药学生化实验：疏水作用层析（HydrophobicInteraction...
【实验目的】通过实验了解疏水作用层析的原理与方法。 【实验原理】 疏水作用层析（Hydrophobic Interaction Chromatography，HIC）是根据分子表面疏水性差别来分离蛋白质和多肽等生物大分子的一种较为常用的方法。蛋白质和多肽等生物大分子的表面常常暴露着一些疏水性基团，我们把这些疏水性基团称为疏水补丁，疏水补丁可以与疏水性层析介质发生疏水性相互作用而结合。不同的分子由于疏水性不同，它们与疏水性层析介质之间的疏水性作用力强弱不同，疏水作用层析就是依据这一原理分离纯化蛋白质和多肽等生物大分子的。 疏水作用层析的基本原理如图所示。 溶液中高离子强度可以增强蛋白质和多肽等生物大分子与疏水性层析介质之间的疏水作用。利用这个性质，在高离子强度下将待分离的样品吸附在疏水性层析介质上，然后线性或阶段降低离子强度选择性的将样品解吸。疏水性弱的物质，在较高离子强度的溶液时被洗脱下来，当离子强度降低时，......阅读全文
药学生化实验：疏水作用层析（Hydrophobic－Interaction－...
【实验目的】通过实验了解疏水作用层析的原理与方法。 【实验原理】 疏水作用层析（Hydrophobic Interaction Chromatography，HIC）是根据分子表面疏水性差别来分离蛋白质和多肽等生物大分子的一种较为常用的方法。蛋白质和多肽等生物大分子的表面常常暴露着一些疏
疏水作用层析
实验概要通过实验了解疏水作用层析的原理与方法。实验原理疏水作用层析（Hydrophobic Interaction Chromatography，HIC）是根据分子表面疏水性差别来分离蛋白质和多肽等生物大分子的一种较为常用的方法。蛋白质和多肽等生物大分子的表面常常暴露着一些疏水性基团，我们把这些
疏水作用层析法纯化蛋白质实验
疏水相互作用层析是以介质疏水基团和蛋白质疏水区域间的亲和作用为基础的。疏水力是浸在一种极性液体（如水）中的非极性物质的排斥力。胞膜蛋白都具有一个明显的疏水区域以锚定在膜上。可溶性蛋白质在外表面上可能存在疏水小区，它促进蛋白复合物的形成，也可能是疏水配基结合部位或活性部位。这些暴露的疏水区对疏水层析纯
疏水作用层析法纯化蛋白质实验
疏水作用层析法 实验方法原理 在疏水层析的主要支持介质上含有大小不等的疏水侧链，烷基或芳香基，可是绝大多数情况起作用的是苯基或辛基。当碳氢链长度增加，即变得更
疏水作用层析法纯化蛋白质实验
实验方法原理 在疏水层析的主要支持介质上含有大小不等的疏水侧链，烷基或芳香基，可是绝大多数情况起作用的是苯基或辛基。当碳氢链长度增加，即变得更疏水时，疏水强的少量蛋白质被吸附。这时疏水相互作用太强，需用极端方法洗脱，可能会导致蛋白质变性。苯基琼脂糖比辛基琼脂糖疏水性低，是疏水纯化中效果不错的常用介质
疏水层析的概念和原理
疏水层析也称疏水作用下层析（hydrophobic interaction chromatography HIC）从分离纯化生命物质的机制来看，也属于吸附层析一类。疏水层析和反相层析（reversed phase chromatography）分离生命物质的依据是一致的，利用固定相载体上偶联的疏水性
什么是疏水层析？
疏水层析也称疏水作用下层析（hydrophobic interaction chromatography HIC）从分离纯化生命物质的机制来看，也属于吸附层析一类。疏水层析和反相层析（reversed phase chromatography）分离生命物质的依据是一致的，利用固定相载体上偶联的疏
疏水层析的基本概念
疏水层析也称疏水作用下层析（hydrophobic interaction chromatography HIC）从分离纯化生命物质的机制来看，也属于吸附层析一类。疏水层析和反相层析（reversed phase chromatography）分离生命物质的依据是一致的，利用固定相载体上偶联的疏水性
疏水相互作用层析的原理
疏水层析根据蛋白表面疏水性的不同，利用蛋白质与疏水层析介质疏表面可逆的相互作用来分离蛋白。纯水状态下，任何疏水作用都太弱而不能导致配基与蛋白之间的相互作用。某些盐却可以增强疏水相互作用。高浓度的盐会增强相互作用，而低浓度的盐会降低相互作用。但是目前尚无被广泛接受的关于疏水相互作用层析机制的理论。
疏水作用层析与反向液相色谱分离疏水性蛋白质的比较
疏水作用层析（Hydrophobic Interaction Chromatography，HIC）是根据分子表面疏水性差别来分离蛋白质和多肽等生物大分子的一种较为常用的方法。蛋白质和多肽等生物大分子的表面常常暴露着一些疏水性基团，我们把这些疏水性基团称为疏水补丁，疏水补丁可以与疏水性层析介质发生疏
蛋白质的理化性质有哪些
蛋白质主要的理化性质以及对应的分离纯化方法如下： 电荷 Charge：等电聚焦 isoelectricfocussing离子交换 Ion-Exchange等电点沉淀 Isoelectric precipitation疏水性 Hydrophobicity：反相层析 Reverse phase chro
蛋白质相互作用(protein－interaction)实验方法
免疫共沉淀和亲和层析共分离：免疫共沉淀是证明蛋白质-蛋白质相互作用的最直接最经典和最有效的方法，如蛋白A能与B相互作用结合成异源二聚体，无论用抗A或抗B的抗体或与A或 B的亲和物偶联的agarose小珠都能把A和B沉淀下来。因此广泛用于蛋白质相互作用研究。常用的小珠：GST-Agarose（不需要抗
比较疏水作用层析与反向液相色谱分离疏水性蛋白质
疏水作用色谱是根据分子表面疏水性的差异，分离蛋白质、多肽等生物大分子的常用方法。疏水基团经常暴露在蛋白质、多肽等生物大分子的表面。我们称这些疏水基团为疏水斑块。疏水性斑块可以与疏水性色谱介质发生疏水性相互作用由于不同分子的疏水性不同它们与疏水色谱介质之间的疏水力是不同的疏水作用色谱是基于这一原理分离
实验室分析方法疏水作用色谱法概念介绍
疏水作用色谱法（HIC, hydrophobic interaction chromatography）用适度疏水性的固定相,含盐的水溶液作为流动相,借疏水作用分离生物大分子化合物的液相色谱法。
蛋白分离纯化方法之疏水相互作用层析法
由于在自然界生命活动中起重要作用的蛋白质在机体细胞内的浓度比较低，并且存在于细胞的各个机构中的蛋白质几乎都是以复杂的混合形式存在的。为了在不破坏蛋白质的空间结构及一级结构，和不影响其生理功能的情况下，把蛋白质分离、纯化出来，需要使用一些技术，如重组蛋白纯化技术。疏水相互作用层析法是蛋白分离纯化的一种
蛋白分离纯化方法之疏水相互作用层析法
由于在自然界生命活动中起重要作用的蛋白质在机体细胞内的浓度比较低，并且存在于细胞的各个机构中的蛋白质几乎都是以复杂的混合形式存在的。为了在不破坏蛋白质的空间结构及一级结构，和不影响其生理功能的情况下，把蛋白质分离、纯化出来，需要使用一些技术，如重组蛋白纯化技术。疏水相互作用层析法是蛋
蛋白分离纯化方法之疏水相互作用层析法
由于在自然界生命活动中起重要作用的蛋白质在机体细胞内的浓度比较低，并且存在于细胞的各个机构中的蛋白质几乎都是以复杂的混合形式存在的。为了在不破坏蛋白质的空间结构及一级结构，和不影响其生理功能的情况下，把蛋白质分离、纯化出来，需要使用一些技术，如重组蛋白纯化技术。疏水相互作用层析法是蛋白分离纯化的一种
疏水层析的原理简介
疏水层析其原理如下：蛋白质表面一般有疏水与亲水基团，疏水层析是利用蛋白质表面某一部分具有疏水性，与带有疏水性的载体在高盐浓度时结合。在洗脱时，将盐浓度逐渐降低，因其疏水性不同而逐个地先后被洗脱而纯化，可用于分离其它方法不易纯化的蛋白质。
蛋白纯化系统分离方法之疏水相互作用层析法
由于在自然界生命活动中起重要作用的蛋白质在机体细胞内的浓度比较低，并且存在于细胞的各个机构中的蛋白质几乎都是以复杂的混合形式存在的。为了在不破坏蛋白质的空间结构及上等结构，和不影响其生理功能的情况下，把蛋白质分离、纯化出来，需要使用一些技术，如重组蛋白纯化技术。疏水相互作用层析法是蛋白分离纯化的一种
Performing－a－hunt－by－interaction－mating
AbstractWhen more than one bait will be used to screen a single library, significant time and resources can be saved by performing the interactor hunt
疏水层析基本原理介绍
疏水层析其原理如下：蛋白质表面一般有疏水与亲水基团，疏水层析是利用蛋白质表面某一部分具有疏水性，与带有疏水性的载体在高盐浓度时结合。在洗脱时，将盐浓度逐渐降低，因其疏水性不同而逐个地先后被洗脱而纯化，可用于分离其它方法不易纯化的蛋白质。
疏水层析的基本原理
疏水层析其原理如下：蛋白质表面一般有疏水与亲水基团，疏水层析是利用蛋白质表面某一部分具有疏水性，与带有疏水性的载体在高盐浓度时结合。在洗脱时，将盐浓度逐渐降低，因其疏水性不同而逐个地先后被洗脱而纯化，可用于分离其它方法不易纯化的蛋白质。
生化实验讲义(理论部分)——层析技术（十一）
3.4.5 亲和层析的应用亲和层析的应用主要是生物大分子的分离、纯化。下面简单介绍一些亲和层析技术用于纯化各种生物大分子的情况。抗原和抗体利用抗原、抗体之间高特异的亲和力而进行分离的方法又称为免疫亲和层析。例如将抗原结合于亲和层析基质上，就可以从血清中分离其对应的抗体。在蛋白质工程菌发酵液中所需蛋白
生化实验讲义(理论部分)——层析技术（十）
配体与基质偶联后，通常要测定配体的结合量以了解其与基质的偶联情况，同时也可以推断亲和层析过程中对待分离的生物大分子吸附容量。配体结合量通常是用每毫升或每克基质结合的配体的量来表示。测定配体结合量的方法很多，下面简单介绍几种：1) 差量分析：根据加入配体的总量减去配体与基质偶联后洗涤出来的量即可大致推
生化实验讲义(理论部分)——层析技术（九）
3.4.3 亲和吸附剂选择并制备合适的亲和吸附剂是亲和层析的关键步骤之一。它包括基质和配体的选择、基质的活化、配体与基质的偶联等等。这里主要介绍一些基本的原理，关于活化、偶联等过程的具体实验操作可以参阅本书后面的实验部分或相应的参考书。基质⑴ 基质的性质基质构成固定相的骨架，亲和层析的基质应该具有以
生化实验讲义(理论部分)——层析技术（二）
1.2 实验室规则 ⑴ 实验前必须认真预习实验内容，明确本次实验的目的和要求，掌握实验原理，写好实验预习报告，否则，不能进行实验。 ⑵ 实验时自觉遵守实验室纪律，保持室内安静，不大声说笑和喧哗。 ⑶ 实验过程中要听从教师指导，认真按照实验步骤和操作规程进行实验。若想改进和设计新
生化实验讲义(理论部分)——层析技术（一）
通过生物化学实验应该做到： ⑴ 学习设计一个实验的基本思路，掌握各个实验的基本原理，学会严密地组织自己的实验，合理地安排实验步骤和时间。 ⑵ 训练实验的动手能力，学会熟练地使用各种生物化学实验仪器，包括各种天平、各种分光光度计、各种离心机、自动部分收集器、恒流泵、核酸蛋白检测仪、冰冻
生化实验讲义(理论部分)——层析技术（七）
3.3 离子交换层析3.3.1 简介离子交换层析（Ion Exchange Chromatography简称为IEC）是以离子交换剂为固定相，依据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法。1848年，Thompson等人在研究土壤碱性物质交换
生化实验讲义(理论部分)——层析技术（八）
离子交换剂的总交换容量通常以每毫克或每毫升交换剂含有可解离基团的毫克当量数（meq / mg或meq / ml）来表示。通常可以由滴定法测定。阳离子交换剂首先用HCl处理，使其平衡离子为H?。再用水洗至中性，对于强酸型离子交换剂，用NaCl充分置换出H?，再用标准浓度的NaOH滴定生成的HCl，
生化实验讲义(理论部分)——层析技术（三）
3.1 层析技术概述3.1.1 引言层析法又称色层分析法或色谱法（Chromatography），它是在1903-1906年由俄国植物学家M. Tswett首先系统提出来的。他将叶绿素的石油醚溶液通过CaCO3管柱，并继续以石油醚淋洗，由于CaCO3对叶绿素中各种色素的吸附能力不同，色素被逐渐分