Northern杂交操作步骤和DNA探针的制备与标记（1）
一．原理Northern 杂交是用来测量真核生物RNA的量和大小估计其丰度的实验方法，可以从大量的RNA样本同时获得这些信息。其基本步骤包括：1. 完整mRNA的分离2. 根据RNA的大小通过琼脂糖凝胶电泳对RNA进行分离3. 将RNA 转移到固相支持物上，在转移的过程中，要保持RNA 在凝胶中的相对分布4. 将RNA固定到支持物上5. 固相RNA与探针分子杂交6. 除去非特异结合到固相支持物上的探针分子7. 对特异结合的探针分子的图像进行检测、捕获和分析二．DNA 探针的制备与标记1．材料纯化的PCR产物2．仪器电泳仪，紫外分析仪， 离心管，移液枪，碎冰易生物仪器库：http://www.ebioe.com/yp/product-list-42.html易生物试剂库：http://www.ebioe.com/yp/product-list-43.html3．试剂10× transcription buffer；10× nucl......阅读全文
Northern杂交操作步骤和DNA探针的制备与标记（1）
一．原理Northern 杂交是用来测量真核生物RNA的量和大小估计其丰度的实验方法，可以从大量的RNA样本同时获得这些信息。其基本步骤包括：1. 完整mRNA的分离2. 根据RNA的大小通过琼脂糖凝胶电泳对RNA进行分离3. 将RNA 转移到固相支持物上，在转移的过程中，要保持RNA 在凝胶中的相
Northern杂交操作步骤和DNA探针的制备与标记（2）
(4) 将1 ~ 2 μl RNA 上样缓冲液加到乙二醛化的RNA 样品中，然后马上把RNA样品加到凝胶加样孔中，留着两边最外面的两个孔不要加样。将RNA 相对分子质量标准参照物加到最外面的孔中。(5) 以5V/cm 的电压进行电泳，直到溴酚蓝迁移大约8 cm。(6) 将凝胶放在保鲜膜上，在紫外灯下
核酸杂交技术(Northern－Blot、Southern－Blot和探针标记）
（一）Southern Blot原理：将待检测的DNA分子用/不用限制性内切酶消化后，通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，继而将其变性并按其在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上，固定后再与同位素或其它标记物标记的DNA或RNA探针进行反应。如果待检物中含有与探针互补的序列，则二者通过碱基互补的原理进
Northern杂交分析操作步骤
【操作】1．RNA的提取见前。2．变性胶的制备：取琼脂糖0.2g，加入 DEPC H2O 12.4ml，加热熔化，冷却至 60℃时加入5×甲醛凝胶电泳缓冲溶液4.0 、37%甲醛3.6ml、混匀、制胶。待胶凝固后，置于1×甲醛凝胶电泳缓冲溶液中预电泳5min。3．样品制备 取总RNA4.5 ，加入5
分子杂交技术Northern杂交的操作步骤
(1)RNA经变性电泳完毕后,可立即将乙醛酰RNA转移至硝酸纤维素滤膜上。转移方法与转移DNA的方法相似。 (2)转移完毕后 ,以6×SSC溶液于室温浸泡此膜5分钟,以除去琼脂糖碎片。 (3)将该杂交膜夹于两张滤纸中间,用真空烤箱于80℃干燥0.5-2小时。 (4) 用下列两种溶液之一进行
Northern杂交步骤和过程
Northern杂交与Southern杂交很相似。主要区别是被检测对象为RNA,其电泳在变性条件下进行,以去除RNA中的二级结构,保证RNA完全按分子大小分离。变性电泳主要有3种:乙二醛变性电泳、甲醛变性电泳和羟甲基汞变性电泳。电泳后的琼脂糖凝胶用与Southern转移相同的方法将RNA转移到硝酸纤
Northern杂交试验指导手册（5）－RNA探针制备
五、RNA探针制备（根据the DIG system user's guide）A． 地高辛标记的体外转录试剂及其配制（试剂盒提供）：10× NTP标记混合物：in Tris-HCl (pH 7.5)10mmol ATP10mmol CTP10mmol GTP6.5mmol UTP3.5mm
Northern杂交技术的方法和步骤
Northern杂交与Southern杂交很相似。主要区别是被检测对象为RNA,其电泳在变性条件下进行,以去除RNA中的二级结构,保证RNA完全按分子大小分离。变性电泳主要有3种:乙二醛变性电泳、甲醛变性电泳和羟甲基汞变性电泳。电泳后的琼脂糖凝胶用与Southern转移相同的方法将RNA转移到硝酸纤
Northern－blot实验操作步骤（1）
一、经乙二醛和二甲基亚砜变性处理后进行的RNA电泳这一方法原于McMaster和Carmichael（1977）。含有乙二醛－DMSO的凝胶比含有甲醛的凝胶更难于进行电泳，因为前者泳动速率较慢而且需将电泳液时行循环以避免电泳过程中形成过高的H+梯度。尽管上述两种凝胶具有近乎相等的分辨率（Miller
Northern杂交试验指导手册（4）－模板DNA的制备
A．质粒DNA的小量提取试剂及其配制含AP的LB液体培养基TE缓冲液：10mmol/L Tris-HCl (pH 8.0)1mmol/L EDTA (pH 8.0)溶液I： 25mmol/L Tris-Cl (pH 8.0)10mmol/L EDTA50mmol/L 葡萄糖高压灭菌15min.后，4
IL2质粒DNA探针制备的操作步骤
实验概要本实验介绍了IL-2质粒DNA探针制备的详细步骤。实验步骤1. 含IL-2质粒DNA探针的提取 1) 取含IL-2质粒DNA的单个菌落置两个25ml LB培养基(含100μg/ml Amp)，37℃ 220r/min 振摇过液(约16h )； 2) 取10ml菌液加200ml LB培
总RNA提取与Northern杂交（1）
一、 总RNA的提取1、 取组织10-50毫克，剪切成大小在0.5厘米以内的碎片，加入×5的RNA later（约2毫升）。样品在37度可保存1天。室温下1周，4度下1个月。2、 匀浆：用Rnase Erase spray（ICN）清理匀浆器头部（7mm），用DEPC水和乙醇清洗，将上述样品用镊
核酸探针标记及原位杂交1
一、核酸探针标记核酸探针分子杂交是指具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下（适宜的温度及离子强度等）可按碱基互补原则形成双链，此杂交过程是高度特异的。杂交的双方是待测核酸及探针。核酸探针根据核酸的性质，可分为DNA和RNA探针；根据标记物不同，可分为放射性标记探针和非放射性标记探针两大类；根据是否
高地辛标记的DNA探针制备实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 dTTPdUTPEDTASDS仪器、耗材 水浴锅培养箱实验步骤 1. 建立一个标准100 μl 反应体系，用10 μl，10×地高辛·11-dUTP/dTTP贮液，DNA酶Ⅰ酶量不变，15℃温育2 h。2. 取小份在微型胶中进行电泳以检测探针大小。3. 继续反应直
高地辛标记的DNA探针制备实验
基本方法 实验材料 DNA 试剂、试剂盒
RNA探针合成方法和合成效率检测方法介绍
相关专题制备RNA探针在RNA的杂交检测实验中，应用标记的RNA 探针将获得高灵敏度的杂交检测结果，与DNA 探针相比，检测灵敏度提高10-100倍。因为对于不同的杂交体类型来说，RNA-RNA杂交体的结合强度高于RNA-DNA和DNA-DNA杂交体。对于通过Northern blots检测低浓度m
RNA探针的合成方法和合成效率检测
在RNA的杂交检测实验中，应用标记的RNA 探针将获得高灵敏度的杂交检测结果，与DNA 探针相比，检测灵敏度提高10-100倍。因为对于不同的杂交体类型来说，RNA-RNA杂交体的结合强度高于RNA-DNA和DNA-DNA杂交体。对于通过Northern blots检测低浓度mRNA，以及原
高地辛标记的DNA探针制备实验——基本方法
实验材料DNA试剂、试剂盒dTTPdUTPEDTASDS仪器、耗材水浴锅培养箱实验步骤1. 建立一个标准100 μl 反应体系，用10 μl，10×地高辛·11-dUTP/dTTP贮液，DNA酶Ⅰ酶量不变，15℃温育2 h。2. 取小份在微型胶中进行电泳以检测探针大小。3. 继续反应直到获得大
Northern－blotting操作步骤
1. 取RNA2. 将电泳槽和板，梳齿浸泡在3%H2O2中20-30分钟，并吹干3. 跑 1%琼脂糖凝胶，检测样本RNA含量4. 变性胶在桌面上利用保险膜铺出一块干净的区域，将1.95g 琼脂糖加入 110ml 的 DEPC-H2O （加热前可在三角瓶上做一个记号，在加热后把蒸发的水分补足）加热
Northern杂交试验指导手册(1)
一、RNA提取方法一、改良异硫氰酸胍提取法试剂及其配制异硫氰酸胍变性液：贮存液－在含484ml 水（经DEPC处理）, 17.6ml 0.75mol/L柠檬酸钠（pH7.0）和26.4ml10%Sarkosyl的溶液中加入250g异硫氰酸胍，加热至60~65℃并持续搅拌使之充分溶解。贮存液室温保存备
Northern印迹的制备和Northern印迹
Northern印迹的制备 预备： 1.按下述步骤，每泳道加10～20μg总RNA或 0.5～1μgpoly(A)+RNA进行甲醛/ 琼脂糖凝胶电泳，将凝胶放在紫外线透照仪上，旁边置一标尺进行拍照。 a. 总RNA（10～20μg）用下列溶液在65℃温育5min：
northern,southern,western杂交的具体步骤
所用于分析的对象不同。 Northern杂交用于分析RNA； Southern杂交用于分析DNA； Western杂交用于分析蛋白质。大致过程如下： (1) 酶切DNA, 凝胶电泳分离各酶
关于Southern杂交的探针标记简介
用于Southern印迹杂交的探针可以是纯化的DNA片段或寡核苷酸片段。探针可以用放射性物质标记或用地高辛标记，放射性标记灵敏度高，效果好；地高辛标记没有半衰期，安全性好。人工合成的短寡核苷酸可以用T4多聚核苷酸激酶进行末端标记。探针标记的方法有随机引物法、切口平移法和末端标记法。
Northern杂交
转移并固定到膜上的 RNA 样品可以与特异的探针杂交，从而用来对所感兴趣的 RNA 进行定位。视实验人员和条件的差异，可以从多种方法中选择任意一种来标记和检测探针。用抑制非特异吸收探针的封闭试剂处理膜之后，在适于探针和固定的靶 RNA 杂交的条件下将膜同探针孵育，而后广泛洗膜以去除非特异结合的探针，
Northern杂交
实验方法原理 转移并固定到膜上的 RNA 样品可以与特异的探针杂交，从而用来对所感兴趣的 RNA 进行定位。视实验人员和条件的差异，可以从多种方法中选择任意一种来标记和检测探针。用抑制非特异吸收探针的封闭试剂处理膜之后，在适于探针和固定的靶 RNA 杂交的条件下将膜同探针孵育，而后广泛洗
Northern杂交
实验概要本实验介绍了Northern杂交的基本流程。主要试剂液氮，TRIzol (Invitrogen)，DEPC水，氯仿，异丙醇，70%酒精，酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)，水饱和酚(PH4.3)，无水乙醇，NaOAc，抽提缓冲液(0.02M NaOAc，1 mM EDTA，0.5% SD
Northern杂交
Northern杂交1．在10~20 ml 预杂交液中68℃温育膜2h。2．若使用双链探针，在100℃下加热32P标记的双链DNA 5 min，使之变性，然后迅速移至冰水中冷却。3．把变性的或单链放射性标记的探针直接加到预杂交液中，在合适的温度下继续温育12~16h。4．杂交后，将膜从塑料袋中取出，
Northern杂交
实验方法原理 转移并固定到膜上的 RNA 样品可以与特异的探针杂交，从而用来对所感兴趣的 RNA 进行定位。视实验人员和条件的差异，可以从多种方法中选择任意一种来标记和检测探针。用抑制非特异吸收探针的封闭试剂处理膜之后，在适于探针和固定的
DNA探针原位杂交
1、4—6微米切片,用防脱片胶（多聚赖氨酸）处理过的玻片贴附 2、56—60℃烤片2—16h 3、新鲜二甲苯脱蜡,10minX2（趁热脱蜡） 4、100%乙醇5minX2次,不用浸水,直接空气干燥 5、加入50μl蛋白酶K工作液（蛋白酶K用蒸馏水稀释,浓度为25μg/ml）,37℃消化1
Northern－Blotnorthern杂交
Northern BlotPreparation of Formaldehyde Agarose GelThe gel conditions (1% agarose, 1X MOPS, 6.3% formaldehyde) are designed for ~4 hours of electroph