PCR临床应用特点及应用领域
一、PCR应用特点 1．操作简便目前PCR技术采用耐高温Taq DNA聚合酶，并且在有电脑控制的DNA扩增仪中进行，使操作大为简化，一次加入的酶即可满足反应全过程。DNA扩增仪能自动迅速升降温度，只需把反应所需的全部材料混匀，置入仪器内，反应便依所输入的程序进行。 2．省时应用TaqDNA聚合酶时，单核苷酸掺入速率较高，75～80℃时，每个酶分子每秒钟可完成 150个核苷酸的合成。PCR每一周期需数分钟，所以，一般常取用20～30个周期能使目的DNA达数到百万倍扩增的反应只要数小时即可完成。在基因分离、突变体构建、DNA测序等方面，PCR方法均较之常规法快速的多。例如，用常规方法建立cDNA库或染色体DNA库来分离基因，需花几个月，用PCR 方法只需1～2个月星期；用M13法构建突变体需1～2个月，而PCR法只用数天；PCR方法扩增的目的DNA片段可直接用作序列分析，较常用的通过克隆、培养扩增、纯化制备等步骤获得......阅读全文
PCR技术原理
PCR产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。一.假阴性，不出现扩增条带PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及活性④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有T
免疫PCR技术
（一）材料与方法1. 生物素标记特异性抗体的制备免疫球蛋白（如IgG、IgM）的Fc片段上有糖基存在，因而可用能与糖基结合的Biotin-hydrazide作生物素标记。（1） 将纯化的抗体（IgM或IgG， 0.1~1.0ml）在标记缓冲液（0.1Mol/L NaAc，pH值5.5， 0.1Mol
Silver:－Colony－PCR
Zymolyase Solution:Regular stock of zymolyase is 10 mg/ml diluted in water, mix by inverting, not all will go into solution (filter it) store aliquots
长距离PCR
在标准 PCR 反应条件下，PCR 扩增 DNA 片段的长度一般为 1~2 kb，这种扩增能力对许许多多常规的 DNA 分子操作技术要求来说是已经足够了（如 DNA 序列分析和基因突变等)，但是对于扩增某些大的完整的哺乳动物基因组基因，这种 PCR 扩增能力还是远未达到实验要求的。本实验来源「分子克
差异显示PCR
实验材料反转录酶热稳定 DNA 聚合酶锚定 3'-寡核苷酸引物随机 5'-寡核苷酸引物总 RNA带放射标记的 dATP试剂、试剂盒扩增缓冲液DD-PCR 反转录缓冲液DTTdNTP 贮存液胎盘 RNase 抑制剂测序胶上样缓冲液仪器、耗材琼脂糖凝胶电解质梯度测序胶屏蔽型枪头离心管正向
QRTPCR
Comparison of normalisation methodsThere is an ongoing debate what is the best way to normalise qPCR data. Reference genes are the most common method,
Standard－PCR－reaction
Steps for Standard PCR ReactionDesign primers. In general, primers should have the following properties:Tip: Primer3 is an excellent resource for choo
TAIL－PCR－Protocol
TAIL is a series of reactions that are intended to map where a T-DNA (transfer DNA) has inserted within the genome. The main components of the 3 react
PCR－clean－up
Following PCR, you often want to get rid of the PCR primers and Taq polymerase before the next step. This is necessary for sequencing PCR products or
Colony－PCR－Protocol
1. Pull out eight glycerol stock plates from the –80oC freezer and set on bench top to thaw. Be sure to remove the foil seal before leaving the plates
PCRSSCP
一. 样品的制备1. 设计引物。用Oliga6.0对目的基因进行分析，设定引物，引物长度18-21个碱基，扩增片段以200-300bp最为合适。2. PCR扩增并检测。根据不同的引物挑选适合的退火温度进行PCR扩增。扩增产物用2-2.5%的琼脂糖胶跑水平电泳检测，上样量3-5ul。PCR产物为10
PCR－from－Tissue
collect piece of tissue (e.g., pieces of a leaf or flower) in Eppendorf tube containing 40 ml 0.25 N NaOHput in boiling H2O for 30 sec (optimum may ne
PCR佐剂手册
A variety of PCR additives and enhancing agents have been used to increase the yield, specificity and consistency of PCR reactions. Whilst these addit
长距离PCR
· Long PCR (Church Lab)PCR conditioning for different templates, primer design, and moreLong PCR Reagents and Guidelines (Harusr/locald)Detail
其它PCR方法
· Standard PCR Protocol (Molecular Biology Techniques Manual)The followings are described in detailRecommended Reagent ConcentrationsRecommend
CORE－SAMPLE－PCR
A method to re-PCR unique bands from products of mixed sizeContentsINTRODUCTIONPROTOCOLCOMMENTSINTRODUCTIONThe products of a PCR reaction - especially
REVERSE－TRANSCRIPTION－PCR:
REVERSE TRANSCRIPTION PCR:RNA -> LOTS OF DNAContentsReverse Transcription ReactionPolymerase Chain ReactionReverse Transcription Reaction:This provide
RACE－PCR简介
近年来随着生物技术的不断发展，出现了许多克隆新基因的方法和手段，如图谱克隆技术、转座子标签技术、mRNA差异显示技术二基因组减法技术以及cDNA文库筛选技术等。但上述方法人多具有实验周期长、技术步骤烦琐且工作量大等特点。cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA
PCR技术综述
前言 一滴残留在裙子上的精液使得美国总统Bill Clinton不得不坦承他与白宫实习生有不正当的关系。因为他知道现在的生物科技就连一个精子也能被用来做为证据。这种将极微量的生物标本化为可供鉴定的现代技术正是PCR(Polymerase chain reaction)--聚合酶链式反应具有
PCR技术总结
PCR技术简史 PCR的最早设想 核酸研究已有100多年的历史，本世纪60年代末、70年代初人们致力于研究基因的体外分离技术，Korana于1971年最早提出核酸体外扩增的设想：“经过DNA变性，与合适的引物杂交，用DNA聚合酶延伸引物，并不断重复该过程便可克隆tRNA基因”。 PCR的实现 1
PCR使用技巧
基本PCR引物设计参数 引物设计的目的是在两个目标间取得平衡：扩增特异性和扩增效率。特异性是指发生错误引发的频率。特异性不好或劣等的引物会产生额外无关和不想要的PCR扩增子，在EB染色的琼脂糖凝胶上可见到；引物效率是指在每一PCR循环中一对引物扩增的产物与理论上成倍增长量的接近程度。 ①引物长度；
荧光PCR原理
1．荧光染料荧光基团通常各自拥有单一的光吸收峰。在光的刺激下，荧光基团吸收光的能量后通常以三种方式释放出能量：1) 光能 许多荧光基团吸收光能后仍旧以光能形式释放能量，并且发射光的峰值大于吸收峰。比如荧光染料Fam的光吸收峰为490nm，而发射峰为530nm。 2) 热能 某些荧光基团吸收光能后，能
PCR技术概论
聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点；能在一个试管内将所要研究 的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和判断；可从一
定量PCR技术
定量PCR（Polymerase Chain Reaction）技术有广义概念和狭义概念。广义概念的定量PCR技术是指以外参或内参为标准，通过对PCR终产物的分析或PCR过程的监测，进行PCR起始模板量的定量。 广义概念下的定量PCR技术可以分为五种类型：（1）外参法+终产物分析。所谓“外参法”
免疫PCR技术
（一）材料与方法1. 生物素标记特异性抗体的制备 免疫球蛋白（如IgG、IgM）的Fc片段上有糖基存在，因而可用能与糖基结合的Biotin-hydrazide作生物素标记。（1） 将纯化的抗体（IgM或IgG， 0.1~1.0ml）在标记缓冲液（0.1Mol/L NaAc，pH值5.5， 0.1M
3RACE－PCR
实验概要 This technique is used to obtain the 3'end of a cDNA, it requires some sequence information internal to the mRNA under study. The
Complete－PCR－Guide
In the polymerase chain reaction (PCR), a thermostable DNA polymerase amplifies DNA that is flanked by known sequences. The known sequences correspond
PCR基因扩增
实验概要PCR扩增目标DNA片段。实验原理多聚酶链式反应（polymerase chain reaction, PCR）基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性、退火、延伸三个基本反应步骤构成。 1. 模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃
Isolation－Of－PCR－Products
实验概要Rapid and efficient purification of PCR products from salts, primers, dNTPs, and other non-nucleic acid reagents.实验原理The ChargeSwitch® TechnologyT
PCR产物克隆
PCR克隆主要有TA克隆法, 限制性酶切与连接法，杂交法和近期开发出来的特异性重组法等。但因为TA克隆法操作最简单，快速和高效的原因，成为Taq聚合酶PCR产物的最佳克隆方法。TA克隆法由Invitrogen发明，并拥有全球TA Cloning商标的ZL权。TA克隆方法（Original TA Cl