分子标记——AFLP原理和操作步骤
一、原理AFLP也是通过限制性内切酶片段的不同长度检测DNA多态性的一种DNA分子标记技术。但AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增,然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行电泳,多态性即以扩增片段的长度不同被检测出来。实验中酶切片段首先与含有与其共同粘末端的人工接头连接,连接后的粘末端顺序和接头顺序就作为以后PCR反应的引物结合位点。实验中,根据需要通过选择在末端上分别填加了1～3个选择性核苷的不同引物,可以达到选择性扩增的目的。这些选择性核苷酸使得引物能选择性地识别具有特异配对顺序的内切酶片段,进行结合,导致特异性扩增。二、实验试剂Taq酶 EcoRI/ MseIEcoRI/ MseI接头 E+A引物M+C引物T4DNALigaseE和M引物琼脂 过硫酸胺丙烯酰胺尿素硝酸银甲酰胺 dNTPs 二甲苯青 冰醋酸玻璃硅烷50bpMark三、操作步骤（一） 基因组DNA提取和纯化A 、参考实验一的大量提取DNA实验方法，......阅读全文
分子标记
内容：一、遗传标记 二、DNA分子标记 三、染色体原位杂交 四、DNA分子标记的应用 长期以来，植物育种中选择都是基于植株的表型性状进行的，当性状的遗传基础较为简单或即使较为复杂但表现加性基因遗传效应时，表型选择是有效的。但水稻的许多重要农艺性状为数量性状，如产量等；或多基因控制的质量性状，如抗性等
AFLP技术
实验概要本实验介绍了AFLP（amplified fragment length polymorphism）技术。AFLP是一种建立在PCR基础上的限制性片断长度多态性分析，是一种重要而有效的分子标记技术。主要试剂AFLP试剂盒、测序胶、银染试剂主要设备PCR仪、银染设备实验步骤1. 总DNA提取(
细胞的分裂指数测定原理和操作步骤
一、原理体外培养细胞 生长、分裂繁殖的能力，可用分裂指数来表示。它与生长曲线有一定的联系，如随着分裂指数的不断提高，细胞也就进入了指数生长期。分裂指数指细胞 群体中分裂细胞 所占的百分比，它是测定细胞 周期的一个重要指标，也是不同实验研究选择细胞的重要依据。二、仪器、用品与试剂1、仪器与用品：CO2
细胞计数及活力测定原理和操作步骤
一、原理培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好，所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞 ，总细胞 中活细胞所占的百分比叫做细胞活力，由组织中分离细胞 一般也要检查活力，以了解分离的过程对细胞是否有损
Western－免疫印迹实验原理和操作步骤
[实验原理]Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶
DNA测序原理、仪器试剂和操作步骤1
DNA序列测定分手工测序和自动测序，手工测序包括Sanger双脱氧链终止法和Maxam-Gilbert化学降解法。自动化测序实际上已成为当今DNA序列分析的主流。美国PE ABI公司已生产出373型、377型、310型、3700和3100型等DNA测序仪，其中310型是临床检测实验室中使用最
电阻炉的工作原理和操作步骤
电阻炉是以电流通过导体所产生的焦耳热为热源的电炉。 电阻炉以电为热源，通过电热元件将电能转化为热能，在炉内对金属进行加热。电阻炉和火焰比，热效率高，可达50－80℅，热工制度容易控制，劳动条件好，炉体寿命长，适用于要求较严的工件的加热，但耗电费用高。 按传热方式，电阻炉分为辐射式电阻炉和对流式电
DNA测序原理、仪器试剂和操作步骤2
【操作步骤】1．PCR测序反应(1) 取0.2ml的PCR管，用记号笔编号，将管插在颗粒冰中，按下表加试剂： 所加试剂测定模板管标准对照管 BigDye Mix 1μl 1μl 待测的质粒DNA 1μl－ pGEM-3Zf (+) 双链DNA－1μl 待测
重组DNA的转化实验原理和操作步骤
实验目的制备出感受态细胞，把体外重组的DNA引入受体细胞，使受体菌具有新遗传性，并从中选择出转化子。实验原理感受态就是细菌吸收转化因子的生理状态，只有发展为感受态的细胞才能稳定摄取外来的DNA分子。pUC18的LacZ基因区域当有DNA片段插入时，LacZ基因失活，转化进入大肠杆菌并在含有IPTG和
磁力搅拌器的原理和操作步骤
磁力搅拌器是用于液体混合的实验室仪器，主要用于搅拌或同时加热搅拌低粘稠度的液体或固液混合物。 其基本原理是利用磁场的同性相斥、异性相吸的原理，使用磁场推动放置在容器中带磁性的搅拌子进行圆周运转，从而达到搅拌液体的目的。配合加热温度控制系统，可以根据具体的实验要求加热并控制样本温度，维持实验条件所需的
PCR扩增的原理和操作步骤－有哪些
PCR技术的基本原理 类似于DNA的 天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。 PCR是一种体外DNA 扩增技术，是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下，依赖于DNA聚合酶的酶促合反应，将待扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经“高温变性——低温退火—
DNA的酶切实验原理和操作步骤
一、实验目的 本实验学习、了解限制性内切酶的特性，学习根据具体目的设计适当的酶切体系并实施之。 二、实验原理 利用限制性内切酶切割DNA是DNA重组过程中的关键步骤之一。成功的酶切为后续工作提供了有效的实验材料。限制性内切酶是细菌体内限制修
质粒DNA的酶切原理和操作步骤
1．目的学会用限制性内切酶切割质粒DNA。2．原理II型限制性内切酶能识别双链DNA内部的特殊序列并在识别位点处将双链切断，形成粘性末端或齐平末端，通过电泳酶切后的DNA混合物能够确认和分离酶切片段。3．器材旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，1.5ml微量离心管，双面微量离心管架，水漂，恒温水
电阻炉的工作原理和操作步骤
一、工作原理 电阻炉是以电流通过导体所产生的焦耳热为热源的电炉。 电阻炉以电为热源，通过电热元件将电能转化为热能，在炉内对金属进行加热。电阻炉和火焰比，热效率高，可达50－80℅，热工制度容易控制，劳动条件好，炉体寿命长，适用于要求较严的工件的加热，但耗电费用高。 按传热方式，电阻炉
霉菌的形态观察实验原理和操作步骤
一、实验目的1、学习自制水浸片观察微生物的形态；2、学习并掌握观察霉菌形态的基本方法，了解四类常见霉菌的基本形态特征。二、基本原理霉菌可产生复什分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝)及孢子的形态特征是识别不同种类霉
关于分子印迹技术的原理和步骤的介绍
基本原理 当模板分子（印迹分子）与聚合物单体接触时会形成多重作用点，通过聚合过程这种作用就会被记忆下来，当模板分子除去后，聚合物中就形成了与模板分子空间构型相匹配的具有多重作用点的空穴，这样的空穴将对模板分子及其类似物具有选择识别特性。 基本步骤 1.在一定溶剂（也称致孔剂）中，模板分子与
分子标记的概念和方法特点
分子标记(Molecular Genetic Markers)是以个体间遗传物质内核苷酸序列变异为基础的遗传标记，是 DNA 水平遗传多态性的直接的反映。与其他几种遗传标记——形态标记、同工酶标记、细胞标记相比，DNA 分子标记具有的优越性有：大多数分子标记为共显性，对隐性的农艺性状的选择十分便利；
非标记抗体免疫电镜技术原理、材料和操作方法
（一） 原理标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应，对组织
简述分子杂交仪的操作步骤
1.接通电源打开开关，进行参数设定。参数设定，接通电源→按“选择”键到相应的参数行→按“设定”键，该行第一位开始闪烁，进入修改状态→按“置数”键，数字0~9循环到达所需的数字后按“移位”键到下一位数字修改最后修改完后，按“设定”键确认。按“选择”键可选择修改其他数据或回到正常显示状态。 2.达
拍打式均质器的原理和操作步骤
拍打式均质器使从固体样品中提取细菌的过程变得非常简单，只需将样品和稀释液加入到无菌的样品袋中，然后将样品袋放入拍击式均质器中即可完成样品的处理。有效地分离被包含在固体样品内部和表面的微生物均一样品，确保无菌袋中混合全部的样品。处理后的样品溶液可以直接进行取样和分析，没有样品的变化和交叉污染的危险。
铁蛋白免疫电镜技术原理和操作步骤
实验概要本文介绍了铁蛋白免疫电镜技术的原理、材料试剂和操作方法等。实验原理免疫铁蛋白技术是以铁蛋白标记抗体，再以铁蛋白抗体与待检抗原作用。通过电镜检查，观察到铁蛋白抗体所在的位置，即抗原所在。主要试剂1．马脾铁蛋白2．硫酸铵3．硫酸镉4．双异氰酸镉二甲苯(Metaxylene dlisocyante
铁蛋白免疫电镜技术原理和操作步骤
实验概要本文介绍了铁蛋白免疫电镜技术的原理、材料试剂和操作方法等。实验原理免疫铁蛋白技术是以铁蛋白标记抗体，再以铁蛋白抗体与待检抗原作用。通过电镜检查，观察到铁蛋白抗体所在的位置，即抗原所在。主要试剂1．马脾铁蛋白2．硫酸铵3．硫酸镉4．双异氰酸镉二甲苯(Metaxylene dlisocyante
更年安片薄层色谱鉴别原理和操作步骤
一．目的要求1掌握薄层荧光法的原理及操作。2掌握薄层色谱法在中药制剂鉴别中的应用。 二．基本原理 更年安片由地黄、泽泻、五味子、制何首乌等药味组成，可利用薄层色谱法对五味子和制何首乌进行鉴别。五味子中主要有效成分为木脂素类，五味子甲素为其主要有效成分之一，可吸收UV光，在硅胶GF254薄层板
苯酚法提取酵母RNA实验原理和操作步骤
（一）原理细胞内大部分RNA 均与蛋白质结合在一起，以核蛋白的形式存在。因此，提取RNA时要把RNA与蛋白质分离并除去。将细胞置于含有十二烷基磺酸钠（Sodium dodecyl sulfate,SDS）的缓冲液中，加等体积水饱和酚，通过剧裂振荡，然后离心形成上层水相和下层酚相。核酸溶于
免疫沉淀实验原理、仪器试剂和操作步骤
（一）原理免疫沉淀是利用抗原抗体特异性反应纯化富集目的蛋白的一种方法。抗体与细胞裂解液或表达上清中相应的蛋白结合后，再与蛋白 A／G（Protein A／G）或二抗偶联的agaose或Sepharose珠子孵育，通过离心得到珠子－蛋白A／G或二抗－抗体－目的蛋白复合物，沉淀经洗涤后，重悬于电泳上
植物总RNA的提取实验原理和操作步骤
一、实验目的通过本实验学习从植物组织中提取RNA的方法二、实验原理RNA是一类极易降解的分子，要得到完整的RNA，必须最大限度地抑制提取过程中内源性及外源性核糖核酸酶对RNA的降解。高浓度强变性剂异硫氰酸胍，可溶解蛋白质，破坏细胞结构，使核蛋白与核酸分离，失活RNA酶，所以RNA从细胞中释放出来时不
重组DNA分子的转化实验原理和实验步骤（一）
1实验原理DNA重组分子在体外构建完成后，必须导入特定的受体细胞，使之无性繁殖并高效表达外源基因或直接改变其遗传性状，这个导入过程及操作统称为重组DNA分子的转化。对于不同的受体细胞，往往采取不同的转化战略。1.1 DNA重组分子的常用转化方法1.1.1 Ca 2 诱导转化1970年Mandel和H
重组DNA分子的转化实验原理和实验步骤（二）
1.1.4接合转化接合（Conjugation）是指通过细菌细胞之间的直接接触导致DNA从一个细胞转移至另一个细胞的过程。这个过程是由结合型质粒完成的，它通常具有促进供体细胞与受体细胞有效接触的接合功能以及诱导DNA分子传递的转移功能，两者均由接合型质粒上的有关基因编码。在DNA重组中常用的绝大多数
cDNA/AFLP－Protocol
Preparation of Para-magnetic beads from Promega cat#Z5482:a) suspend magnetic particles in bottle - transfer 200 ul (200 ug) of beads per sampleof RNA
亲和标记的定义和原理
亲和标记(affinity labeling)：指对酶的活性部位、受体的结合位点进行特异标记的方法。试剂A-X的A基团和X基团可分别与不同的位点进行结合，从而将两种物质交联在一起。