应用PCR技术扩增Hbβ基因实验原理、仪器试剂和方法
PCR(Polymerase Chain Reaction )是一种在体外特异的扩增基因的技术。由Kary.Mullis发明,该技术大大推动了分子生物学的发展,被认为是分子生物学发展的里程碑。Kary.Mullis分享了1993年诺贝尔化学奖。复习细胞内DNA复制条件和过程。 一、目的 1:学习PCR技术的基本原理 2:掌握从全血中制备DNA的方法‘ 3:掌握应用PCR扩增Hbβ基因的基本操作 4:熟悉Hb基因结构 二、原理 1:PCR扩增的原理 聚合酶链反应—PCR是一种体外基因扩增技术,是在引物和四种脱氧核苷三磷酸存在下,利用DNA 聚合酶反复作用,使微量的特定片段得以大量扩增的反应过程。 PCR所需的条件:模板 引物:决定扩增产物的特异性 dNTPs Taq聚合酶 Mg2+ PCR反应过程 每三步为一个循环,每循环一次,使模板DNA拷贝数增加1倍,理论上讲,30个......阅读全文
应用PCR技术扩增Hbβ基因实验原理、仪器试剂和方法
PCR(Polymerase Chain Reaction )是一种在体外特异的扩增基因的技术。由Kary.Mullis发明,该技术大大推动了分子生物学的发展,被认为是分子生物学发展的里程碑。Kary.Mullis分享了1993年诺贝尔化学奖。复习细胞内DNA复制条件和过程。 一、目的 1:
应用PCR技术扩增Hbβ基因
复习细胞内DNA复制条件和过程。 一、目的 1:学习PCR技术的基本原理 2:掌握从全血中制备DNA的方法‘ 3:掌握应用PCR扩增Hbβ基因的基本操作 4:熟悉Hb基因结构 二、原理 1:PCR扩增的原理 聚合酶链反应—PCR是一种体外基因扩增技术,是在引物和四种脱氧核苷三磷酸存在下,利用DNA
PCR基因扩增原理、材料和方法
一、原理多聚酶链式反应(polymerase chain reaction , PCR)类似于DNA 的天然复制过程:经过变性、退火、延伸多次循环(图1 ) , DNA 扩增倍数可达2 n 倍。即Y = ( 1 + X ) n式中,Y 为DNA 扩增倍数;X 为扩增效率;n 为循环次数二、材料(1)
PCR基因扩增仪实验原理
技术应用实现快速高效均衡扩增检测由光开关阵列、自聚焦透镜和尾纤准直器及变增益微光O/E装置组成的MEMS有机整体,在以16位单片机为核心的电控装置管理下,能在毫秒级时间内完成多个标本快速均衡扫描检测,避免了机械扫描方式或CCD扫描方式引起的时间滞后或渐晕误差。实现标准样本的PCR热循环扩增及高通量实
基因扩增PCR应用的仪器和设备有哪些?
基因扩增PCR主要有冰箱、超净台、加样器、混匀器、天平等。加样器、天平除了要专用外,还应有定期校准。试剂分装应在超净台中进行,扩增反应混合液应使用分子生物学级的,试剂制备好后应有质检:一是否有污染、二是检测试剂的扩增效果。
基因的PCR扩增实验原理、实验材料和操作步骤
实验原理单链DNA在互补寡聚核苷酸片段的引导下,可以利用DNA聚合酶按5’→3’方向复制出互补DNA。这时单链DNA称为模板DNA,寡聚核苷酸片段称为引物(Primer),合成的互补DNA称为产物DNA。双链DNA分子经高温变性后成为两条单链DNA,它们都可作为单链模板DNA,在相应的引物引导下,用
基因扩增仪(PCR仪)技术原理
基因扩增仪(PCR仪)技术原理:标记有荧光素的Taqman探针与模板DNA混合后,完成高温变性,低温复性,适温延伸的热循环,并遵守聚合酶链反应规律,与模板DNA互补配对的Taqman探针被切断,荧光素游离于反应体系中,在特定光激发下发出荧光,随着循环次数的增加,被扩增的目的基因片段呈指数规律增长,通
基因扩增仪(PCR仪)技术原理
基因扩增仪(PCR仪)技术原理:标记有荧光素的Taqman探针与模板DNA混合后,完成高温变性,低温复性,适温延伸的热循环,并遵守聚合酶链反应规律,与模板DNA互补配对的Taqman探针被切断,荧光素游离于反应体系中,在特定光激发下发出荧光,随着循环次数的增加,被扩增的目的基因片段呈指数规律增长,
实验室PCR扩增仪的原理和应用
PCR:PCR(聚合酶链式反应)是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,低温(经常是60°C左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至DNA聚合酶最适反应温度(72°C左右),DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。PCR仪实际就是一个温控设
PCR基因扩增原理
基因扩增技术(PCR)聚合酶链反应(polymerase chain reaction简称PCR)又称无细胞分子克隆系统或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增法,是基因扩增技术的一次重大革新。可将极微量的靶DNA特异地扩增上百万倍,从而大大提高对DNA分子的分析和检测能力,能检测单分子DNA或对每1
PCR基因扩增实验
[实验目的]通过本实验学习PCR反应的基本原理与实验技术。[实验原理]多聚酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的原理类似于DNA的天然复制过程。在待扩增的DNA片段两侧和与其两侧互补的两个寡核苷酸引物,经变性、退火和延伸若干个循环后,DNA扩增2n倍。1.变性:加
PCR技术原理、实验步骤和应用
一、实验目的1.掌握聚合酶链式反应的原理。2. 掌握移液枪和PCR仪的基本操作技术。二、实验原理PCR技术,即聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)是由美国PE Cetus公司的Kary Mullis在1983年(1993年获诺贝尔化学奖)建立的。这项技术可在试
PCR技术原理、实验步骤和应用
一、实验目的1.掌握聚合酶链式反应的原理。2. 掌握移液枪和PCR仪的基本操作技术。二、实验原理PCR技术,即聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)是由美国PE Cetus公司的Kary Mullis在1983年(1993年获诺贝尔化学奖)建立的。这项技术
PCR技术原理、实验步骤和应用
一、实验目的1.掌握聚合酶链式反应的原理。2. 掌握移液枪和PCR仪的基本操作技术。二、实验原理PCR技术,即聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)是由美国PE Cetus公司的Kary Mullis在1983年(1993年获诺贝尔化学奖)建立的。这项技术可在试管
PCR技术原理、实验步骤和应用
一、实验目的1.掌握聚合酶链式反应的原理。2. 掌握移液枪和PCR仪的基本操作技术。二、实验原理PCR技术,即聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)是由美国PE Cetus公司的Kary Mullis在1983年(1993年获诺贝尔化学奖)建立的。这项技术可在
PCR基因扩增仪的原理和程序
PCR技术即基因扩增技术。 PCR基因扩增仪扩增DNA的原理是:先将含有所需扩增分析序列的靶DNA双链经热变性处理解开为两个寡聚核苷酸单链,然后加入一对根据已知DNA序列由人工合成的与所扩增的DNA两端邻近序列互补的寡聚核苷酸片段作为引物,即左右引物。此引物范围就在包括所欲扩增的DNA片
基因扩增技术原理和过程
PCR扩增DNA的原理是:先将含有所需扩增分析序列的靶DNA双链经热变性处理解开为两个寡聚核苷酸单链,然后加入一对根据已知DNA序列由人工合成的与所扩增的DNA两端邻近序列互补的寡聚核苷酸片段作为引物,即左右引物。此引物范围就在包括所欲扩增的DNA片段,一般需20-30个碱基对,过少则难保持与DNA
实验室仪器PCR扩增仪的工作原理
PCR基因扩增仪的工作原理: PCR反应一般设置20~40次循环,每一循环包括高温变性、低温退火、中温延伸三步反应。每一循环的产物作为下一个循环的模板。PCR的扩增效率很高,如果循环次数是30次,那么新生DNA片段理论上达到230拷贝(约为109个分子)。 PCR反应每个循环的三个基本反应步骤如下
肺细胞-PCR基因扩增原理及方法步骤
实验概要PCR扩增目标DNA片段。实验原理多聚酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性、退火、延伸三个基本反应步骤构成。1. 模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右
癌细胞-PCR基因扩增原理及方法步骤
实验概要PCR扩增目标DNA片段。实验原理多聚酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性、退火、延伸三个基本反应步骤构成。1. 模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右
PCR基因扩增及扩增产物的回收实验原理及过程
实验目的 为了获得大量的AKP基因,我们需要将目的基因通过PCR扩增基因剂量,方便下一步实验作基因重组。 我们需要注意PCR产物的准确性和产率。特别注意引物、复性温度、TaqE对准确性的影响和延伸时间(1000bp/min)、Mg2+浓度、循环数(小于等于30)对产率的影响。
什么是基因扩增?基因扩增的应用和技术优势
又称无细胞分子克隆系统或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增法,是基因扩增技术的一次重大革新。可将极微量的靶DNA特异地扩增上百万倍,从而大大提高对DNA分子的分析和检测能力,能检测单分子DNA或对每10万个细胞中仅含1个靶DNA分子的样品,因而此方法立即在分子生物学、微生物学、医学及遗传学等多领域
PCR扩增DNA(PCR-Amplify-DNA)实验原理、材料和操作步骤
【实验原理】聚合酶链反应(polymerasechainreaction,PCR)是一种体外 DNA扩增技术,1985年由Mullis等人创立。该技术能在几小时的实验操作中,将人为选定的一段DNA扩增几百万倍,具有灵敏度高、特异性强、操作简便和应用广泛等优点,目前已成为分子生物学及基因工程中极为
pcr扩增的原理和步骤
实验方法原理①模板DNA的变性:模板DNA经加热至94℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应做准备;②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③
pcr扩增的原理和步骤
实验方法原理①模板DNA的变性:模板DNA经加热至94℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应做准备;②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③
pcr扩增的原理和步骤
实验方法原理①模板DNA的变性:模板DNA经加热至94℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应做准备;②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③
pcr扩增的原理和步骤
实验方法原理①模板DNA的变性:模板DNA经加热至94℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应做准备;②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③
PCR扩增的原理和步骤
PCR技术的基本原理 类似于DNA的 天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR是一种体外DNA 扩增技术,是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下,依赖于DNA聚合酶的酶促合反应,将待扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经“高温变性——低温退火——引物PCR
pcr扩增的原理和步骤
实验方法原理①模板DNA的变性:模板DNA经加热至94℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应做准备;②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③
PCR扩增的原理和步骤
PCR技术的基本原理 类似于DNA的 天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR是一种体外DNA 扩增技术,是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下,依赖于DNA聚合酶的酶促合反应,将待扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经“高温变性——低温退火——引物PCR