RAPD分析技术1
1 导论聚合酶链式反应(PCR)以其优越性极大地影响到了分子生物学的几乎所有领域,并以其基本程序和DGGE(denaturing gradient gel electrophoresis),开发出多种检测核苷酸变异的方法。 RAPD(Random Amplifed Polymorphic DNA)就是其中的一种,它是1990年美国杜邦公司科学家 J. G. K. Williams和加利福尼亚生物研究所J. Welsh领导的两个小组几乎同时发展起来的一项新技术。Williams称之为 RAPD,Welsh叫它AP-PCR(Arbitrary Primer PCR)(Welsh J et al, Nucl Acids Res, 1990(18):7213; Williams J G K et al, Nucl Acids Res, 1990(18):6531)。与常规PCR相比,RAPD主要有以下的自身特点:......阅读全文
随机引物的PCR标记的相关内容
所用引物的核苷酸序列是随机的,其扩增的 DNA 区域事先未知。随机引物PCR扩增的 DNA 区段产生多态性的分子基础是模板 DNA 扩增区段上引物结合位点的碱基序列的突变,不同来源的基因组在该区段上表现为扩增产物有无差异或扩增片段大小的差异。随机引物PCR标记表现为显性或共显性。 ①随机扩增多
随机扩增多态性DNA的简介
随机扩增多态 DNA (randomly amplified polymorphic DNA, RAPD),是美国学者Williams和Welsh于1990年首先提出的该技术是通过分析DNA的PCR产物的多态性来推测生物体内基因排布与外在性状表现的规律的技术。RAPD技术是以8-lObp的随机寡
基因技术专题1
专题一:RNA干扰技术(RNAi)1995年,康奈尔大学的Su Guo博士用反义RNA阻断线虫基因表达的试验中发现,反义和正义RNA都阻断了基因的表达,他们对这个结果百思不得其解。直到1998年, Andrew Fire的研究证明,在正义RNA也阻断了基因表达的试验中,真正起作用的是双链RNA。这些
动物实验技术1
实验动物常用作病原微生物的分离和鉴定,进行动物接种实验应选择易感性高、健康的动物。常用的动物有小鼠、豚鼠和家兔。根据实验要求可通过皮下、皮内、肌肉、腹腔、静脉等途径注射。感染动物死亡后,必要时进行尸体解剖并作病原体的检查。 一、实验动物接种法 (一)小白鼠接种法 【
cDNA合成技术1
Promega公司的RibocloneR M-MLV(H- ) cDNA合成系统采用M-MLV反转录酶的RNase H缺失突变株取代AMV反转录酶,使合成的cDNA更长。该系统的第一链合成使用M-MLV反转录酶,cDNA第二链合成采用置换合成法,采用 RNaseH和DNA聚合酶Ⅰ进行置换合成
细胞化学技术1
细胞化学技术(cytochemistry)是在保持细胞结构完整的条件下,通过细胞化学反应研究细胞内各种成分(主要是生物大分子)的分布情况以及这些成分在细胞活动过程中的动态变化的技术,可以通俗地说,这类技术让人们在显微镜下看到细胞内大分子的位置。这类技术包括光镜和电镜水平的酶细胞化学技术、免疫细胞化学
分子杂交技术--1
互补的核苷酸序列通过Walson-Crick碱基配对形成稳定的杂合双链分子DNA分子的过程称为杂交。杂交过程是高度特异性的,可以根据所使用的探针已知序列进行特异性的靶序列检测。 杂交的双方是所使用探针和要检测的核酸。该检测对象可以是克隆化的基因组DNA,也可以是细胞总DNA或总RNA。根据使用的方
Southern-杂交技术1
Southern技术是指以Southern名字命名的DNA转移杂交技术。它可用于基因组特定DNA序列的定位,可以测定相关片段的同源性、可以从c库、基因组文库中筛选完整基因等。用一种或多种限制性内切酶对基因组DNA加以切割,通过琼脂糖凝胶电泳分离酶切片段,随后,使DNA在原位变性,并从凝胶转移至固相膜
动物实验技术1
实验动物常用作病原微生物的分离和鉴定,进行动物接种实验应选择易感性高、健康的动物。常用的动物有小鼠、豚鼠和家兔。根据实验要求可通过皮下、皮内、肌肉、腹腔、静脉等途径注射。感染动物死亡后,必要时进行尸体解剖并作病原体的检查。一、实验动物接种法(一)小白鼠接种法【材料】1.小白鼠。2.无菌注射器(1ml
农作物种子纯度鉴定方法综述4
4.2 SSR(Simple sequence repeat,简单序列重复标记)由Moore等于1991年创立。SSR即微卫星DNA,是一类由几个(多为1~5个)碱基组成的基序(motif)串联重复而成的DNA串联重复序列,其长度一般较短,广泛分布于基因组的不同位置,如(cA)n、(AT)n、(GG
RAPD(randomly-amplifiled-polymorphic-DNA,随机扩增的多态性DNA
一、 原理运用随机引物扩增寻找多态性DNA片段可作为分子标记。这种方法即为RAPD(randomly amplifiled polymorphic DNA,随机扩增的多态性DNA.)该RAPD技术建立于PCR基础上,它是利用一系列(通常数百个)不同的随机排列碱基顺序的寡聚核苷酸单链(通常为十聚体
DNA分子标记技术研究进展(一)
遗传标记在遗传学的建立和发展过程中有着举足轻重的作用,随着遗传学的进一步发展和分子生物学的异军突起,遗传标记先后相应地经历了形态标记、细胞学标记、生化标记和DNA分子标记四个发展阶段。前三种标记都是以基因表达的结果为基础的,是对基因的间接反映;而DNA分子标记则是DNA水平遗传变异的直接反映,它具有
常用的几种分子标记
RAPD利用 10 个碱基的一个或几个随机引物非定点地扩增 DNA 片段,一般一个引物可扩增 6-12 条 DNA 片段,利用凝胶电泳分开扩增的片段,从而进行基因多态性研究。 RAPD 是一种能快速进行基因多态性研究的技术,并且由于不涉及印迹杂交、放射性自显影等技术,因此简便易行。 SSR 真核生物
几种标记实验的特点
RAPD利用 10 个碱基的一个或几个随机引物非定点地扩增 DNA 片段,一般一个引物可扩增 6-12 条 DNA 片段,利用凝胶电泳分开扩增的片段,从而进行基因多态性研究。 RAPD 是一种能快速进行基因多态性研究的技术,并且由于不涉及印迹杂交、放射性自显影等技术,因此简便易行。SSR 真核生物的
动物实验基本技术1
第一节 实验动物的抓取和固定在进行实验时,为了不损伤动物的健康,不影响观察指标,并防止被动物咬伤,首先要限制动物的活动,使动物处于安静状态,工作人员必须掌握合理的抓取固定方法。抓取动物前,必须对各种动物的一般习性有所了解。操作时要小心仔细、大胆敏捷、熟练准确、不能粗暴,不能恐吓动物,同时,要爱惜动物
基因克隆技术1
一、目的基因的获得目的基因是指所要研究或应用的基因,也就是将要克隆或表达的基因。获得目的基因是分子克隆过程中最重要的一步。目前用于获得目的基因的方法有几种,如限制性内切酶直接分离法、文库筛选法、体外扩增法和人工合成法等,其中限制性内切酶法直接分离目的基因和多聚酶链式反应(PCR)或逆转录-多聚酶链式
RTPCR技术1
目前已有多种方法用来研究有关细胞和组织中,基因表达产物方面的内容,这些方法主要有Northern印迹、RNase保护分析法、原位杂交、点印迹、S1核酸酶分析法及反转录与PCR扩增串联的RT-PCR技术等。在这些方法中RT-PCR技术具敏感度高和应用范围广的特点,该技术提供给研究人员有效的进行测定转录
细胞培养技术1
一.细胞培养的基本原理 细胞培养是用酶消化法将组织碎块分离成单个细胞,用培养基制成细胞悬液,在体外适宜条件下,使细胞生长繁殖,并保留其一定的结构和功能特性。细胞培养与组织培养、器官培养主要不同点在于原始培养的对象不同。细胞培养使用的是单个细胞悬液,组织培养使用的是组织块(0.5~1立方毫米)或薄片
体外DNA重组技术1
在体外将两个或多个来源相同或不相同的DNA片段连接成新的重组DNA分子,再转到特定宿主细胞中进行自主复制并表达。这是分子生物学中的基本技术。DNA重组技术的基本程序包括:(1)获得外源DNA:外源DNA是进行DNA重组的目的DNA片段,一般采用 DNA聚合酶链式反应(PCR)或逆转录-DNA聚合酶链
动物实验基本技术1
第一节 实验动物的抓取和固定在进行实验时,为了不损伤动物的健康,不影响观察指标,并防止被动物咬伤,首先要限制动物的活动,使动物处于安静状态,工作人员必须掌握合理的抓取固定方法。抓取动物前,必须对各种动物的一般习性有所了解。操作时要小心仔细、大胆敏捷、熟练准确、不能粗暴,不能恐吓动物,同时,要爱惜动物
DNA的测序技术1
DNA序列的正确测定,是进行基因结构和功能分析,绘制基因图谱、转基因检测等方面工作的重要前提。同时DNA测序技术为快速、简捷分析蛋白序列及结构提供了工具。DNA序列测定技术是在DNA内切酶、合成酶的应用,基因克隆及亚克隆技术,高分辨率聚丙烯酰胺变性胶电泳技术等基础上建立起来的。这些技术主要有三部分组
病毒蚀斑技术(1)
1952年,Dulbecco把噬菌体空斑技术应用于动物病毒学,从而使病毒蚀斑技术 (Virus plaque formation)成为许多病毒的滴定和研究方法。(一) 原理 病毒感染细胞后,由于固体介质的限制,释放的病毒只能由最初感染的细胞向周边扩展。经过几个增殖周期,便形成一个局限性病变细胞区
土壤测试化验技术1
土壤测试可以了解某一地块的土壤供肥能力,监测土壤肥力变化的趋势;有的地方还把土壤环境监测工作纳入 土壤测试的范围,更扩大了它的应用。土壤测试主要是在实验室里的分析化验。但是,一个完整的土壤测试系统还应该包括:田间土壤取样技术,提取剂选择的实验 室相关研究和农田小区试验的校验研究。通过一系列的研究工作
干细胞再生技术1
干细胞再生技术除了在整形美容方面运用外,还能对烧伤、创伤、溃疡等进行微创修复,因为干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞,在一定条件下,可以分化成多种功能的APSC多能细胞,再往后还可以再造心血管、血管、骨、软骨等人体结构性组织,解决困扰医学界的人体器官缺损修复难题。简介干细胞再生技术除了在整形美
分子生态学词汇随机扩增多态
随机扩增多态 DNA (randomly amplified polymorphic DNA, RAPD),是美国学者Williams和Welsh于1990年首先提出的该技术是通过分析DNA的PCR产物的多态性来推测生物体内基因排布与外在性状表现的规律的技术。RAPD技术是以8-lObp的随机寡核苷
随机扩增多态性DNA技术简介
随机扩增多态 DNA (randomly amplified polymorphic DNA, RAPD),是美国学者Williams和Welsh于1990年首先提出的该技术是通过分析DNA的PCR产物的多态性来推测生物体内基因排布与外在性状表现的规律的技术。RAPD技术是以8-lObp的随机寡核苷
什么是随机扩增多态-DNA?
随机扩增多态 DNA (randomly amplified polymorphic DNA, RAPD),是美国学者Williams和Welsh于1990年首先提出的该技术是通过分析DNA的PCR产物的多态性来推测生物体内基因排布与外在性状表现的规律的技术。RAPD技术是以8-lObp的随机寡核苷
特异引物的PCR标记的相关介绍
特异引物的PCR标记所用引物是针对已知序列的 DNA 区段而设计的,具有特定核苷酸序列(通常为 18—24 bp),可在常规PCR复性温度下进行扩增,对基因组 DNA 的特定区域进行多态性分析。 ①序列标志位点 (Sequence Tagged Sites,STS) STS是对以特定对引物
KS1T型碳氢分析仪的相关技术指标
仪器使用条件 (1) 温 度 :0-40℃ (2) 相对湿度:≤80% (3) 供电电源:交流电压:220±22V 频率: 50±0.5Hz (4) 载气:氧气 (5) 功率:不小于3.5KW. (6) 无强磁场干扰 基本参数 测量范围 碳(C) : 1~99.9%(或0.0
植物表型分析技术快讯—多光谱荧光成像系统研究植物...1
植物表型分析技术快讯—多光谱荧光成像系统研究植物胁迫响应FluorCam多光谱荧光成像系统是国际知名FluorCam叶绿素荧光成像技术的高级扩展产品,其高度集成,功能强大,应用广泛,利用系统中的叶绿素荧光成像、多光谱荧光成像、红外热成像技术及RGB成像,可对植物进行全面、非接触的监测,高灵敏度反映光