所引起。为了减少柱外
病毒基础知识(10)
六、病毒的干扰现象两种病毒感染同一种细胞或机体时,常常发生一种病毒抑制另一种病毒复制的现象,称为干扰现象(interference)。干扰现象可在同种以及同株的病毒间发生,后者如流感病毒的自身干扰。异种病毒和无亲缘关系的病毒之间也可以干扰,且比较常见。病毒间干扰的机制还不完全清楚,概括起来包括:病毒
XRF选购基础知识
1.仪器品牌&公司实力这点和购买其他商品一样,我们都会注意到这点,购买XRF我们要看这个品牌是不是在RoHS指令执行期间才冒出来的,大家都知道仪器技术都是要靠积累和沉淀的,还有大家关心的是会不会这个公司应为RoHS而生,因为RoHS而亡.如果这个公司赚够钱,突然蒸发了,那用户怎么办,售后服务由谁来负
病毒基础知识(9)
五、病毒的非增殖性感染病毒对敏感细胞的感染并不一定都能繁殖病毒,产生有感染性的病毒子代。由于病毒或细胞的原因,使病毒的复制在病毒进入敏感细胞后的某一阶段受阻,导致病毒感染的不完全循环,不产生有感染性的病毒子代。1. 缺损病毒 有些病毒由于缺乏某些基因,单独感染细胞时不能复制出完整的、具 有感染性的
HPLC基础知识(一)
鉴于HPLC应用在药品分析中越来越多,因此每一个药品分析人员应该掌握并应用HPLC。I.概论 一、液相色谱理论发展简况色谱法的分离原理是:溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时,由于与固定相(stationaryphase)发生作用(吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和
HPLC基础知识(二)
3.离子交换色谱法 固定相是离子交换树脂,常用苯乙烯与二乙烯交联形成的聚合物骨架,在表面未端芳环上接上羧基、磺酸基(称阳离子交换树脂)或季氨基(阴离子交换树脂)。被分离组分在色谱柱上分离原理是树脂上可电离离子与流动相中具有相同电荷的离子及被测组分的离子进行可逆交换,根据各离子与离子交换基团具有不同的
病毒基础知识(5)
二、病毒分类和命名的规则(一)一般规则(1)病毒分类和命名应该是国际性的,并且普遍适用于所有的病毒。(2)国际病毒分类系统采用目(order)、科(family)、亚科(subfamily)、属(genus)、种(species)、分类阶元。(3)ICTV不负责病毒种以下的分类和命名,病毒种以下的血
不对称聚合酶链反应的方法及应用介绍
中文名称不对称聚合酶链反应英文名称asymmetric PCR定 义引物用量不对称的聚合酶链反应。这两个引物分别称为非限制与限制性引物,反应中当低浓度的限制性引物消耗完后,高浓度的非限制性引物就引导产生大量的单链DNA。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
其它PCR方法
· Standard PCR Protocol (Molecular Biology Techniques Manual)The followings are described in detailRecommended Reagent ConcentrationsRecommend
反向PCR-(inversePCR)实验步骤
inverse-PCR是克隆插入片段侧翼序列非常有效的方法。通常采用的Tail-PCR假阳性太多,而Inverse-PCR一般只要有特异条带,基本上就是目的片段。基本步骤如下:1、反向PCR(Inverse PCR)原理:反向PCR是克隆T-DNA插入位点侧翼DNA序列非常有效的方法。a. 选择合适
启动子克隆方法研究进展(5)
2 讨论 以上介绍的几种方法基本代表了现有的启动子克隆方法,它们分别具有不同的特点和适用范围。 利用启动子探针载体筛选启动子时,不需要知道具体的基因序列,避免了引物设计,并能获得大量的启动子片段;其缺点是需要构建1个穿梭质粒,建库、转化、筛选,工作量大,费时费力,而且克隆、亚克隆的过程繁琐。因此
HPLC基础知识教程(七)
几种检测器的主要性能全屏显示表格UV荧光安培质谱蒸发光散射信号吸光度荧光强度电流离子流强度散射光强噪音10-510-310-9线性范围105104105宽选择性是是是否否流速影响无无有无温度影响小小大小
HPLC基础知识教程(十一)
全屏显示表格硅胶氧化铝苯乙烯-二乙烯苯甲基丙烯酸酯耐有机溶剂++++++++++适用pH范围++++++++抗膨胀/收缩++++++++耐压+++++++++表面化学性质+++++++++效能+++++++注:+++好 ++一般 +差
HPLC基础知识教程(八)
全屏显示表格UV荧光安培质谱蒸发光散射全屏显示表格检测限(g/ml)10-1010-1310-13<10-9g/s10-9池体积(ul)2~10~7<1————梯度洗脱适宜适宜不宜适宜适宜细管径柱难难适宜适宜适宜样品破坏无无无有无
石油产品基础知识问答
1、什么是油品的馏程 馏程是指以油品在规定条件下蒸馏所得到的以初馏点到终馏点表示蒸发特征的温度范围。主要用来判定油品轻、重馏分组成的多少,控制产品质量和使用性能等。 2、什么是辛烷值 代表点燃式发动机燃料抗爆性的一个约定数值。在规定条件下的标准发动机试验中,通过和标准燃料进行比较来测
HPLC基础知识教程(十二)
二、化学键合固定相 将有机官能团通过化学反应共价键合到硅胶表面的游离羟基上而形成的固定相称为化学键合相。这类固定相的突出特点是耐溶剂冲洗,并且可以通过改变键合相有机官能团的类型来改变分离的选择性。 1.键合相的性质 目前,化学键合相广泛采用微粒多孔硅胶为基体,用烷烃二甲基氯硅烷或烷氧基硅烷