斑马鱼基因敲除是怎么做的
一、基因敲除的设计方案 1.1 基因的基本信息 确认斑马鱼基因的基本信息，包括名称ID号等，一般会在NCBI等查询。 1.2 分析基因结构、氨基酸序列等做生物学信息的分析 1.3分析蛋白质的保守结构功能域 通过综合考虑，设计最佳的KO靶点。 1.4 分析并设计CRISPR，分析其效率及脱靶的情况 一般使用CCTOP，少数物种如没有可找其它专业网站。 二、CRISPR活性验证 2.1 分析并确认基因组序列 设计Genotyping引物，确认实际基因组序列与理论匹配情况，如CRISPR靶点验证与理论序列存在出入，需回到1.4重做。 该步骤还需要确认引物扩增条件，以备后用，如不能正常扩增需要重新设计，并且不能进行下一步操作。 2.2 合成sgRNA 使用Thermo转录试剂盒转录，完成后需测定浓度（不得低于400 ng/μl） 和OD......阅读全文
基因敲除技术的理论基础和应用
基因敲除就是通过同源重组将外源基因定点整合入靶细胞基因组上某一确定的位点，以达到定点修饰改造染色体上某一基因的目的的一种技术。它克服了随机整合的盲目性和偶然性，是一种理想的修饰、改造生物遗传物质的方法。这项技术的诞生可以说是分子生物学技术上继转基因技术后的又一革命。尤其是条件性、诱导性基因打靶系统的
RNAi——双链RNA引起的基因敲除（1）
1995年，康奈尔大学的Su Guo博士用反义RNA阻断线虫基因表达的试验中发现，反义和正义RNA都阻断了基因的表达，他们对这个结果百思不得其解。直到1998年， Andrew Fire的研究证明，在正义RNA也阻断了基因表达的试验中，真正起作用的是双链RNA[1]。这些双链RNA是体外
中科院在斑马鱼中构建出一种肠道炎症模型
中科院广州生物医药与健康研究院裴端卿和舒晓东团队利用斑马鱼突变体模拟了炎症性肠病的部分表型，结合体外细胞3D培养结果解释了其发病机制，并且在斑马鱼中构建出一种肠道炎症模型。相关成果日前在线发表于《自然—通讯》杂志。 科研人员利用基因编辑技术，获得了两种pik3c3突变品系。通过组织学、分子生物学
提升斑马鱼“借腹生子”成功率，中国学者成果获赞
原文地址：http://news.sciencenet.cn/htmlnews/2024/1/516787.shtm日前，国际斑马鱼研究领域领袖科学家、美国宾夕法尼亚大学教授Mary Mullins在《中国科学：生命科学》上发表题为“为斑马鱼生殖细胞诱导鸡尾酒干杯！”的论文，盛赞中国科学家的一项研究
斑马鱼实验显示太空性爱和生育可以实现但不安全
北京时间1月20日消息，加拿大圣文森特山大学科学家的新研究认为，太空性爱和生育肯定是可以实现的，但并不推荐这样做，这些行为在地球上实施才是最安全的。根据他们在斑马鱼身上实施的一项实验表明，太空旅行可能会伤害腹中的胎儿。 加拿大圣文森特山大学生物学家塔玛拉·弗朗兹·奥顿纳尔带领研究团队实施了
研究人员在斑马鱼中构建出一种肠道炎症模型
国际学术期刊Nature Communications（《自然-通讯》）在线发表中国科学院广州生物医药与健康研究院裴端卿和舒晓东研究团队关于斑马鱼研究的最新成果“Deficiency in class III PI3-kinase confers postnatal lethality with
蠕虫/胚胎流式分选系统斑马鱼体内药物自动化高通量...
蠕虫/胚胎流式分选系统-斑马鱼体内药物自动化高通量筛选仪器的发展和验证得益于基因组学、组合化学和高通量筛选技术的发展，利用小分子靶位进行药物筛选研究，取得了长足的进步。但这种药物筛选的方法，成功率只有不足3%，而且可以研究的已知靶位点十分有限。因此，寻找更好的药物模型进行药物的检测和筛选是迫切需要解
利用斑马鱼模型首次揭示干扰素λ受体突变导致临床遗...
利用斑马鱼模型首次揭示干扰素λ受体突变导致临床遗传性耳聋2月16日（正月初一），国际医学遗传学期刊 Journal of Medical Genetics 在线发表了解放军总医院的科研成果“Mutation of IFNLR1, an interferon lambda receptor 1,
通过流式细胞仪研究斑马鱼胚胎中细胞周期分析
[精华提要]结合绿色荧光蛋白表达的细胞周期分析广泛的用于研究绿色荧光蛋白标记的细胞的细胞周期分布。这个方案是一种用绿色荧光蛋白标记的斑马鱼胚胎来分析细胞周期的方法。材料与试剂1. PBS（Invitrogen公司14040）2. 胎牛血清3. 乙醇4.
快速便宜的CRISPR/Cas9突变体筛选方法
新的基因组编辑工具——如ZFNs、TALENs以及最近的CRISPR/Cas9系统，已经大大提高了在不同动物模型中敲除基因的能力，包括斑马鱼。然而，对数量庞大的动物进行筛选，所需的时间和成本，仍然是一个瓶颈。 最近，意大利多恩动物研究所（Stazione zoologica Anton Doh
科学家发现“斑马线”基因
每个人都想知道斑马的条纹是怎么来的，但是在实验室中对这种动物进行研究却非常困难。如今，通过对一种在背上生有明暗条纹的小鼠进行研究，科学家已经发现了关于动物这种与众不同的黑白模式的线索。 美国西雅图市华盛顿大学进化发育学家Larissa Patterson表示：“对于由来已久的‘哺乳动物如何获得
水生所揭示调控抗病毒天然免疫应答的“油门”和“刹车”机制
鱼类病毒病对水产养殖造成经济损失。阐明鱼类抗病毒免疫反应的调控机制，筛选并鉴定调控鱼类抗病毒免疫反应的相关基因，可为鱼类抗病新品种的培育提供获选分子靶标。 抗病毒天然免疫应答是机体抵御病毒入侵的第一道防线。当RNA病毒侵染宿主后，位于线粒体中的关键接头蛋白MAVS被上游传导的信号激活，发生多聚
水生所揭示调控抗病毒天然免疫应答的“油门”和“刹车”机制
鱼类病毒病对水产养殖造成经济损失。阐明鱼类抗病毒免疫反应的调控机制，筛选并鉴定调控鱼类抗病毒免疫反应的相关基因，可为鱼类抗病新品种的培育提供获选分子靶标。抗病毒天然免疫应答是机体抵御病毒入侵的第一道防线。当RNA病毒侵染宿主后，位于线粒体中的关键接头蛋白MAVS被上游传导的信号激活，发生多聚化，介导
美国科学家研究表明：鱼儿也会失眠
众所周知鱼类没有眼皮，但是它们却能睡觉。近日，科学家们通过研究10月15日对外界称，有些鱼类也和人类一样，它们也会饱受失眠的困扰。 据美联社10月15日报道，美国加利福尼亚科学家研究睡眠障碍不仅仅只困扰人类，鱼类中的斑马鱼（一种水族馆用来当宠物饲养的普通鱼类）由于突变基因，也和人类一样会受到
水生所——跨亚科鱼类基因编辑配子“借腹生殖”研究获进展
精原干细胞（Spermatogonial stem cells，SSCs）是成体雄性性腺中具有自我更新和分化潜能的一类生殖干细胞。利用精原干细胞移植（Spermatogonial stem cell transplantation, SSCT）技术，有可能实现跨个体甚至是跨物种的“借腹生殖”，也
动物所发现血管微环境调控造血干细胞发育的新机制
战国时期，“孟母三迁”成就一代思想家孟子的典故可谓是家喻户晓，这个故事向人们展示了环境因素的重要性。在生物体内，微环境同样是造血干细胞多步骤、多阶段发育过程中不可或缺的因素。脊椎动物造血干细胞产生于主动脉-性腺-中肾区，随后迁移到胎肝（小鼠和人）或尾部造血组织（斑马鱼）进行扩增，进而迁移至胸腺向
癌基因敲除可完全抑制肺癌发生
肺癌是所有肿瘤病症中致死率最高的恶魔。日前，从中科院昆明动物研究所传来了好消息，该所肿瘤干细胞生物学学科组已成功揭示癌基因维持肺癌的发生机制。该成果已在线发表于国际期刊《治疗诊断学》。据介绍，HUWE1基因是一种泛素化连接酶，它可通过调节底物的稳定性，控制着细胞内大量与肿瘤发生密切相关的生物学过程，
癌基因敲除可完全抑制肺癌发生
科技日报讯 肺癌是所有肿瘤病症中致死率最高的恶魔。日前，从中科院昆明动物研究所传来了好消息，该所肿瘤干细胞生物学学科组已成功揭示癌基因维持肺癌的发生机制。该成果已在线发表于国际期刊《治疗诊断学》。 据介绍，HUWE1基因是一种泛素化连接酶，它可通过调节底物的稳定性，控制着细胞内大量与肿瘤发
基因敲除新技术助力疾病研究
是什么基因导致了乳腺癌形成？是什么脑细胞突变导致了阿尔茨海默氏症发病？为了寻找新的治疗方法，科学家们必须要了解细胞水平上的疾病触发机制。在转基因小鼠上开展实验成为了基础医学研究一个不可或缺的部分。现在，科学家们开发了一种新方法，可以帮助实验室用较少的实验动物开展他们的研究。 科学家们利用转基因
癌基因敲除可完全抑制肺癌发生
肺癌是所有肿瘤病症中致死率最高的恶魔。日前，从中科院昆明动物研究所传来了好消息，该所肿瘤干细胞生物学学科组已成功揭示癌基因维持肺癌的发生机制。该成果已在线发表于国际期刊《治疗诊断学》。 据介绍，HUWE1基因是一种泛素化连接酶，它可通过调节底物的稳定性，控制着细胞内大量与肿瘤发生密切相关的生物
动物所大鼠基因敲除工作取得突破
8月8日，Nature Biotechnology杂志在线发表了中国科学院动物研究所周琪研究员领导的生殖工程研究组的研究论文Simultaneous generation and germline transmission of multiple gene mutations in rat
测定线粒体基因表达怎么做
亲缘鉴定是否可以用线粒体？首先你要知道什么是线粒体，其次你要了解线粒体是怎么遗传的，应该初中就会讲。那么结论是线粒体用于母系。。。就是外孙女－妈妈－外婆－外婆的妈妈。只要来自同一个母亲就可以用。但是线粒体的检测目前没有一个标准，就是所选取的检测区域存在者争议，所以可以做为一个参考。
我国揭示硬骨鱼RLRs和NLRs受体信号上基因剪接和免疫功能
先天免疫是机体抵御病原微生物感染的第一道防线，它主要是通过在进化上高度保守的一系列模式识别受体来识别微生物表面保守的、而又在宿主中不存在的病原相关分子模式来发挥作用。RLRs受体和NLRs受体家族是脊椎动物两类重要的胞内模式识别受体。中国科学院水生生物研究所昌鸣先研究员学科组对硬骨鱼类的这两类模
WB结果中有Marker是怎么做到的
可能可以通过下面几个方法实现（仅供参考）：1. 使用预染 Marker，不过分子量不是特别准；2. 所使用的 Marker 条带与待测蛋白质带有相同的抗原表位，比如都带有 His 融合标签；3. 可以使用普通的 Marker 转膜使用 丽春红 等染色，然后在膜上标记出 Marker 各条带的位置。
western－blot转膜是怎么做的
蛋白免疫印迹( Western Blot) 是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF 膜上。目前主流方法是电转印法，分为湿式转印与半干转印。湿式转印是将胶块垂直方向夹在湿式转印槽内进行电转印。以E-Blotter湿转槽为例，一般使用垂直电泳槽的缓冲液槽体，将内部垂直电
科学家或发现鱼鳍向四肢进化关键基因
科学家在最新一期的《自然》杂志中报道称，有两个基因在鱼鳍的发育过程中起关键作用，但它们在动物的四肢中却没有出现，失去这两个基因或许是从鱼鳍进化到动物四肢的“关键步骤”。 加拿大渥太华大学玛丽-安德烈-艾金门科领导的团队进行了这项研究。她们从研究斑马鱼胚胎的发育入手，发现了两个关键基因
美发现鱼鳍向四肢进化的关键基因
美国研究人员在最新一期的《自然》杂志中报道称，他们发现，有两个基因在鱼鳍的发育过程中起关键作用，但它们在动物的四肢中却没有出现，失去这两个基因或许是从鱼鳍进化到动物四肢的“关键步骤”。 加拿大渥太华大学玛丽-安德烈-艾金门科领导的团队进行了这项研究。她们从研究斑马鱼胚胎的发
水生所揭示Smad蛋白介导BMP信号的调控机制
BMP蛋白是一类形态发生素(morphogen)，对胚胎早期发育的背腹轴向决定起着关键作用，其功能丧失将导致腹侧发育的严重缺陷。BMP信号由3类受体型Smad——Smad1、Smad5、Smad8 (Smad9)来介导。然而，这些受体型Smad是如何在胚胎发育早期进行精细调控，在整体水平上调
斑马鱼早期临床前筛选揭示:候选抗炎治疗剂TnP的安全性
斑马鱼毒理学临床前筛选除了具有形态学特征的优点外，与其他替代性试验相比，还具有保守生理和代谢功能。MS研究的挑战之一是了解髓鞘再生过程的缺点以及制定恢复髓鞘再生的策略。我们的研究小组开展了一项大型研究，证明TnP对于开发有效的药物控制MS神经炎症和预防脱髓鞘具有重要的特性。我们发现皮下TnP治疗（预
斑马鱼早期临床前筛选揭示:候选抗炎治疗剂TnP的安全性
斑马鱼毒理学临床前筛选除了具有形态学特征的优点外，与其他替代性试验相比，还具有保守生理和代谢功能。MS研究的挑战之一是了解髓鞘再生过程的缺点以及制定恢复髓鞘再生的策略。我们的研究小组开展了一项大型研究，证明TnP对于开发有效的药物控制MS神经炎症和预防脱髓鞘具有重要的特性。我们发现皮下TnP治疗（预