总RNA分离纯化标准操作规程(SOP)
主要仪器 研钵,恒温水浴,旋涡振荡器,冷冻台式高速离心机, 超低温冰箱,紫外检测仪,电泳仪,电泳槽。 试剂 1.Trizol试剂(购自Invitrogen公司) 2.焦碳酸二乙酯 (DEPC) 3.氯仿(新开封) 4.异丙醇(新开封) 5.无RNase灭菌水:用将高温烘烤的玻璃瓶(250℃ 3小时)装蒸馏水,然后加入0.1%的DEPC(体积/体积),处理过夜后高压灭菌。 6.75%乙醇:用DEPC处理后的水配制75%乙醇,(用高温灭菌器皿配制),然后装入高温烘烤的玻璃瓶中,存放于4℃冰箱。 相关器皿的预处理 1.塑料制品的处理 尽可能使用无菌,一次性塑料制品,已经标明RNase-Free的塑料制品,如果没有开封使用过通常没有必要再次处......阅读全文
PTC200-PCR仪标准操作规程(SOP)
操作步骤 1. 启动DNA引擎。 2. 启动程序:从主菜单中选择“Enter”,按Proceed 键。 3. 程序命名:按Select 键前后翻找字母和符号,找到后按Proceed 键选定该字符,同时光标右移一格。数字和破折号可以通过按小键盘上相应的键来插入。名字输入完毕,按一次Procee
洁净区沉降菌监测标准操作规程(SOP)
原理:采用沉降法,即通过于培养皿中利用自然沉降原理收集在空气中的生物粒子,经不少于48小时的培养,在30—35℃下让其繁殖到可见的菌落进行计数,以菌落数来判定洁净环境内的活微生物 数,并以此来评定洁净室(区)的洁净度。 主体内容: 1. 器材: 高压消毒锅:使用时严格按照说明书操作。
洁净区沉降菌监测标准操作规程(SOP)
原理:采用沉降法,即通过于培养皿中利用自然沉降原理收集在空气中的生物粒子,经不少于48小时的培养,在30—35℃下让其繁殖到可见的菌落进行计数,以菌落数来判定洁净环境内的活微生物 数,并以此来评定洁净室(区)的洁净度。主体内容:器材:高压消毒锅:使用时严格按照说明书操作。 恒温培养箱:必须定期对
PTC200-PCR仪标准操作规程(SOP)
操作步骤1. 启动DNA引擎。2. 启动程序:从主菜单中选择“Enter”,按Proceed 键。3. 程序命名:按Select 键前后翻找字母和符号,找到后按Proceed 键选定该字符,同时光标右移一格。数字和破折号可以通过按小键盘上相应的键来插入。名字输入完毕,按一次Proceed 键确认最后
真核细胞总RNA的分离提取
RNA是基因表达产物,由以下几类分子组成,rRNA(占细胞总RNA的80%~85%)、tRNA和核内小分子RNA(占10~15%)、mRNA(占1~5%)。其中mRNA是分子生物学的主要研究对象,分离制备mRNA是克隆基因,分析基因表达以及建立cDNA文库的首要步骤。真核细胞总RNA分离提取的目的是
分离与纯化的基本操作规程
酶的分离纯化一般包括三个基本步骤:即抽提、纯化、结晶或制剂。首先将所需的酶从原料中引入溶液,此时不可避免地夹带着一些杂质,然后再将此酶从溶液中选择性地分离出来,或者从此溶液中选择性地除去杂质,然后制成纯化的酶制剂。酶分离纯化的最终目的是获得单一纯净的酶,因此,容许在不破坏“目的酶”的限度内,使用各种
总二氧化碳(TCO2)标准化操作规程(SOP)文件
总二氧化碳(Total Carbon Dioxide,TCO2) 1. 原理:血浆(清)中的碳酸氢根在磷酸烯醇丙酮酸羟化酶(PEPC)的催化下和磷酸烯醇丙酮酸(PEP)反应,生成草酰乙酸和磷酸烯醇丙酮酸和苹果酸脱氢酶(MDH)反应,生成苹果酸,同时将NADH氧化成NAD+;在340nm波长处吸光度的
单细胞凝胶电泳标准操作规程(本室SOP)
原理:在细胞核中,DNA是环状附着在核基质上,细胞裂解过程中,核基质被溶解、抽提,DNA的结构则未发生变化。如果DNA链上存在缺口,则使DNA超螺旋变的松弛,DNA环向外展,同时由于暴露了阴电荷,在电场力的作用下,松动的DNA环向阳极迁移,但是由于这种松动的DNA环一端仍附着于核DNA,其迁移距离受
BECKMAN流式细胞仪标准操作规程(SOP)
1. 主题内容和使用范围本规程规定了流式细胞仪的标准操作程序。 本规程主要使用于组织、血液的检测和定量2. 应用标准联科流式细胞仪应用手册3. 术语和定义术语、定义应用于EPICS XL流式细胞仪用户培训手册 4. 流式细胞仪组成:(1)流动室及液流驱动系统;(2)激光光源及光束成形系统;(3
BECKMAN流式细胞仪标准操作规程(SOP)
1. 主题内容和使用范围本规程规定了流式细胞仪的标准操作程序。本规程主要使用于组织、血液的检测和定量2. 应用标准联科流式细胞仪应用手册3. 术语和定义术语、定义应用于EPICS XL流式细胞仪用户培训手册4. 流式细胞仪组成:(1)流动室及液流驱动系统;(2)激光光源及光束成形系统;(3) 光学
胚胎干细胞培养标准操作规程(SOP)
一、细胞多能性胚胎干细胞产生于小鼠胚泡1.表达绿色荧光蛋白(EGFP)的B5-ES细胞。由Dr. Nagy的实验室制备。 2.D3-ATCC; CRL-1934. 我们得到时大约传了17代。 3.J1-由Dr. Jaenish的实验室友情提供。我们得到时大约传了7-9代。 4.J1rtTA-r
细胞冻存与细胞复苏标准操作规程(SOP)
背景知识 :细胞培养的传代及日常维持过程中,在培养器具、培养液及各种准备工作方面都需大量的耗费,而且细胞一旦离开活体开始原代培养,它的各种生物特性都将逐渐发生变化并随着传代次数的增加和体外环境条件的变化而不断有新的变化。因此及时进行细胞冻存十分必要。细胞冷冻储存在-70℃冰箱中可以保存一年之久;细胞
FA1104型电子天平标准操作规程(SOP)
目的:制定FA1104型电子天平的使用标准操作规程,确保操作的规范性、正确性,结果的可靠性。1、 使用前准备1.1 使用之前,要预先向管理人员做好预约,做好使用登记。1.2 称重工作台前一定要保持平稳牢固可靠。1.3 用水仪调整调整电子天平:电子天平升高,调节右旋前面地脚;电子天平下降,调节左旋前
哺乳动物细胞总RNA的分离
哺乳动物细胞总RNA的分离细胞的裂解提取步骤注意事项 这一从培养的单层哺乳动物细胞中分离RNA的实验程序系为Favaloro 等(1980)所介绍程序的改良。该程序同样适用于从悬浮培养的哺乳动物细胞中或从易于分散成单个细胞的哺乳动物组织中分离RNA。但不适用于从固体组织中提取RNA,因为用这种裂解
哺乳动物细胞总RNA的分离
实验概要本实验介绍了从培养的单层哺乳动物细胞中分离RNA的实验程序,该程序同样适用于从悬浮培养的哺乳动物细胞中或从易于分散成单个细胞的哺乳动物组织中分离RNA。但不适用于从固体组织中提取RNA,因为用这种裂解细胞的方法(在SDS存在的条件下用蛋白酶K消化)去消化组织速度很慢,导致内源性RNA酶在被蛋
哺乳动物细胞总RNA快速分离
试剂、试剂盒 尤钙镁离子磷酸缓冲盐溶液 EDTASDS 乙酸钠水平衡的苯酚 乙醇 Tris-Cl NaCL实验步骤 一 材料与设备1)尤钙镁离子磷酸缓冲盐溶液 (PBS) 2)10 mmol/L EDTA (pH8.0 ) 3)0.5% SDS 4)0. l mol/L 乙酸钠(p
哺乳动物细胞总RNA快速分离
试剂、试剂盒 尤钙镁离子磷酸缓冲盐溶液 EDTA SDS 乙酸钠 水平衡的苯酚 乙醇 Tris-Cl NaCL
RNA分离与分析实验_用丙烯酰胺尿素凝胶纯化RNA
实验材料RNA试剂、试剂盒TBE 缓冲液丙烯酰铵溶液过硫酸铵水溶液RNA 染色液仪器、耗材玻璃板实验步骤1. 准备下列溶液:TBE 缓冲液:Tris 碱 54 g,硼酸 27.5 g,0.5 mol/L EDTA ( pH 8.0) 20 ml,溶解并加水至 1000 ml。当发现贮存液有白色沉淀
纤维蛋白原测定(FIB)标准操作规程(SOP)
原理:在确定量的血浆样本经过一定时间的加温后,加入试剂。加入试剂后,采用波长为660nm的光照射样本。凝血过程(纤维蛋白原转化为纤维蛋白)中血的浑浊度可以通过测量散射光光强度的改变来测定。从散射光光强度的测定,可以做出凝血曲线,通过Percentage Detection Method方法求得凝
PH计的使用与维护标准化操作规程(SOP)
酸度计简称pH计,由电极和电计两部分组成。使用中若能够合理维护电极、按要求配制标准缓冲液和正确操作电计,可大大减小pH示值误差,从而提高化学实验、医学检验数据的可靠性。 一、正确使用与保养电极目前实验室使用的电极都是复合电极,其优点是使用方便,不受氧化性或还原性物质的影响,且平衡速度较快。使用时,将
电泳仪操作规程SOP
电泳技术是分子生物学研究不可缺少的重要手段。电泳一般分为自由界面电泳和区带电泳大类,自由界面电泳不需支持物,如等速电泳、密度梯度电泳及显微电泳等,这类电泳目前已很少使用。区带电泳需用各种类型的物质作为支持物,常用的支持物有滤纸、醋酸纤维薄膜、非凝胶性支持物、凝胶性支持物及硅胶?DG薄层等,分子生物学
2.1.2-哺乳动物细胞总RNA快速分离
利用 SDS 裂解细胞 ,并用酸性苯酚分级提取细胞总 RNA, 这是一种适合于处理 mRNA 含量相对较低、内源性 RNase 活性较髙的细胞的方法,该方法 RNA 损失极少,简便易行 ,可同时处理多个样品。对大多数细胞株来说,在一个直径 90mm 培养皿中培养细胞 ,其 RNA 收率为 100〜2
LGJⅡ型医用冷冻干燥机标准操作规程SOP
1、 概述1. 1 原理:水有固态、液态、气态三种态相,根据热力学中的相平衡理论,随压力的降低,水的冰点变化不大,而沸点却越来越低,向冰点靠近,当压力降到一定的真空度时,水的沸点和冰点重合,冰就可以不经液态而直接汽化为气体,这一过程称为升华。物品的真空冷冻干燥,就是在水的三相点以下,即在低温低压条件
Leica-TP-1050组织脱水机标准操作规程(SOP)
1. 概述Leica TP1050是一种用于实验室的标准化组织处理仪,用于组织标本的固定、脱水和浸蜡。2. 仪器特点2.1 工作电源特征:180~250VA,1100W,49~71Hz;2.2 试剂温度30℃~55℃或室温、石蜡温度40℃~65℃;2.3 操作过程中产生的有毒气体由机内的活
METTLER-TOLEDO-AX205DR电子天平标准操作规程(SOP)
1、开机步骤:1.1打开稳压电源。1.2轻触“ON/OFF键”开启天平。1.3调节底座螺丝,使水平仪中的空气泡位于内圈中部。1.4按“↕”键打开玻璃防风罩,按“O/T”键进行去皮并回零。1.5将盛有待测物品的表面皿或滤纸放在称量盘上,按“↕”键关闭防风罩,待读数处左上方显示的稳定性探测图标消失即可读
拜耳Clinitek500尿液分析仪标准操作规程(SOP)
1 目的:保证拜耳Clinitek-500尿液化学分析仪的正确操作,保证检验结果的准确可靠。2 适用范围:临床血液实验室3 项目名称:尿液检验(10项:葡萄糖,胆红素,酮体乙酰乙酸,比重,隐血,PH,蛋白质,尿胆元,亚硝酸,白细胞)4 项目方法: 拜耳Clinitek-500尿液化学分析仪是一种半自
纯化RNA实验
从培养的细胞中纯化总RNA 从组织中纯化总RNA 实验材料 细胞
离心机分离纯化水质量标准
本品为蒸馏法、离子交换法、反渗透法或其他适宜的方法制得供药用的水,不含任何附加剂。 【性状】本品为无色的澄明液体;无臭,无味。 【检查】酸碱度 取本品10ml,加甲基红指示液2滴,不得显红色;另取10ml,加溴麝香草酚蓝指示液5滴,不得显蓝色。氯化物、硫酸盐与钙盐取本品,分置三支试管中,每管各
TGAb测定操作规程SOP
一.原理 利用人血清中TG抗体与其示踪物125I-TG进行特异结合反应,形成125I-TG-Ab复合物,然后加入免疫分离剂。复合物被沉淀下来,而游离的示踪物留在上清液中,离心弃上清液,测定沉淀物放射性,即能反映出血清中TG抗体的含量。二.标本采集与处理:样本采集后,应尽快分离血清。三.仪器设备和试
液相色谱仪操作规程(SOP)
一.开机 1.打开送液泵电源,打开排液阀(反时针旋转180度),按purge键进行排气泡的操作,确认输液管路中无气泡时停止该操作,将排液阀旋回到原位置。 2. 设定流速,平衡柱子30分钟 [Func]+“流速”+[enter] 3. 打开检测器电源,设定波长 [Func]+“波长