ELISA(EIA)酶结合物的制备

免疫酶技术(immunoenzymatic technique)又称酶免疫测定法(enzyme immunoaay,EIA),是继免疫荧光技术和放射免疫技术之后发展起来的又一种免疫标记技术。它是把抗原抗体的特异性反应和酶的高效催化作用相结合而建立的。该技术通过化学方法将酶与抗体或抗抗体结合,形成酶标记物,这些酶标记物仍保持免疫学活性和酶的活性,然后将它与相应的抗体或抗原起反应,形成酶标记复合物,结合在免疫复合物上的酶,在遇到相应的底物时,则催化底物产生水解、氧化或还原等反应,而生成可溶性或不溶性有色物质。然后根据显色的深浅来反映待测样品中抗原或抗体的含量,如生成的有色物质为可溶性,则可用肉眼比色或酶标测定仪测定光密度值(OD)定性或定量;如生成的有色物质为不溶性沉淀物,同时又是电子致密物质,则可用光学显微镜或电子显微镜识别和定位。因此,免疫酶技术是一项定位、定性和定量(敏感度可达每毫升ng~pg水平)的综合技术。常用的......阅读全文

大鼠凝血酶抗凝血酶复合物(TAT)ELISA检测法

大鼠凝血酶-抗凝血酶复合物(TAT)ELISA试剂盒 (用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内)原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 TAT 单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的TAT与单抗结合,加入生物素化的抗大鼠TAT,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的S

酶免疫测定的概述

  酶免疫测定(enzyme immunoassay,EIA),是将酶催化作用的高效性与抗原抗体反应的特异性相结合的一种微量分析技术。酶标记抗原抗体后形成的酶标记物,既保留抗原或抗体的免疫活性,又保留酶的催化活性。当酶标记物与待测样品中相应的抗原或抗体相互作用时,可形成酶标记抗原抗体复合物。利用复合

酶标抗体和酶抗酶复合物的应用于双抗体夹心法ELISA

该法多用于检测多价大分子抗原,但不能用于检测半抗原等小分子物质。 【试剂及配制】 (1) 包被液(pH 9.6 碳酸盐缓冲液) Na2CO3 0.16g NaHCO3 0.29g 蒸馏水加至 100ml (2)稀释液(pH 7.4 -Tween 20) KH2PO4 0.

酶联免疫测定技术(ELISA)的放大系统

酶免疫测定自20世纪70年代初创立以来,由于其具有特异、灵敏、简便、快速的特点,现已在生物医学研究领域及临床疾病的诊疗中得到了广泛的应用,相对于放射免疫测定(RIA)技术来说,EIA还有试剂半衰期长,对环境污染小,试验废物易于处理等优点,但测定敏感性一般较RIA低,于是,为提高EIA的测定敏感

泛素结合酶的结构组成

E2s家族成员都含有一个由150-200个氨基酸组成的高度保守的泛素结合结构域(UBC)。该结构域的分子量大约为14-16kDa,并且其中有35%的序列在不同的E2s成员中是保守的,它可以为泛素活化酶E1s,泛素连接酶E3s和活化的Ub或UBL提供结合位点。UBL是一种类泛素蛋白,如SUMO,ISG

泛素结合酶的作用原理

E2s家族成员都含有一个由150-200个氨基酸组成的高度保守的泛素结合结构域(UBC)。该结构域的分子量大约为14-16kDa,并且其中有35%的序列在不同的E2s成员中是保守的,它可以为泛素活化酶E1s,泛素连接酶E3s和活化的Ub或UBL提供结合位点。UBL是一种类泛素蛋白,如SUMO,ISG

泛素结合酶的作用原理

泛素结合酶E2的UBC结构域中有一个保守的半胱氨酸残基,这个Cys残基作为活性位点与泛素分子(Ub)形成硫酯键。泛素活化酶E1将泛素转移到E2的半胱氨酸活性位点上,形成Ub-E2复合体,之后或是直接结合底物将泛素连接在靶蛋白上,或是与泛素连接酶E3相互作用,将泛素转移到靶蛋白上 [3]  。在泛素化

泛素结合酶的结构组成

E2s家族成员都含有一个由150-200个氨基酸组成的高度保守的泛素结合结构域(UBC)。该结构域的分子量大约为14-16kDa,并且其中有35%的序列在不同的E2s成员中是保守的,它可以为泛素活化酶E1s,泛素连接酶E3s和活化的Ub或UBL提供结合位点。UBL是一种类泛素蛋白,如SUMO,ISG

可以DNA结合的酶DNA连接酶

DNA连接酶:是能够使用来自ATP或NAD的化学能将先前切割或断裂的DNA链聚集在一起的酶。连接酶在DNA滞后链复制中特别重要,因为它们将冈崎碎片组合成DNA链。连接酶在DNA修复和基因重组中也发挥重要作用。

酶联免疫测定的原则

  EIA本身是以酶[辣根过氧化物酶(HRP)、 碱性磷酸酶(AP)等]作标记物的,因此,EIA的测定放大始终是围绕着 标记酶来作文章的,不外乎三种可能的方式:①增加标记酶的量;②非显色底物的应用;③附加一个受标记酶催化的反应系统。  一、增加标记酶的量 通过生物素/亲合素—酶或酶/抗酶复合物的间接

微生物学检查:麻疹病毒

(1)标本采集:在病人急性期内采集标本,如鼻咽拭子、鼻咽吸取物、痰等。(2)直接检测病毒:感染细胞产生细胞融合和多核巨细胞,胞质和胞核内有嗜酸性包涵体。电镜或免疫电镜检查病毒颗粒。免疫荧光技术及酶免疫技术,如EIA进行病毒抗原检测。PCR技术或核酸探针进行鉴定。(3)病毒分离与鉴定接种传代细胞系He

小鼠凝血酶抗凝血酶复合物(TAT)ELISA试剂盒

小鼠凝血酶-抗凝血酶复合物(TAT)ELISA试剂盒  (用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内)   原理 本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗小鼠 TAT 单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的 TAT与单抗结合,加入生物素化的抗小鼠TAT,形成免疫复合物连接在板上,

人凝血酶抗凝血酶复合物(TAT)ELISA试剂盒

人凝血酶-抗凝血酶复合物(TAT)ELISA试剂盒 (用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内) 原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗人 TAT 单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的 TAT与单抗结合,加入生物素化的抗人TAT,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的St

小鼠M胆碱能受体结合力(MCBC)酶联免疫分析(ELISA)

小鼠M-胆碱能受体结合力(MCBC)酶联免疫分析(ELISA) 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用       目的:本试剂盒用于测定小鼠血清,血浆及相关液体样本中M-胆碱能受体结合力(MCBC)含量。 实验原理:     本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠M-胆碱能受体结合力(MC

人结合珠蛋白/触珠蛋白前体(preHpt)酶联免疫分析(ELISA)

人结合珠蛋白/触珠蛋白前体(pre-Hpt/HAP)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用       目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中结合珠蛋白/触珠蛋白前体(pre-Hpt/HAP)的含量。实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人结合珠蛋白/触珠蛋白

犬超氧化物歧化酶ELISA操作方法

  犬超氧化物歧化酶(SOD)酶联免疫分析(ELISA)   试剂盒使用说明书   本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定犬血清,血浆及相关   液体样本中超氧化物歧化酶(SOD)的活性。   实验原理:   本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中犬超氧化物歧化酶(SOD)水平。用纯化的抗

犬超氧化物歧化酶ELISA操作方法

  犬超氧化物歧化酶(SOD)酶联免疫分析(ELISA)   试剂盒使用说明书   本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定犬血清,血浆及相关   液体样本中超氧化物歧化酶(SOD)的活性。   实验原理:   本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中犬超氧化物歧化酶(SOD)水平。用纯化的抗

大鼠超氧化物歧化酶(SOD)ELISA检测法

大鼠超氧化物歧化酶(SOD)ELISA试剂盒 (用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内)原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 SOD 单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的 SOD与单抗结合,加入生物素化的抗大鼠SOD,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的Stre

酶免疫分析及酶联免疫吸附实验

这篇简短的通讯回顾了了EIA和ELISA的历史背景,这两种分析方法是由瑞典斯德哥尔摩大学的Perlmann, Engvall教授以及荷兰的Schuurs和vanWeemen教授独立而同时创造完成的。 当今,在全球医学实验室里广泛应用的全自动分析仪每日可以检测大量的病人标本,其中很多仪器都是运用酶标记

免疫分析技术原理和意义

1.基本原理      常用于农药残留分析的免疫分析的技术有放射免疫分析(radioimmunoassay,RA)和酶免疫分析(enzyme immunoassay,EA)两种。RIA创立于20世纪60年代,EIA是继RIA之后,于20世纪70年代发展起来的一项新的免疫学技术。RIA与EIA技术一样

农药残留检测技术免疫分析技术

  随着农药品种和用量的不断增加,环境污染越来越严重,食品安全受到威胁。由于待测样品量迅速增加,因此需要对农药残留进行快速检测。采用传统的色谱分析方法显然无法满足这种需求,而免疫分析技术则为农药残留的快速检测提供了可能。  1.基本原理   常用于农药残留分析的免疫分析的技术有放射免疫分析(radi

EIA:全球石油供需缺口缩小

  美国能源情报署(EIA)12月11日称,当前全球石油市场的供求局面有所放松。这是因为石油输出国组织(欧佩克)原油产量较高,非欧佩克国家产量也有所提高,尤其是美国页岩油田产量飙升。目前全球石油供应与需求的缺口大约为30万桶/天,低于上年同期的110万桶/天。这意味着库存石油消耗将减少,库存将因此保

大鼠IgM定量EIA检测法

大鼠IgM定量EIA试剂盒使用说明原理本实验采用双抗体夹心 ELISA法。用抗大鼠IgM单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的 IgM与单抗结合,加入酶标抗体,形成免疫复合物连接在板上,加入酶底物TMB,出现蓝色,加终止液硫酸,颜色变黄,在450nm处测OD值,IgM浓度与OD值成正比,可通过绘制标准

大鼠IgG定量EIA检测法

大鼠IgG定量EIA试剂盒使用说明 原理本实验采用双抗体夹心 ELISA法。用抗大鼠IgG单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的 IgG与单抗结合,加入酶标抗体,形成免疫复合物连接在板上,加入酶底物TMB,出现蓝色,加终止液硫酸,颜色变黄,在450nm处测OD值,IgG浓度与OD值成正比,可通过绘制标

ELISA技术综述

  ELISA原理   ELISA利用抗原抗体之间专一性结合之特性,对标本进行检测;由于结合与固体承载物(一般为塑胶孔盘)上之抗原或抗体仍可具有免疫活性,因此设计 其结合 机制後,配合酵素显色反应,即可显示特定抗原或抗体是否存在,并可利用显色之深浅进行定量分析。根据待测样品与结合机制的不同,ELI

人超氧化物歧化酶(SOD)酶联免疫分析(ELISA)剂盒使...

人超氧化物歧化酶(SOD)酶联免疫分析(ELISA)剂盒使用说明本试剂仅供研究使用       目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中超氧化物歧化酶(SOD)的含量。实验原理:  本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人超氧化物歧化酶(SOD)水平。用纯化的总 SOD抗体包被微孔板,制成

elisa试剂盒原理与试剂盒成分

  elisa试剂盒试验原理:   试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。

ELISA检测筛选到的靶分子结合肽

【材料和试剂】 (1)酶标板,酶标仪 (2)湿盒 (3)吸水纸 (4)LB培养基 (5)PEG/NaCl (6)T (7)0.1M NaHCO3(pH 8.6) (8)HRP底物缓冲液 ABTS贮存液:在100ml 50mM的柠檬酸钠溶液(pH 4.0)中溶解22

细胞培养-+-ELISA的结合产物:ELISPOT技术

PriCells-细胞培养 + ELISA的结合产物:ELISPOT技术 ELISPOT(Enzyme-Linked Immunosorbent SPOT, 酶联免疫斑点法):是一种体外检测特异性抗体分泌细胞和细胞因子分泌细胞的固相酶联免疫斑点技术,是ELISA技术和细胞培养技术结合而发展的新型

中结合力酶标板

  酶标板经表面疏水键被动与白结合,适合作为分子量20D的大分子蛋白的固相载体,其蛋白结合能力为200-300 ng 1gG/cm2。由于该类酶标板所具有的仅与大分子结合的特性,适用于作为未纯化抗体或抗原的固相载体,可降低潜在的非特异性交又反应。该类板可以惰性蛋白或非离子去污剂作为封闭液