肝脏细胞RNA的提取原理、材料和方法
一.原理 RNA提取技术不仅是分子生物学技术的重要组成部分,也是功能基因组学科研技术的重要基础。从RNA水平研究生物体内基因的调控机制,已成为分子生物学研究的一个重要手段。对某一生物或组织进行性状研究,首先要获得该性状基因,从组织细胞中分离完整的RNA对于分子克隆和基因表达分析等实验是至关重要的,如Northern印迹及杂交分析、cDNA合成等实验的成效在很大程度上取决于RNA的质量。利用提取的 RNA人们可以对特定的基因表达进行定量的检测,从分子水平精确的了解细胞生命活动的规律。通常一个典型的哺乳动物细胞约含有10-5μgRNA ,其中80%~85%为rRNA(主要是28S、18 S和5.8 S、5S四种类型);10%~15%为tRNA和核内小分子RNA。 这些高峰度的RNA的大小和序列确定,可通过凝胶电泳、密度梯度离心、阴离子交换层析和高压液相层析(HPLC)分离。相反,占RNA总量1%~5 ......阅读全文
肝脏细胞RNA的提取
一.原理RNA提取技术不仅是分子生物学技术的重要组成部分,也是功能基因组 学科研技术的重要基础。从RNA水平研究生物体内基因的调控机制,已成为分子生物学研究的一个重要手段。对某一生物或组织进行性状研究,首先要获得该性状基因,从组织细胞中分离完整的RNA对于分子克隆 和基因表达分析等实验是至关重要的,
肝脏细胞RNA的提取操作方法
一.原理RNA提取技术不仅是分子生物学技术的重要组成部分,也是功能基因组 学科研技术的重要基础。从RNA水平研究生物体内基因的调控机制,已成为分子生物学研究的一个重要手段。对某一生物或组织进行性状研究,首先要获得该性状基因,从组织细胞中分离完整的RNA对于分子克隆 和基因表达分析等实验是
肝脏细胞RNA的提取原理、材料和方法
一.原理 RNA提取技术不仅是分子生物学技术的重要组成部分,也是功能基因组学科研技术的重要基础。从RNA水平研究生物体内基因的调控机制,已成为分子生物学研究的一个重要手段。对某一生物或组织进行性状研究,首先要获得该性状基因,从组织细胞中分离完整的RNA对于分子克隆和基因表达分析等实验是至关重要的,如
Nature重磅!利用单细胞RNA测序构建人类肝脏细胞图谱
肝脏是人体最大、功能最多的器官之一,在人体的新陈代谢及免疫过程中发挥着关键作用。更值得关注的是,肝脏还是人体唯一一种仅需原体积的25%,就能够完全再生的内脏器官。另外,包括脂肪肝、肝癌及肝炎在内的各类肝病是当今世界最大的健康问题之一,也是导致死亡的主要原因。 尽管肝脏对人类健康极为重要,但健康
Nature重磅!利用单细胞RNA测序构建人类肝脏细胞图谱
肝脏是人体最大、功能最多的器官之一,在人体的新陈代谢及免疫过程中发挥着关键作用。更值得关注的是,肝脏还是人体唯一一种仅需原体积的25%,就能够完全再生的内脏器官。另外,包括脂肪肝、肝癌及肝炎在内的各类肝病是当今世界最大的健康问题之一,也是导致死亡的主要原因。 尽管肝脏对人类健康极为重要,但健康
动物肝脏RNA的制备(苯酚法)和纯度测定2
试剂和器材试剂1.DNA标准溶液(须经定磷确定其纯度):取小牛胸腺DNA钠盐以0.01mol/L氢氯化钠溶液配成200 µg/mL的溶液。2.样品待测液:准确称取DNA干燥制品以0.01mol/L氢氯化钠溶液配成100 µg/mL左右的溶液。在测定RNA制品中的DNA含量时,要求RNA制品的每mL待
动物肝脏RNA的制备(苯酚法)和纯度测定1
原理细胞内大部分RNA 均与蛋白质结合在一起,以核蛋白的形式存在。因此分离RNA时必须使RNA与蛋白质解离,并除去蛋白质。除去蛋白质的方法主要有:(1)用氯仿-辛醇混合液剧烈振荡,使蛋白质变性。(2)在冷的2mol/L盐酸胍溶液中沉淀RNA,大部分蛋白质仍处于溶解状态。(3)以去污剂如十二烷基硫
Nature:揭示肝脏干细胞来源
霍华德休斯医学研究所(HHMI)的科学家们发现了生成功能性肝细胞的肝脏干细胞。这一研究工作解开了关于肝脏中新细胞起源的一个长期的谜题,即便在健康器官中随着细胞的死亡肝脏也必须不断地补充新细胞。 研究的领导者、HHMI研究员、斯坦福大学Roel Nusse说:“我们解开了一个很老的问题。我们证实
参与肝脏修复的细胞来源
参与肝脏修复的细胞可能有三个来源:一是通过肝细胞自身的有丝分裂来弥补死亡的肝细胞,这在正常的肝细胞代谢及轻度的肝脏损伤中起主要作用;二是在比较较严重的肝损情况下,肝脏的干细胞被激活并向肝细胞分化以修复肝脏;最近的研究显示骨髓中的造血干细胞也具有向肝细胞分化能力,提示可作为肝脏细胞修复第三个潜在来源1
人类发育中肝脏的细胞图谱揭秘人类胎儿肝脏造血
在一项新的研究中,英国研究人员在世界上首次构建出人类发育中肝脏的细胞图谱,它提供了关于胎儿中血液和免疫系统如何产生的重要见解。这种图谱描绘了在妊娠的头三个月和第二个三个月之间的发育中肝脏的细胞景观变化,包括来自肝脏的干细胞如何播种到其他组织,以支持生长所需的高氧气需求。相关研究结果近期发表在Na
修复受损肝脏的新型细胞发现
显微镜图像显示,“领导细胞”会快速迁移到伤口边缘,其中“领导细胞”的细胞核呈白色,细胞膜呈红色。图片来源:美国趣味科学网站科技日报讯 (记者刘霞)英国科学家在肝脏内发现了一种被称为“领导细胞”的新型细胞。它们在肝脏受损后进行自我修复方面发挥了重要作用。研究人员表示,这一发现有望催生新的肝病疗法。相关
肝脏上皮样血管周细胞瘤
患者男性,65岁。主诉因“丙肝抗体阳性15年余,间断肝区不适3年余,加重1个月”入院。患者15年前体检时发现肝功能异常,丙肝抗体阳性,查病毒复制活跃,予干扰素抗病毒治疗6个月,丙肝RNA转阴。其后每年定期复查肝功能正常、丙肝RNA<测定值。3年前患者无明显诱因出现肝区隐痛不适,呈间断发作,持续约数秒
日开发高效培育肝脏细胞技术
日本科学家开发出一种用胚胎干细胞高效培育肝脏细胞的技术,能够使90%的小鼠胚胎干细胞发育成肝脏细胞,效率相当于原有方法的约9倍。 这项技术是日本东京工业大学教授赤池敏宏率领的研究小组开发的,研究成果发表在最新一期《生物材料》杂志上。新技术的关键是利用特殊的培养基,使胚胎干细
Cell子刊综述:肝脏干细胞
肝脏是人体内具有独特再生能力,维持体内平衡的一个关键器官。成熟肝细胞具有明显的损伤修复功能,因此科学家们一直希望能了解这一过程中成体肝脏干细胞的作用。同时发育中肝脏的干细胞或者说祖细胞也是一个研究热点,解析这些具体的分子机制将有助于在细胞治疗和药物筛选过程中,体外生成功能性肝细胞。 来自日本
细胞RNA含量检测
细胞RNA含量检测 实验步骤
细胞RNA含量检测
实验步骤展开
提取悬浮细胞RNA
提取RNA器械:离心管2支,吸管4个,酒精灯,打火机,记号笔,200ul,1000UL枪,DEPC泡过的枪头EP管,紫外照过的手套。滤纸,DEPC纯水(750ml无水乙醇+150mlDEPC水,剧烈振荡,使劲的摇晃,直至混匀),氯仿,75%酒精,异丙醇,Trizol,预冷的离心机(两种),EP管架(
细胞RNA含量检测
实验步骤 展开
RNA提取心得(组织RNA提取和培养细胞的RNA提取)
一.组织RNA提取 1.最好新鲜组织,这样RNA提取的效果比较好,这是肯定的。 2. 如果不是新鲜的(最好在半年之内,-80℃或者液氮中冻存的)组织,注意不要反复冻融,从冰冻状态拿到0-4℃,注意不要拿到常温,待组织解冻后,用 DEPC泡过的剪刀剪一小块组织,称重后,放到预冷的匀浆器中,然后
干细胞与肝脏修复和再生2
肝脏干细胞的提出研究发现,肝脏的再生能力很强。1958年 wilson等证实了肝脏干细胞的存在。在肝受损情况下,肝脏干细胞被激活,维持了肝脏的正常功能。但是在肝脏持续受损时,肝脏干细胞的再生能力被抑制和耗竭。近年来,骨髓干细胞的研究获得了巨大进展,也为慢性肝病的治疗带来了新的希望。1999年,美国学
干细胞与肝脏修复和再生3
干细胞的作用机制目前,干细胞具体的作用机制仍不十分明确。韩英教授综合以往的研究,提出了自己的观点。她认为:干细胞主要通过三方面在肝病治疗中发挥作用:1.通过转分化为肝细胞发挥替代作用;2.细胞融合机制;3.干细胞可分泌多种细胞因子,参与肝损伤修复,即干细胞的旁分泌机制。
调控肝脏癌变的细胞因子找到
记者从厦门大学获悉,该校细胞应激生物学国家重点实验室周大旺教授团队发现和鉴定了血液中存在的一种细胞因子,能够通过特定机制调控胆汁酸代谢,进而控制肝脏再生、尺寸大小及癌变,为调控肝脏再生临床应用及预防肝癌产生提供了重要理论依据。该最新研究成果日前在国际期刊《发育细胞》上发表。 近年来,Hippo
干细胞与肝脏修复和再生1
我国是一个肝病大国,除慢性乙肝感染者9300万外,还有丙肝、脂肪肝、免疫肝、药物肝等。估计大约平均每6-7个人就有一个慢性肝病患者。这中间会有一部分人由于各种原因由慢性肝病发展为肝硬化,最后成为终末期肝病。而终末期肝病的临床治疗中,肝移植被认为是唯一有效的治疗手段。但是由于供肝缺乏,只有约万分之一的
Science:内皮细胞可控制肝脏再生
内皮细胞并不仅仅只会对外源性刺激做出被动响应,它们自身还以一种非常积极的方式控制了器官功能。现在来自德国癌症研究中心和海德堡大学的科学家们发现,在遭受损伤或部分手术切除之后内皮细胞可通过一种复杂的生长调控机制来控制肝脏再生。 密集的动脉、毛细血管和静脉网络使得身体内的每个细胞距离最近的血管
“定居肝脏”的自然杀伤细胞的发现
自然杀伤细胞(NK细胞)是固有免疫系统的重要成员,被誉为肿瘤和病毒的“天生杀手”。科学家以往对NK细胞的研究以骨髓、胸腺、脾脏、淋巴结等“专职”淋巴器官和血液为主体,但这些部位与疾病高发组织器官的免疫特性相差甚远。在国家自然科学基金重大研究计划“组织器官区域免疫特性与疾病”支持下,我国学者发现了“定
日首次利用皮肤细胞制造出肝脏干细胞
日本国立癌症研究中心日前说,该中心研究员石川哲也率领的研究小组,利用人体皮肤和胃细胞,成功制造出肝脏干细胞。据称,这在世界上尚属首次。 研究人员介绍说,肝脏细胞难以在体外培养,但他们制造出的这种干细胞可以在体外大量增殖,因此可以用于肝炎病毒研究
日本首次利用皮肤细胞制造出肝脏干细胞
日本国立癌症研究中心日前说,该中心研究员石川哲也率领的研究小组,利用人体胃和皮肤细胞,成功制造出肝脏干细胞。据称,这在世界上尚属首次。 研究人员介绍说,肝脏细胞难以在体外培养,但他们制造出的这种干细胞可以在体外大量增殖,因此可以用于肝炎病毒研究,推动个性化新药开发。
肝病患者皮肤细胞培育出肝脏细胞
英国剑桥大学8月25日发布公报说,该校研究人员成功利用肝病患者的皮肤细胞培育出肝脏细胞,这样得到的肝脏细胞与病人肝脏中的细胞高度相似,将有助于对特定肝病患者进行研究并开展治疗。 公报说,研究人员从7名有遗传性肝脏疾病的患者身上提取了皮肤细胞,先将其改变为诱导多功能干细胞,然后培
细胞化学词汇RNA构象
中文名称:RNA构象英文名称:RNA conformation定 义:RNA分子的空间结构,构象改变并不导致共价键的断裂和生成。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
细胞化学词汇RNA折叠
中文名称:RNA折叠英文名称:RNA folding定 义:新合成的或变性的RNA转变为特定的、成熟的三维结构构象的过程。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)