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一、尼龙毛柱的制备1.取直接3D，长度约10cm的尼龙毛，用0.2mol/L HCl浸泡处理过夜。用双蒸水洗净HCl，置37℃烘干备用。2.称取50mg尼龙毛，均匀分散，置Hanks液中浸泡。取1ml注射器，出口接塑料管并夹住。将尼龙毛均匀填塞入注射器中，排净空气，柱高约 5～6cm。此柱可分离约2×107细胞。将柱置－20℃可保存2～3个月。二、分离细胞1.取分离的单个核细胞，用细胞培养液将细胞配成2×107/0.5ml。2.融化尼龙毛柱，以每分钟5～7滴的速度放出Hanks液，并用5ml预温至37℃的细胞培养液洗涤尼龙毛柱。小心将细胞悬液加入尼龙毛柱中，待细胞悬液全部进入尼龙毛柱后，立即加0.2ml细胞培养液，夹住塑料管。3.在37℃ 5％ CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中静置1小时。用5ml预温至37℃的细胞培养液洗脱细胞。洗脱液中含有纯的T细胞。再用5ml预温至37℃的细胞培养液洗涤尼龙毛柱，洗净不粘附的细胞。4.加入0......阅读全文
一、尼龙毛柱的制备1.取直接3D，长度约10cm的尼龙毛，用0.2mol/L HCl浸泡处理过夜。用双蒸水洗净HCl，置37℃烘干备用。2.称取50mg尼龙毛，均匀分散，置Hanks液中浸泡。取1ml注射器，出口接塑料管并夹住。将尼龙毛均匀填塞入注射器中，排净空气，柱高约 5～6cm。此柱可分离约2
用尼龙毛法分离B细胞1）尼龙毛柱的制备1．取直接3D，长度约250px的尼龙毛，用0.2mol/L HCl浸泡处理过夜。用双蒸水洗净HCl，置37℃烘干备用。2．称取50mg尼龙毛，均匀分散，置Hanks液中浸泡。取1ml注射器，出口接塑料管并夹住。将尼龙毛均匀填塞入注射器中，排净空气，柱高约5～1
1）用玫瑰花结形成试验分离E＋细胞：1．制备AET-绵羊红细胞：1）在刻度离心管中，用无菌的含5％小牛血清的Hanks液洗涤绵羊红细胞3次，每次离心500×g 10分钟。2）吸净上清液，测量红细胞比容。轻击试管分散红细胞，加入4倍红细胞比容量、新鲜制备的AET溶液，混匀。室温中反应30分钟。3）用无
从单个核细胞中分离T细胞一、用玫瑰花结形成试验分离E＋细胞1．制备AET-绵羊红细胞1）在刻度离心管中，用无菌的含5％小牛血清的Hanks液洗涤绵羊红细胞3次，每次离心500×g 10分钟。2）吸净上清液，测量红细胞比容。轻击试管分散红细胞，加入4倍红细胞比容量、新鲜制备的AET溶液，混匀。室温中反
血细胞分离技术大容量离心机采血 （一）材料与试剂1．抗凝剂（1）肝素：肝素是含硫酸基的粘多糖，常用其钠盐或钾盐，它能阻止凝血酶原转化为凝血酶，进而抑制纤维蛋白原形成纤维蛋白，从而阻止血液凝固。常
（二）操作方法1．取抗凝血，自然沉降，如是马属动物的血液，可直接直立试管架上，让其自然沉降1h，取上层血浆。如是牛、羊血液，由于其血沉速度非常慢，可加等量3％明胶液，混匀后让其自然沉降，1h后取上层血浆。2．2 000r/min离心10min，弃上清。3．沉淀用Hank’s液混悬后，再2 000r/
（一）原理 混合单个核细胞悬液在通过尼龙毛柱时，B细胞、浆细胞、单核细胞和一些辅助细胞被选择性粘附于尼龙毛上，而多数T细胞则通过尼龙毛柱，这是获得富含T细胞群的有效方法。（二）材料及试剂1．尼龙毛（Femwall Laboratories,LP－1 Leukoqak leukocyte
（一）原理混合单个核细胞悬液在通过尼龙毛柱时，B细胞、浆细胞、单核细胞和一些辅助细胞被选择性粘附于尼龙毛上，而多数T细胞则通过尼龙毛柱，这是获得富含T细胞群的有效方法。 （二）材料及试剂 1．尼龙毛（Femwall Laboratories,LP－1 Leukoqak leukocyte F
采血 （一）材料与试剂 1．抗凝剂 （1）肝素：肝素是含硫酸基的粘多糖，常用其钠盐或钾盐，它能阻止凝血酶原转化为凝血酶，进而抑制纤维蛋白原形成纤维蛋白，从而阻止血液凝固。常用的肝素溶液浓度为1 000U/ml，市售肝素多为100U~126U／mg。 （2）乙二胺四乙酸（EDTA）：是
(一)材料与试剂 1．抗凝剂 (1)肝素：肝素是含硫酸基的粘多糖，常用其钠盐或钾盐，它能阻止凝血酶原转化为凝血酶，进而抑制纤维蛋白原形成纤维蛋白，从而阻止血液凝固。常用的肝素溶液浓度为1 000U/ml，市售肝素多为100U~126U／mg。 (2)乙二胺四乙酸(EDTA)：是
（一）原理 混合单个核细胞悬液在通过尼龙毛柱时，B细胞、浆细胞、单核细胞和一些辅助细胞被选择性粘附于尼龙毛上，而多数T细胞则通过尼龙毛柱，是获得富含T细胞群的有效方法。（二）材料及试剂1．尼龙毛（Femwall Laboratories,LP－1 Leukoqak leukocyte Filters
(2)泛影葡胺—右旋糖酐(dextran)液 34％泛影葡胺液10份 60％右旋糖酐液12.5份混合，即为比重1.07～1.09的分层液。分装于棕色瓶中，4℃冰箱保存备用。2．3％的明胶液称取明胶3g，溶于0.9％的灭菌生理盐水，终体积100ml，
（一）原理 混合单个核细胞悬液在通过尼龙毛柱时，B细胞、浆细胞、单核细胞和一些辅助细胞被选择性粘附于尼龙毛上，而多数T细胞则通过尼龙毛柱，这是获得富含T细胞群的有效方法。（二）材料及试剂1．尼龙毛（ Nylon Wool Fiber）。2．烧杯、铝箔、漏斗、一次性手套等。3．装填
实验概要淋巴细胞的分离方法是免疫学研究的重要技术，稳定、高效地分离出高纯度且活性不受影响的T淋巴细胞是进行一系列免疫学研究的前提与基础，进而能够在体外对机体各种免疫细胞分别作鉴定、计数或功能测定。实验原理混合的单核细胞悬液在通过尼龙毛柱时，B细胞、浆细胞、单核细胞和一些辅助细胞被选择性粘附于尼龙毛上
从单个核细胞中分离T细胞1）用玫瑰花结形成试验分离E＋细胞1．制备AET-绵羊红细胞1）在刻度离心管中，用无菌的含5％小牛血清的Hanks液洗涤绵羊红细胞3次，每次离心500×g 10分钟。2）吸净上清液，测量红细胞比容。轻击试管分散红细胞，加入4倍红细胞比容量、新鲜制备的AET溶液，混匀。室温中反
实验步骤基 本 方案 离 人 肠 黏 膜 单 个 核 细 胞材 料新鲜的大肠或小肠样本，外科手术后分离获得H B S S ，不含钙和镁， p H 7. 2D T T - H B S S 溶液： 75m g D T T 溶于 50 ml H B S S ，新鲜配制E D T A - H B S S 溶
哮喘致敏小鼠模型的建立及脾脏 CD4+T细胞的分离Establishment of sensitized asthma model in mice and CD4+T lymphocyte
第一节 免疫细胞的分离 一、外周血单个核细胞的分离 将2份6%聚蔗糖蒸馏水溶液与1份34%泛影葡胺生理盐水溶液混合，其比重为1.077±0.002，可作为常规的淋巴细胞分离液，即Ficoll分离液。 主要用于分离外周血中单个核细胞，是一种单次密度梯度离心分离法，其分布由上到下依次为：稀释
1.4.2 肺组织标本留取 打开未经支气管肺泡灌洗的各组各 6 只小鼠胸腔 ,观察肺脏的大体改变 ,剪取部分肺组织 ,经10 %甲醛固定后切片 ,行 HE染色。1.5 CD4+T细胞
概述临床上的各种类型的免疫缺陷、自身免疫病以及肿瘤等疾病均可出现淋巴细胞或淋巴亚群的数量和功能的变化。因此用体外方法对机体具有免疫反应的外周血淋巴细胞及其亚群的数目或比例以及它们所显示的功能的强弱进行检测，是判断机体细胞免疫水平的一种重要手段。这对于临床认识疾病、探讨其发病机制、观察病情变化、判断预