病原菌的分离鉴定及其疫苗的制备(2)
2 .病原菌的分离与培养分离病原菌的材料要求是具有典型患病症状的活的或刚死不久的患病生物,病原菌的分离方法如下。体表分离:先将病灶部位表面用 70% 酒精酒精棉球擦拭消毒或取病灶部分小片或 用经酒精灯灼烧的解剖刀烫烧消毒,再 用接种环刮取病灶深部组织或直接挑取部分深部患病组织,接种于普通肉汤培养基增菌或直接在普通琼脂平板上划线分离。内部组织器官:用 70 %酒精浸过的纱布覆盖体表或用酒精棉球擦拭,进行体表消毒,无菌打开病鱼的腹腔,以肝、肠、心脏等脏器为材料, 先将拟分离病原的部位表面用 70% 酒精棉球擦拭或用 经火焰上灼烧后的解剖刀烫烧,以杀死表面的杂菌,随即在烧灼部位刺一小孔,用灭菌的接种环(待冷 2 ~ 5 秒)伸向烧灼部小洞中,用手指将接种环轻轻旋转两次,借以达到取足材料的目的。左手持握普通琼脂平板,并靠近火焰,右手持取材后的接种环在琼脂平板上分区划线接种。划线时接种环面与平板表面成 30 ~ 40 ......阅读全文
病原菌的分离鉴定及其疫苗的制备(2)
2 .病原菌的分离与培养分离病原菌的材料要求是具有典型患病症状的活的或刚死不久的患病生物,病原菌的分离方法如下。体表分离:先将病灶部位表面用 70% 酒精酒精棉球擦拭消毒或取病灶部分小片或 用经酒精灯灼烧的解剖刀烫烧消毒,再 用接种环刮取病灶深部组织或直接挑取部分深部患病组织,接种于普通肉汤培养基增
病原菌的分离鉴定及其疫苗的制备(3)
(二)疫苗制备1 .病原菌的扩大培养与分离液体培养:按配方配制 2216E 液体培养基,将培养基用 三角烧瓶分装并盖上棉塞后置 于高压蒸汽锅内, 121 ℃ 灭菌 15 ~ 30min ,冷却后于超净工作台内加入 1ml 左右预先制备的病原菌菌液,盖上棉塞,用摇床于 28~ 30 ℃ 下震荡(约
病原菌的分离鉴定及其疫苗的制备(1)
一、实验目的熟悉水产细菌性病原的分离、培养、纯化与鉴定的基本方法,了解所分离细菌性病原的形态特征及培养特点,了解细菌性灭活疫苗制备的基本过程。二、实验材料患白内障病虎纹蛙(或其他患细菌性疾病的水产动物)、健康虎纹蛙、脑膜炎败血黄杆菌(虎纹蛙白内障病的病原)三、实验药品、用具2216E 琼脂平板、 2
植物病原菌的分离
一、实验原理植物患病组织内的真菌菌丝体,如果给予适宜的环境条件,除个别种类外,一般都能恢复生长和繁殖。植物病原菌的分离就是指通过人工培养,从染病植物组织中将病原真菌与其它杂菌相分开,并从寄主植物中分离出来,再将分离到的病原菌于适宜环境内纯化,这个过程总称植物病菌的分离培养。植物病原真菌的分离一般都是
亚细胞结构的分离与鉴定2
第三节 微粒体的分离细胞通过匀浆破碎时,细胞质膜碎成片段,这些膜片段的末端融合形成的直径小于100nm的小泡。来自不同细胞器(细胞核、线粒体、质膜、内质网等)的小泡有不同的特性,所以可以将这些小泡相互分离。由内膜系统衍生而来的小膜泡形成相似大小的膜泡异质性集合体,称微粒体(microsome)。分离
腺病毒载体疫苗的制备与分离
通常来说,开发一种新型疫苗需要经过数年的艰苦过程,包括完整的生产工艺确定。这样的模式没办法对一些爆发性的传染疾病做出快速响应,而且面对一些商业潜力比较小的区域性疾病或者是某些定制化疫苗也是力有不逮。 在病毒载体家族里面,腺病毒的应用非常广泛,它具有诱导抗体和T细胞组合反应的潜能。虽然人群中广泛存在的
可溶性抗原的制备及鉴定2
1、超速离心法 此法分离和纯化抗原的原理是利用各颗粒在梯度液中沉降速度的不同,使具有不同沉降速度的颗粒处于不同密度梯度层内,达到彼此分离的目的。常用的密度梯度介质有蔗糖、甘油、CsCl等。 用超速离心或梯度密度离心分离和纯化抗原时,除个别成分外,极难将某一抗原成分分离出来,故只用于少数大分子抗原的分
天然产物中多糖的分离、纯化与鉴定(2)
二、粗多糖的纯化粗多糖溶液加入Sevag试剂(氯仿:正丁醇=3:1混合摇匀)后,置恒温振荡器中震荡过夜,使蛋白质充分沉淀,离心(3000r/min)分离,去除蛋白质。然后浓缩,透析,加入4倍体积的乙醇沉淀多糖,将沉淀冻干。取样品0.1g溶于10ml 0.01mol/L Tris-HCL, PH=7.
蛋白质的表达、分离、纯化和鉴定(2)
二、氯霉素酰基转移酶重组蛋白的分离,纯化 1. NTA层析柱的准备:在层析柱中加入1mL NTA介质,并分别用8mL 去离子水,8mL上样缓冲液洗涤。 2. 重组蛋白的变性裂解:在冰浴中冻融菌体沉淀,加入5mL上样缓冲液, 用吸管抽吸重悬,超声波破裂菌体,用振荡器等轻
酶的分离纯化和纯度鉴定的实验方法及其原理
分离蛋白质混合物的各种方法主要是根据蛋白质在溶液中的以下性质:1)分子大小;2)溶解度;3)电荷;4)吸附性质;5)对其它分子的生物学亲和力等进行分离. 常见的分离提纯蛋白质的方法有:1、盐析与有机溶剂沉淀:在蛋白质溶液中加入大量中性盐,以破坏蛋白质的胶体性质,使蛋白质从溶液中沉淀析出,称为盐析.常
植物病原菌的分离的实验原理
植物患病组织内的真菌菌丝体,如果给予适宜的环境条件,除个别种类外,一般都能恢复生长和繁殖。植物病原菌的分离就是指通过人工培养,从染病植物组织中将病原真菌与其它杂菌相分开,并从寄主植物中分离出来,再将分离到的病原菌于适宜环境内纯化,这个过程总称植物病菌的分离培养。植物病原真菌的分离一般都是采用组织分离
植物病原菌的分离的实验目的
植物病原菌的分离培养是植物病理学实验最基本的操作技术之一,它对原害鉴定,病原形态观察、植物病害接种体的培养等方面都是经常使用的研究手段。通过本实验,要求植物病原菌分离培养的一般原则和方法。
白细胞介素2的制备及鉴定实验
实验概要本实验制备了白细胞介素2(IL2),并进行了鉴定实验。IL2是Th细胞受有丝分裂原或特异性抗原刺激后,并在白细胞介素1的辅助下,产生的一种可溶性糖蛋白。IL2是体内重要的广谱免疫增强因子,临床上常用于治疗免疫缺陷病及肿瘤等。实验步骤1. 制备粗制IL2无菌采血,肝素抗凝,用RPMI1640按
植物病原菌的分离所需器材介绍
1.分离材料:梨黑斑病(Alternaria kikuchiana),柿树圆斑病(Pestnlotia sp)及杉木炭疽病(Glomerella cingolata)新发病的病叶;杨树烂皮病(Cytospora chrysosperma)国槐腐烂病(Dothiorella sp.)的带有新病斑的枝条
植物病原菌的分离的原理和目的
一、实验原理植物患病组织内的真菌菌丝体,如果给予适宜的环境条件,除个别种类外,一般都能恢复生长和繁殖。植物病原菌的分离就是指通过人工培养,从染病植物组织中将病原真菌与其它杂菌相分开,并从寄主植物中分离出来,再将分离到的病原菌于适宜环境内纯化,这个过程总称植物病菌的分离培养。植物病原真菌的分离一般都是
溶菌酶(lysozyme)的制备及其性质实验原理和操作(2)
2.鸡蛋清粗分离 按过滤好的蛋清量边缓慢搅拌边加入等体积的去离子水,均匀后在不断搅拌下用1mol/L HCl调pH值至7左右,用脱脂棉过滤收滤液。 3.D152大孔弱酸性阳离子交换树脂层析 ⑴ D152树脂处理:将D152树脂先用蒸馏水洗去杂物,滤出,用1mol/L NaOH搅拌浸泡并搅拌4~8小时
人工培养细菌的意义
(一)在医学中的应用 1.细菌的鉴定和研究:对细菌进行鉴定,研究其形态、生理、抗原结构、致病性、遗传与变异等生物学性状,均需人工培养细菌才能实现。 2.细菌性疾病的诊断和治疗:细菌感染引起的疾病,常须从患者体内分离出病原菌才能确诊。同时对分离出的病原菌作药物敏感试验,帮助临床选择有效的药物进行
血清γ球蛋白的分离纯化与鉴定(凝胶层析法)2
(5)20%磺基水杨酸溶液(6)奈氏(Nessler)试剂应用液贮存液;称取碘化钾(KI)7.58g于250ml三角烧瓶中,用蒸馏水5ml溶解,再加入碘(I2) 5.5g溶解,加7~7.5gHg用力振摇10min(此时产生高热,须冷却),直至棕红色的碘转变成带绿色的碘化汞钾液为止,过滤上清液倾入
血清免疫球蛋白的提取分离、纯化及鉴定2
二、组织样品在生化实验中,经常利用离体组织研究各种物质代谢途径和酶系的作用。或者从组织中分离、纯化核酸、酶以及某些有意义的代谢物质进行研究。但是,在生物组织中,因含有大量的催化活性物质,离体组织的采集必需在冰冷条件下进行,并日需尽快完成测定。否则其所含物质的量和生物活性都将发生变化。一般采用断头法处
植物病原菌的分离的实验材料及准备
1.分离材料:梨黑斑病(Alternaria kikuchiana),柿树圆斑病(Pestnlotia sp)及杉木炭疽病(Glomerella cingolata)新发病的病叶;杨树烂皮病(Cytospora chrysosperma)国槐腐烂病(Dothiorella sp.)的带有新病斑的枝条
RNA的制备(mRNA的分离和RNA酶活性的控制)2
(一)实验程序如不谨慎操作,外源性RNA酶可以通过下述途径污染RNA制品:(1)玻璃制品、塑料制品和电泳槽 灭菌的一次性使用的塑料制品基本上无RNA〈, /SPAN〉酶,可以不经预处理直接用于制备和贮存RNA。实验室用的普通玻璃器皿和塑料制品经常有RNA酶法染,使用前必须于180℃干烤8小时或更
植物线粒体制备及其亚结构分级分离实验
实验材料黄化苗试剂、试剂盒匀浆缓冲液清洗缓冲液Percoll 梯度溶液仪器、耗材分光光度计实验步骤在选好植物材料和匀浆缓冲液后,接下来关键的因素包括匀浆方法、缓冲液的 pH、使用的缓冲液与植物组织之间的比例、研磨时间及温度等(见注释 5) 。3.1 匀浆根据植物组织的不同可以采取不同的匀浆方法,或者
植物线粒体制备及其亚结构分级分离实验
实验材料黄化苗 试剂、试剂盒匀浆缓冲液 清洗缓冲液
膜蛋白的分离、鉴定及其功能分析—GFC/IEC/SDSPAGE-...(二)
2. GFC/AEC/SDS-PAGE Separation分离复杂的蛋白质混合物,如膜粗提物,需要两个连续的色谱层析步骤。因此,必须获得较大量(约 5 mg) 的增溶蛋白质样品。这也有利于低丰度的蛋白质在 SDS-PAGE 电泳泳道上被分辨出来。由于分子筛色谱层析(GFC) 会稀释样品,因
膜蛋白的分离、鉴定及其功能分析—GFC/IEC/SDSPAGE-...(一)
膜蛋白的分离、鉴定及其功能分析—GFC/IEC/SDS-PAGE 和 MALDI-TOF-MS 实验试剂、试剂盒 分离缓冲液增溶缓冲液洗脱缓冲液Laemmli 样品缓冲液胶段冲洗缓冲液酶解缓冲液肽抽提缓冲液实验步骤 3.1 膜的分离因为在研磨材料时,要分离的膜组分以小囊泡形式与可溶的胞质蛋白质混合在
新型功能化固相萃取材料的制备及其的富集分离应用
信息技术的广泛应用以及数学、物理学、生命科学和材料科学等学科的新成就的不断引入,极大地丰富了分析化学的内容,现代分析化学不仅仅是测定物质的化学组成和含量的分析方法及其有关的科学,还成为化学信息的科学,成为生物化学、物理化学、环境化学交叉的科学。工业生产的发展和人口的持续增长给环境带来了巨大的压力,生
植物病原菌的分离的实验方法及步骤
(一)分离前的准备工作:1.工作环境的清洁和消毒分离培养一般在无菌室、无菌箱或无菌工作台(超净工作台)上进行,无菌室和无菌箱要经过喷雾除尘,并用药物或紫外线照射消毒(常用消毒药物为70%酒精,2%煤酚皂液,5%石炭酸液等喷雾。若用紫外线灯照射则需20-30分钟)。在没有上述设备条件时,在清洁房间里关
支原体的分离培养鉴定
溶脲脲原体(Uu)和人型支原体(Mh)是常见的致病性泌尿道支原体。根据支原体不同生化反应特性和对特定物质的不同抵抗力可用于分离鉴定支原体。【原理】标本分别接种于支原体鉴别培养液内。溶脲脲原体可产生脲酶,使分糖产氨,培养液呈碱性,指示剂由黄色变为粉红色。人型支原体能分解精氨酸产氮,使含有精氨酸肉汤培养
支原体的分离培养鉴定
溶脲脲原体(Uu)和人型支原体(Mh)是常见的致病性泌尿道支原体。根据支原体不同生化反应特性和对特定物质的不同抵抗力可用于分离鉴定支原体。【原理】标本分别接种于支原体鉴别培养液内。溶脲脲原体可产生脲酶,使分糖产氨,培养液呈碱性,指示剂由黄色变为粉红色。人型支原体能分解精氨酸产氮,使含有精氨酸肉汤培养
支原体的分离培养鉴定
支原体的分离培养鉴定溶脲脲原体(Uu)和人型支原体(Mh)是常见的致病性泌尿道支原体。根据支原体不同生化反应特性和对特定物质的不同抵抗力可用于分离鉴定支原体。【原理】标本分别接种于支原体鉴别培养液内。溶脲脲原体可产生脲酶,使分糖产氨,培养液呈碱性,指示剂由黄色变为粉红色。人型支原体能分解精氨酸产氮,