离子交换柱层析(ionexchangechromatography)分离核苷酸
一、目的:学习离子交换柱层析法分离核苷酸的原理及方法。二、原理:离子交换作用一般指在固相和液相之间发生的可逆的离子交换反应,它可用于分离各种可解离的物质。通常离子交换剂是在一种高分子的不溶性母体上引入若干活性基团。这样人工会成的离子交换剂具有各种各样的性能。作为不溶性母体的离分子有树脂、纤维素、葡聚糖、琼脂糖或无机聚合物等,引入的活性基团可以是酸性基团,如强酸型的含有磺酸基(—SO3H)、中强酸型的含磷酸基(—PO3H2)、亚磷酸基(—PO2H)、弱酸型的含有羧基(—COOH)或酚羧基(—OH)等。也可以是碱性基团,如强碱型的含季铵[—N+(CH3)3]、弱碱型的含叔胺[—N(CH3)2]、仲胺(—NHCH3)、伯胺(—NH2)等。在一定条件下,离子交换树脂吸附的物质数量和在溶液中的物质数量达到平衡时,两者数量之比叫分配系数(平衡常数)。理想的情况是洗脱曲线和分配系数相符合,待分离的各种物质的分配系数,应有足够的差别,以Kd表示......阅读全文
离子交换凝胶柱层析
原理 在植物生理生化的研究中,往往要从一个组分复杂的混合物中,将性质很相近的生物大分子分离,这是研究工作中一个很关键的问题,需要一种具有高度分辨力的技术,才能满足这一要求。离子交换层析就是这样的技术,能够分离只有很小差异的物质(例如仅有一个氨基酸不同的两种蛋白质),是分离生物大分子的一
离子交换柱层析原理
离子的半径电荷等差异会影响它在离子交换柱上的移动速度,进而实现层析。
离子交换柱层析条件的选择
对于分离一个特定的蛋白质,选择什么样的柱子、离子交换剂和流动相等需根据具体情况统筹考虑,主要是根据待分离蛋白质本身的理化性质和生物学性质确定。因此,在采用离子交换层析法进行蛋白质的分离之前,应当对待分离的蛋白质的性质有所了解,如等电点、相对分子质量、疏水性、生物活性及测定方法、溶解性、浓度、发生
离子交换柱层析法(层析实验简介)概略
一、 原理:有些高分子物质含有一些可以分离的基因,例如-SO3H,-COOH等,因此可以和溶液中的离子产生交换反应。如:R-SO3H+M+ ———— R-S3M+H+或R-NH3OH+CL- ————— R-NH3CL+OH-这类高分子物质通称离子交换剂,其中使用最普遍的是离子交换树脂。由
离子交换柱层析分离核苷酸实验_离子交换层析法
本实验以酵母RNA 为材料, 将RNA 用碱水解成单核苷酸,再用离子交换柱层析进行分离, 最后采用紫外吸收法进行鉴定。旨在了解并掌握RNA 碱水解的原理和方法,掌握离子交换柱层析的分离原理和方法,熟练掌握紫外吸收分析方法。实验方法原理本实验以酵母RNA 为材料, 将RNA 用碱水解成单核苷酸,再用离
离子交换柱层析分离核苷酸实验
实验方法原理 本实验以酵母RNA 为材料, 将RNA 用碱水解成单核苷酸,再用离子交换柱层析进行分离, 最后采用紫外吸收法进行鉴定。同时通过测定各单核苷酸的含量, 可以计算出酵母RNA 的碱基组成。实验材料 酵母RNA试剂、试剂盒 阴离子交换树脂聚苯乙烯-二乙烯苯-三甲胺季铵甲酸甲酸钠KOH蒸馏水过
离子交换柱层析分离核苷酸实验
离子交换层析法 实验方法原理 本实验以酵母RNA 为材料, 将RNA 用碱水解成单核苷酸,再用离子交换柱层析进行分离, 最后采用紫外吸收法进行鉴定。同时通过
离子交换柱层析分离蛋白原理详解
1.离子交换与洗脱 所谓离子交换,是指溶液中的某一种离子与另一种靠静电力结合在惰性载体上的离子进行可逆交换的过程,即溶液中的离子结合到载体上而载体上的离子被替换下来。若惰性载体上以共价键结合着带正电荷的活性基团,则可交换阴离子,叫阴离子交换剂;若以共价键结合着带负电荷的活性基团,则可交换阳离子
离子交换柱层析(ionexchange-chromatography)分离核苷酸
一、目的:学习离子交换柱层析法分离核苷酸的原理及方法。二、原理:离子交换作用一般指在固相和液相之间发生的可逆的离子交换反应,它可用于分离各种可解离的物质。通常离子交换剂是在一种高分子的不溶性母体上引入若干活性基团。这样人工会成的离子交换剂具有各种各样的性能。作为不溶性母体的离分子有树脂、纤维素、葡聚
怎样利用离子交换柱层析法分离不同的蛋白质
离子交换柱层析法的核心在于不同的蛋白质的等电点不同所以说,利用离子交换柱层析法分离不同的蛋白质其实就是利用不同蛋白质不同的等电点来分离。比如目的蛋白等电点是5,那么在环境pH为8.0的情况下,目的蛋白可以结合阴离子交换层析,而杂蛋白可能不能结合或者结合能力比目的蛋白弱。通过不同的盐浓度的洗脱让结合能
怎样利用离子交换柱层析法分离不同的蛋白质
离子交换柱层析法的核心在于不同的蛋白质的等电点不同所以说,利用离子交换柱层析法分离不同的蛋白质其实就是利用不同蛋白质不同的等电点来分离。比如目的蛋白等电点是5,那么在环境pH为8.0的情况下,目的蛋白可以结合阴离子交换层析,而杂蛋白可能不能结合或者结合能力比目的蛋白弱。通过不同的盐浓度的洗脱让结合能
蛋白质水解产物阳离子交换柱层析时的洗脱顺序
PI2.77。氨基酸与阳离子交换树脂作用力的大小次序是碱性氨基酸>中性氨基酸>酸性氨基酸。溶液的pH高于等电点时氨基酸带正电,低于等电点时氨基酸带负电。选项中Arg(pI为10.76)所带正电荷最多,与交换树脂亲和力最强,后被洗脱。Asp(pI为2.77)所带负电荷最多,与交换树脂亲和力最弱,先被洗
DEAE纤维素柱层析纯化酶蛋白实验——离子交换层析法
本实验目的是以柱层析的方法进一步纯化蔗糖酶蛋白,利用DEAE 纤维素树脂作为离子交换剂进行柱层析分级分离。实验方法原理利用DEAE纤维素树脂作为离子交换剂进行柱层析分级分离。实验材料酶蛋白试剂、试剂盒DEAE纤维素NaOHHCLTris-HCl缓冲液NaCl仪器、耗材层析柱收集器磁力搅拌器搅拌子烧杯
硅胶柱层析
洗脱剂:极性小的用乙酸乙酯:石油醚系统;极性较大的用甲醇:氯仿系统;极性大的用甲醇:水:正丁醇:醋酸系统;拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸装柱:将柱底用棉花塞紧,不必用海沙,加入约1/3体积石油醚(氯仿),装上蓄液球,打开柱下活塞,将匀浆一次倾入蓄液球内。随着沉降,会有一些硅胶沾在蓄液球内,用石油醚(氯
凝胶渗透柱层析
凝胶渗透层析就是按照溶质分子的大小不同而进行分离的一种层析技术。当溶质分子大小不同的样品溶液通过凝胶柱时,由于凝胶颗粒内部的网络结构具有分子筛效应,分子大小不同的溶质就会受到不同的阻滞作用。分子量大的因不易渗入网络,被排阻在颗粒之外,因而所受到的阻滞作用小,1.凝胶颗粒2.中分子3.小分子4.大分子
什么是柱层析?
柱层析技术(Column chromatography) 又称柱色谱技术,主要原理是根据样品混合物中各组分在固定相和流动相中分配系数不同,经多次反复分配将组分分离开来。
柱层析的定义
柱层析操作时,先在圆柱管中填充不溶性基质,形成一个固定相。将样品加到柱子上,用特殊溶剂洗脱,溶剂组成流动相。在样品从柱子上洗脱下来的过程中,根据样品混合物中各组分在固定相和流动相中分配系数不同,经多次反复分配将组分分离。
柱层析的定义
柱层析操作时,先在圆柱管中填充不溶性基质,形成一个固定相。将样品加到柱子上,用特殊溶剂洗脱,溶剂组成流动相。在样品从柱子上洗脱下来的过程中,根据样品混合物中各组分在固定相和流动相中分配系数不同,经多次反复分配将组分分离。
β葡萄糖苷酶的纯化方法
粗提的β-葡萄糖苷酶可采用硫酸铵沉淀或用乙醇、丙酮等有机溶剂沉淀等方法初步分离。β-葡萄糖苷酶的进一步纯化,往往是根据具体情况,采用多种方法逐步分离。目前分离β-葡萄糖苷酶的方法较多,其中离子交换柱层析和凝胶过滤柱层析两种手段结合使用最为普遍,多数是先离子交换柱层析,后用凝胶过滤柱层析。离子交换柱层
β葡萄糖苷酶的纯化方法
粗提的β-葡萄糖苷酶可采用硫酸铵沉淀或用乙醇、丙酮等有机溶剂沉淀等方法初步分离。β-葡萄糖苷酶的进一步纯化,往往是根据具体情况,采用多种方法逐步分离。目前分离β-葡萄糖苷酶的方法较多,其中离子交换柱层析和凝胶过滤柱层析两种手段结合使用最为普遍,多数是先离子交换柱层析,后用凝胶过滤柱层析。离子交换柱层
离心柱层析的概念
中文名称离心柱层析英文名称spun-column chromatography定 义将小型的层析柱置于离心管中以离心力代替重力进行小量样品的快速层析法。常用于小量样品凝胶过滤脱盐和吸附层析等。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
柱层析法的原理?
柱层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而使各组分分离。一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附,极性较弱的物质不易被硅胶吸附。当采用溶剂洗脱时,发生一系列吸附→解吸→再吸附→再解du吸的过程,吸附力较强的组分,zhi移动的距离小,后出柱;吸附力较弱的组分,移动的距离大,先出柱。 硅胶柱
柱层析技术特点
柱层析操作时,先在圆柱管中填充不溶性基质,形成一个固定相。将样品加到柱子上,用特殊溶剂洗脱,溶剂组成流动相。在样品从柱子上洗脱下来的过程中,根据样品混合物中各组分在固定相和流动相中分配系数不同,经多次反复分配将组分分离。
硅胶柱层析原理
硅胶层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离,一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附,极性较弱的物质不易被硅胶吸附,整个层析过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程。[编辑本段]硅胶柱层析流动相极性小的用乙酸乙酯:石油醚系统;极性较大的用甲醇:氯仿系统;极性大的用甲醇:水:正丁醇:醋酸系
柱层析硅胶原理
硅胶层析法分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离, 极性较大的物质与硅胶作用强,保留时间长,极性弱的物质与硅胶作用弱,保留时间短,物质在固定相与流动相间通过反复的吸附、解吸过程,得以分离。
柱层析法的原理
柱层析原理:柱层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而使各组分分离。一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附,极性较弱的物质不易被硅胶吸附。当采用溶剂洗脱时,发生一系列吸附→解吸→再吸附→再解吸的过程,吸附力较强的组分,移动的距离小,后出柱;吸附力较弱的组分,移动的距离大,先出柱。硅胶柱层析流动
柱层析技术简介
柱层析技术(Column chromatography) 又称柱色谱技术,主要原理是根据样品混合物中各组分在固定相和流动相中分配系数不同,经多次反复分配将组分分离开来。
柱层析法的原理
柱层析原理:柱层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而使各组分分离。一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附,极性较弱的物质不易被硅胶吸附。当采用溶剂洗脱时,发生一系列吸附→解吸→再吸附→再解吸的过程,吸附力较强的组分,移动的距离小,后出柱;吸附力较弱的组分,移动的距离大,先出柱。硅胶柱层析流动
柱层析技术的定义
柱层析操作时,先在圆柱管中填充不溶性基质,形成一个固定相。将样品加到柱子上,用特殊溶剂洗脱,溶剂组成流动相。在样品从柱子上洗脱下来的过程中,根据样品混合物中各组分在固定相和流动相中分配系数不同,经多次反复分配将组分分离。
柱层析法的技术介绍
柱层析操作时,先在圆柱管中填充不溶性基质,形成一个固定相。将样品加到柱子上,用特殊溶剂洗脱,溶剂组成流动相。在样品从柱子上洗脱下来的过程中,根据样品混合物中各组分在固定相和流动相中分配系数不同,经多次反复分配将组分分离。