小麦黄化苗总mRNA的提取
[实验原理]RNA是一类极易降解的分子,要得到完整的RNA必须最大限度地抑制提取过程中内源性及外源性核糖核酸酶对RNA的降解。本实验以小麦为材料,采用异硫氰酸胍—苯酚—氯仿抽提法或CTAB法提取总RNA。异硫氰酸胍是高浓度变性剂,可溶解蛋白质,破坏细胞结构,使蛋白质与核酸分离,失活RNA酶,所以RNA从细胞中释放出来时不被降解。细胞裂解后,除了RNA,还有DNA、蛋白质和细胞碎片,通过酚、氯仿等有机溶剂处理得到纯化、均一的总RNA。mRNA仅占总RNA的1%-5%,由于大多数真核mRNA 3’端具有多聚腺苷酸结构(polyA),因此可采用寡聚(d丁)纤维素亲和层析柱分离出mRNA。[仪器、材料与试剂](一) 仪器和材料紫外线透射仪、移液枪、琼脂糖凝胶电泳系统、小麦黄化苗(二) 试剂4M异硫氰酸胍、2M NaAc(pH 4.8)、4M LiCl、3M NaAc(pH5.0),以上均用0.1%焦碳酸二乙酯(DEPC)......阅读全文
小麦黄化苗总mRNA的提取
[实验原理]RNA是一类极易降解的分子,要得到完整的RNA必须最大限度地抑制提取过程中内源性及外源性核糖核酸酶对RNA的降解。本实验以小麦为材料,采用异硫氰酸胍—苯酚—氯仿抽提法或CTAB法提取总RNA。异硫氰酸胍是高浓度变性剂,可溶解蛋白质,破坏细胞结构,使蛋白质与核酸分离,失活RNA酶,所以R
小麦黄化苗总DNA的提取
实验概要学习和掌握DNA的微量提取法。实验原理小麦黄化苗经液氮研磨,可使细胞壁破裂,加入去污剂(如SDS),可使核蛋白体解析,然后使蛋白和多糖杂质沉淀,DNA进入水相,再用酚、氯仿抽提纯化。本实验采用SDS法,其主要作用是破膜。SDS属阴离子去污剂,要溶解膜蛋白与脂肪,也可解聚核蛋白。SDS在溶液中
小麦总RNA的提取
实验概要从黄化小麦苗中提取总RNA,可以为cDNA文库的构建做好准备。实验步骤1. 所有容器高温灭菌两次,DEPC高温灭菌,所有的试剂用DEPC配制,高温灭菌。2. 在一灭菌2mL管中加入:5mol/L异硫氰酸胍0.7mL、苯酚0.4mL、NaAc(pH4.0) 0.1mL。3. 称取0.2g小麦黄
小麦总RNA的提取
实验步骤1. 所有容器高温灭菌两次,DEPC高温灭菌,所有的试剂用DEPC配制,高温灭菌。2. 在一灭菌2mL管中加入:5mol/L异硫氰酸胍0.7mL、苯酚0.4mL、NaAc(pH4.0) 0.1mL。3. 称取0.2g小麦黄化苗的叶片,迅速在液氮中研磨成粉末,转入已准备好的离心管中,剧烈震荡。
怎样从总RNA中提取mRNA
大多数真核细胞mRNA的3’端通常具有由20-30个腺苷酸组成的polyA尾巴,寡聚胸腺嘧啶脱氧核糖核苷(OligoT)可以与之配对结合,这就是提取mRNA最基本的原理。具体到实验手段上,现在磁珠法、纤维素柱层析法都有在用。磁珠法一般是用生物素标记OligoT,亲和素标记磁珠(生物素和亲和素间具有高
怎样从总RNA中提取mRNA
大多数真核细胞mRNA的3’端通常具有由20-30个腺苷酸组成的polyA尾巴,寡聚胸腺嘧啶脱氧核糖核苷(OligoT)可以与之配对结合,这就是提取mRNA最基本的原理。具体到实验手段上,现在磁珠法、纤维素柱层析法都有在用。磁珠法一般是用生物素标记OligoT,亲和素标记磁珠(生物素和亲和素间具有高
小麦总RNA的提取方法
实验步骤1. 所有容器高温灭菌两次,DEPC高温灭菌,所有的试剂用DEPC配制,高温灭菌。2. 在一灭菌2mL管中加入:5mol/L异硫氰酸胍0.7mL、苯酚0.4mL、NaAc(pH4.0) 0.1mL。3. 称取0.2g小麦黄化苗的叶片,迅速在液氮中研磨成粉末,转入已准备好的离心管中,剧烈震荡。
如何评价总RNA或mRNA的质量?
一个细胞有很多种的RNA,如mRNA,rRNA,tRNA总RNA指的是一个细胞(一种生物)里面所有种类的RNA平时说的提取总RNA指的就是提取一个细胞里面的所有种类的RNA 。 mRNA的功能:把DNA模板链上的 碱基 序列 转录 为RNA分子上的碱基序列(mRNA),再从mRNA上
组培苗的炼苗方法
试管苗的生理和解剖特征决定了必须对它们逐渐降低相对湿度和增强光照来进行炼苗,以使试管苗移出后适应大田的自养生长和有菌环境。移栽前宜对移栽基质进行消毒处理。消毒方法一般有两种。一是用干热消毒法,将移栽基质在烘箱中烘烤处理或在高压灭菌锅中以15磅压力维持20~30 min。二是采用福尔马林熏蒸消毒法,即
组培苗的炼苗方法
试管苗的生理和解剖特征决定了必须对它们逐渐降低相对湿度和增强光照来进行炼苗,以使试管苗移出后适应大田的自养生长和有菌环境。 移栽前宜对移栽基质进行消毒处理。消毒方法一般有两种。一是用干热消毒法,将移栽基质在烘箱中烘烤处理或在高压灭菌锅中以15磅压力维持20~30 min。二是采用福尔马林熏蒸
怎样从总rna中进行mrna的分离和纯化
真核生物的mRNA分子是单顺反子,是编码蛋白质的基因转录产物。真核生物的所有蛋白质归根到底都是mRNA的翻译产物,因此,高质量mRNA的分离纯化是克隆基因、提高cDNA文库构建效率的决定性因素。哺乳动物平均每个细胞含有约1x10-5?g RNA,理论上认为每克细胞可分离出5~10mg RNA。其中
怎样从总rna中进行mrna的分离和纯化
真核生物的mRNA分子是单顺反子,是编码蛋白质的基因转录产物。真核生物的所有蛋白质归根到底都是mRNA的翻译产物,因此,高质量mRNA的分离纯化是克隆基因、提高cDNA文库构建效率的决定性因素。哺乳动物平均每个细胞含有约1x10-5?g RNA,理论上认为每克细胞可分离出5~10mg RNA。其中
怎样从总rna中进行mrna的分离和纯化
真核生物的mRNA分子是单顺反子,是编码蛋白质的基因转录产物。真核生物的所有蛋白质归根到底都是mRNA的翻译产物,因此,高质量mRNA的分离纯化是克隆基因、提高cDNA文库构建效率的决定性因素。哺乳动物平均每个细胞含有约1x10-5?g RNA,理论上认为每克细胞可分离出5~10mg RNA。其中
动植物组织总RNA提取(Trizol法)和mRNA提取
一、材料 水稻叶片或小鼠肝组织。 二、设备 研钵,冷冻台式高速离心机,低温冰箱,冷冻真空干燥器,紫外检测仪,电泳仪,电泳槽。 三、试剂 1、无RNA酶灭菌水:用将高温烘烤的玻璃瓶(180℃ 2小时)装蒸馏水,然后加入0.01%的DEPC(体积/体积),处理过夜后高
怎样从总rna中进行mrna的分离和纯化
真核生物的mRNA分子是单顺反子,是编码蛋白质的基因转录产物。真核生物的所有蛋白质归根到底都是mRNA的翻译产物,因此,高质量mRNA的分离纯化是克隆基因、提高cDNA文库构建效率的决定性因素。哺乳动物平均每个细胞含有约1x10-5?g RNA,理论上认为每克细胞可分离出5~10mg RNA。其中
牛黄化毒片的性状
本品为浅黄色糖衣片,除去糖衣后显黄棕色;味苦、辛。
牛黄化毒片的鉴别
取本品14片,除去糖衣,研细,加热水50ml,棉花滤过,滤液用醋酸乙酯提取二次,每次15ml,弃去醋酸乙酯液,水溶液加盐酸调pH至1.0,用醋酸乙酯提取二次,每次15ml,合并醋酸乙酯提取液,置水浴上蒸干,残渣加甲醇2ml,滤过,滤液作为供试品溶液。另取绿原酸对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的
植物RNA的分离(总RNA的分离和mRNA的分离)
1. 总RNA的分离总RNA分离的方法很多,常采用的是异硫氰酸胍和b-巯基乙醇这两种RNase 抑制剂来抑制RNase的活性,同时,异硫氰酸胍与十二烷基肌氨酸钠(sarcosyl)共同作用可以破坏核蛋白复合体,使RNA顺利地解脱出来溶进缓冲液。由于RNA在碱性条件下不稳定,因而在整个提取过程中体
火鹤试管苗移栽
一、材料试验材料为经增殖培养(MS+6-BA0.2+IBA0.1+糖3%)和生根培养(1/2MS+6-BA0.15%+糖2%)的试管苗。苗高3cm以上,具有3片以上完全叶。二、方法(一)培育壮苗 将经生根培养40d后的幼苗,转移到壮苗培养基上,培养基配方为1/2MS+6-BA0.05 +IBA0.
赤霉素类物质浓度测定实验
定量测定赤霉素类物质有许多方法:如大麦糊粉层α-淀粉酶诱导形成法,酸模叶片保绿法,小麦黄化苗第一叶片基部切断伸长法,水稻幼苗第二叶叶鞘伸长的“点滴法”等。其中以水稻幼苗法较好。这一方法利用了赤霉素刺激幼嫩植物节间伸长的重要生理特性。在一定浓度范围(0.1-100pp M )内,叶鞘的伸长与浓度成正比
组培苗的的培养炼苗的目的和意义
组培苗的炼苗,炼苗即驯化,目的在于提高组培苗对外界环境条件的适应性,提高其光合作用的能力,促使组培苗 健壮,最终达到提高组培苗移栽成活率的目的。驯化应从温度、湿度、光照及有无菌等环境要素进行, 驯化开始数天内,应和培养时的环境条件相似;驯化后期,则要与预计的栽培条件相似,从而达到逐步适应的目的。
牛黄化毒片的功能主治
牛黄化毒片,解毒消肿,散结止痛。用于疮疡、乳痛、红肿疼痛。
牛黄化毒片的功能主治
解毒消肿,散结止痛。用于疮疡、乳痛、红肿疼痛。
牛黄化毒片的性状及鉴别
性状 本品为浅黄色糖衣片,除去糖衣后显黄棕色;味苦、辛。 鉴别 取本品14片,除去糖衣,研细,加热水50ml,棉花滤过,滤液用醋酸乙酯提取二次,每次15ml,弃去醋酸乙酯液,水溶液加盐酸调pH至1.0,用醋酸乙酯提取二次,每次15ml,合并醋酸乙酯提取液,置水浴上蒸干,残渣加甲醇2ml,滤
钼元素对小麦叶绿素含量的影响
高等植物中,叶绿素起着集聚光能,并通过光合作用将光能转化为化学能贮藏起来,供给植物的其它需能过程的作用,叶绿素含量的测量直接使用叶绿素测量仪来进行操作。植株营养元素缺乏常导致叶色变化,表明营养元素对叶绿素代谢很重要。通过研究表明小麦在生长的过程中缺钼会使小麦黄化。使用叶绿素测量仪进行进一步的研究以及
花生光暗幼苗的单细胞转录组图谱构建成功
原文地址:http://news.sciencenet.cn/htmlnews/2024/3/518535.shtm近日,广东省农业科学院作物研究所花生研究团队与合作者,在花生光暗形态转变的单细胞基因表达谱研究方面取得进展,成功构建的花生光暗幼苗的单细胞转录组图谱。相关成果发表于《植物生物技术杂志》
番茄黄化曲叶病毒致病机制获揭示
番茄黄化曲叶病是制约番茄产业发展的重要病害之一,但其致病机制不明确。近日,广东省农业科学院植物保护研究所蔬菜病害防控研究团队研究揭示了广东番茄黄化曲叶病毒编码的C4蛋白调控病毒侵染的新机制。相关成果发表于《分子植物病理学》(Molecular Plant Pathology)。 广东番茄黄化曲
黄化豌豆幼苗的“三重反应”实验
实验方法原理:乙烯是一种气体激素,它对植物的代谢,生长和发育有着多方面的作用。用乙烯气体处理黄化的豌豆幼苗,可抑制幼苗上胚轴的伸长,并使上胚轴发生膨大及横向生长。黄化幼苗对乙烯的这三种反应被称为“三种反应”,并可作为对乙烯的一种诊断性鉴定方法。这种方法是根据乙烯的主要生理作用建立的。据报导,乙烯可使
番茄黄化曲叶病毒致病机制获揭示
番茄黄化曲叶病是制约番茄产业发展的重要病害之一,但其致病机制不明确。近日,广东省农业科学院植物保护研究所蔬菜病害防控研究团队研究揭示了广东番茄黄化曲叶病毒编码的C4蛋白调控病毒侵染的新机制。相关成果发表于《分子植物病理学》(Molecular Plant Pathology)。广东番茄黄化曲叶病毒(
黄化豌豆幼苗的“三重反应”实验
实验方法原理乙烯是一种气体激素,它对植物的代谢,生长和发育有着多方面的作用。用乙烯气体处理黄化的豌豆幼苗,可抑制幼苗上胚轴的伸长,并使上胚轴发生膨大及横向生长。黄化幼苗对乙烯的这三种反应被称为“三种反应”,并可作为对乙烯的一种诊断性鉴定方法。这种方法是根据乙烯的主要生理作用建立的。据报导,乙烯可使细