醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质的原理和操作步骤2
因此,在电泳时应尽量避免使用具有高电渗作用的支持物。醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法。醋酸纤维薄膜由二乙酸纤维素制成,它具有均一的泡沫样的结构,厚度仅120微米,有强渗透性,对分子移动无阻力,作为区带电泳的支持物进行蛋白电泳有简便、快速、样品用量少、应用范围广、分离清晰、没有吸附现象等优点。目前已广泛用于血清蛋白、脂蛋白、血红蛋白和同功酶的分离及用在免疫电泳中。三、器材及试剂:1.器材①醋酸纤维薄膜(2×8cm)②常压电泳仪③点样器(盖玻片)④培养皿(染色及漂洗用) ⑤粗滤纸 ⑥玻璃板 ⑦竹镊 ⑧白磁反应板 ⑨人血清或鸡血清 2.试剂: ①巴比妥缓冲液(PH8.6,离子强度0.07):巴比妥2.76克,巴比妥纳15.45克,加水至1000毫升。 ②染色液:含氨基黑10B0.25克,甲醇50毫升,冰醋酸10毫升,水40毫升(可重复使用)。 ......阅读全文
醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质的原理和操作步骤2
因此,在电泳时应尽量避免使用具有高电渗作用的支持物。醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法。醋酸纤维薄膜由二乙酸纤维素制成,它具有均一的泡沫样的结构,厚度仅120微米,有强渗透性,对分子移动无阻力,作为区带电泳的支持物进行蛋白电泳有简便、快速、样品用量少、应用范围广、分离清晰、没有吸附
醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质的原理和操作步骤1
一、目的:学习醋酸纤维薄膜电泳的操作,了解电泳技术的一般原理。二、原理:带电质点在电场中移动的现象称为电泳。电泳现象早在19世纪初期就被人们发现了,并用于胶体化学中,但是电泳技术的广泛应用则在20世纪40年代左右。近年来各种类型的电泳技术发展十分迅速。例如,纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳、纤维素或淀粉粉末
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质
实验原理 带电荷的蛋白质,在电场中向着与其所带电荷电性相反的电极泳动称为电泳。血清中各种蛋白质的等电点不同,但大都在pH7以下,若将血清置于pH8.6的缓冲液中,则这些蛋白质均带负电,在电场中都向阳极移动。由于各种蛋白质在同一pH环境中所带负电荷多少及分子大小不同,所以在电场中向阳
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质
实验概要1. 掌握醋酸纤维素薄膜电泳的原理和操作方法;2. 了解醋酸纤维素薄膜电泳所分离的血清蛋白质的各带谱及其临床意义。实验原理 带电荷的蛋白质,在电场中向着与其所带电荷电性相反的电极泳动称为电泳。血清中各种蛋白质的等电点不同,但大都在pH7以下,若将血清置于pH8.6的缓冲液中,
醋酸纤维薄膜电泳分离血清的蛋白质(一)
实验原理 带电荷的蛋白质,在电场中向着与其所带电荷电性相反的电极泳动称为电泳。血清中各种蛋白质的等电点不同,但大都在pH7以下,若将血清置于pH8.6的缓冲液中,则这些蛋白质均带负电,在电场中都向阳极移动。由于各种蛋白质在同一pH环境中所带负电荷多少及分子大小不同,所以在电场中向阳
醋酸纤维薄膜电泳分离血清的蛋白质(二)
实验步骤1、电泳槽的准备 将巴比妥-巴比妥钠缓冲液加入电泳槽中(两侧槽内注入等量的缓冲液),调节两侧内的缓冲液,使其在同一水平面,液面与支架的距离约为2~2.5cm。支架宽度到恰好适合CAM的长度,用3~4层滤纸或4层纱布搭桥。2、CAM准备 取醋纤薄膜(2
血清蛋白质的醋酸纤维薄膜电泳
【原理】以醋酸纤维薄膜为支持物,用缓冲液润湿后,将微量血清样品点于膜上,再在电泳槽中进行电泳,可将血清蛋白分离成清蛋白、α1、α2、β、γ球蛋白五条区带,将薄膜置于染色液中,使蛋白质固定并染色后,可看到清晰色带,也可将色带分别于碱溶液中进行定量测定,再计算血清中各种蛋白质的含量百分数。在正常情况下,
血清蛋白质的醋酸纤维薄膜电泳
【原理】以醋酸纤维薄膜为支持物,用缓冲液润湿后,将微量血清样品点于膜上,再在电泳槽中进行电泳,可将血清蛋白分离成清蛋白、α1、α2、β、γ球蛋白五条区带,将薄膜置于染色液中,使蛋白质固定并染色后,可看到清晰色带,也可将色带分别于碱溶液中进行定量测定,再计算血清中各种蛋白质的含量百分数。在正常情况下,
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质实验方法(一)
实验原理带电荷的蛋白质,在电场中向着与其所带电荷电性相反的电极泳动称为电泳。血清中各种蛋白质的等电点不同,但大都在pH7以下,若将血清置于pH8.6的缓冲液中,则这些蛋白质均带负电,在电场中都向阳极移动。由于各种蛋白质在同一pH环境中所带负电荷多少及分子大小不同,所以在电场中向阳极泳动速度也不同。蛋
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质实验方法(二)
6、染色 通电完毕,立即取出薄膜直接浸入丽春红S或氨基黑10B染色液中,染色5~10分钟。7、漂洗 至少准备3~4个漂洗皿,装入漂洗液。从染色液中取出薄膜条并尽量沥去染色液,按顺序投入漂洗液中反复漂洗,直至背景漂白为止。此时清晰可见5条色带。待干。8、定量 (1)洗脱比色法 取六支试管
醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白原理和实验方法
一、原理醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维素薄膜作为支持物的电泳方法。带电颗粒在电场力作用下,向着与其电性相反的电极移动的现象称为电泳。由于各种蛋白质都有特定的等电点,如将蛋白质置于pH值低于其等电点的溶液中,则蛋白质将带正电荷而向负极移动。反之,则向正极移动。因为蛋白质分子在电场中移动的速度与其带电量、
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋的白质实验(一)
实验原理带电荷的蛋白质,在电场中向着与其所带电荷电性相反的电极泳动称为电泳。血清中各种蛋白质的等电点不同,但大都在pH7以下,若将血清置于pH8.6的缓冲液中,则这些蛋白质均带负电,在电场中都向阳极移动。由于各种蛋白质在同一pH环境中所带负电荷多少及分子大小不同,所以在电场中向阳极泳动速度也不同。蛋
醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋的白质实验(二)
4、平衡 将已点样的薄膜加样面朝下,点样端置于阴极端,将膜条紧贴于电泳槽支架的盐桥上并保持平直,桥的另一端垂入缓冲液中,盐桥将膜的两端与缓冲液连通,加上槽盖平衡5min后通电电泳。5、电泳 正确联接电泳槽与整流器对应的正负极,点样侧接负极,另一侧接正极。开启电源通电。调节电压10V~15V/c
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳
原 理以醋酸纤维薄膜为支撑物,浸入pH8.6的缓冲液后吸去多余液体。将微量血清点于膜上,电泳后,将薄膜置染色液中使蛋白质固定并染色,洗去多余染料。操 作1.准备与点样(1)将薄膜切成2.5×8cm的小片。在薄膜无光泽面(正面)的一端约2cm处用铅笔划一线,以标明点样位置。同时在一端边沿写上实验者的学
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳
原理以醋酸纤维薄膜为支撑物,浸入pH8.6的缓冲液后吸去多余液体。将微量血清点于膜上,电泳后,将薄膜置染色液中使蛋白质固定并染色,洗去多余染料。操作1. 准备与点样(1)将薄膜切成2.5×8 cm 的小片。在薄膜无光泽面(正面)的一端约2 cm 处用铅笔划一线,以标明点样位置。(2)将薄膜无光泽面
醋酸纤维素薄膜电泳法的操作过程和所需仪器
1.仪器装置电泳室及直流电源同纸电泳。2.试剂(1) 巴比妥缓冲液(pH8.6)取巴比妥 2.76g,巴比妥钠15.45g,加水溶解使成1000ml。(2) 氨基黑染色液取 0.5g的氨基黑10B,溶于甲醇50ml、冰醋酸10ml及水40ml的混合液中。(3) 漂洗液取乙醇 45ml、冰醋酸5ml及
醋酸纤维素薄膜电泳法
仪器装置电泳室及直流电源同纸电泳。 2.试剂(1) 巴比妥缓冲液(pH8.6)取巴比妥2.76g,巴比妥钠15.45g,加水溶解使成1000ml。(2) 氨基黑染色液 取0.5g的氨基黑10B,溶于甲醇50ml、冰醋酸10ml及水40ml的混合液中。(3) 漂洗液 取乙醇45ml、冰醋酸5m
醋酸纤维素薄膜电泳法的操作法的介绍
(1) 醋酸纤维素薄膜 取醋酸纤维素薄膜,裁成2cm×8cm的膜条,将无光泽面向下,浸入巴比妥缓冲液(pH8.6)中,待完全浸透,取出夹于滤纸中,轻轻吸去多余的缓冲液后,将膜条无光泽面向上,置电泳槽架上,经滤纸桥浸入巴比妥缓冲液(pH8.6)中。 (2) 点样与电泳 于膜条上距负极端2cm处,
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验
由于各种蛋白质都有特定的等电点,如将蛋白质置于pH值低于其等电点的溶液中,则蛋白质将带正电荷而向负极移动。反之则向正极移动。因为蛋白质分子在电场中移动的速度与其带电量、分子的形状及大小有关,所以可用电泳法将不同的蛋白质分离开来。血清中含有多种蛋白质,等电点都在pH 7.5以下。将血清置于pH 8.6
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验
由于各种蛋白质都有特定的等电点,如将蛋白质置于pH值低于其等电点的溶液中,则蛋白质将带正电荷而向负极移动。反之则向正极移动。因为蛋白质分子在电场中移动的速度与其带电量、分子的形状及大小有关,所以可用电泳法将不同的蛋白质分离开来。血清中含有多种蛋白质,等电点都在pH 7.5以下。将血清置于pH 8.6
关于电泳法—醋酸纤维素薄膜电泳法的操作法介绍
(1)醋酸纤维素薄膜电泳法— 醋酸纤维素薄膜 取醋酸纤维素薄膜,裁成2cm×8cm的膜条,将无光泽面向下,浸入巴比妥缓冲液(pH8.6)中,待完全浸透,取出夹于滤纸中,轻轻吸去多余的缓冲液后,将膜条无光泽面向上,置电泳槽架上,经滤纸桥浸入巴比妥缓冲液(pH8.6)中。 (2) 醋酸纤维素薄膜
蛋白质的性质实验原理和操作步骤12
2. 不可逆的沉淀反应在发生沉淀反应时,蛋白质的分子内部结构,空间构象遭到破坏,失去其天然蛋白质的性质,这时蛋白质已发生变性。变性后的蛋白质沉淀不能再溶解于原来的溶液中,这种沉淀反应称为不可逆沉淀反应。重金属盐、生物碱试剂、过酸、过碱、加热、震荡、超生波、有机溶剂等都能使蛋白质发生不可逆沉淀反应。重
血浆清蛋白的分离纯化与鉴定
实验概要1.掌握蛋白质的分离技术2.掌握分段盐析、凝胶层析及蛋白质醋酸纤维薄膜电泳的原理及操作方法3.掌握电泳方法检测分离效果实验原理 不同的蛋白质的分子量、溶解度、以及在一定条件下带电的情况有所不同,可以更据这些性质的差别,分离及提纯各种蛋白质。利用硫酸铵分段盐析法将血清中的清蛋
关于醋酸纤维素薄膜电泳的特点介绍
1.(1)醋酸纤维薄膜对蛋白质样品吸附极少,无“拖尾”现象,染色后背景能完全脱色,各种蛋白质染色带分离清晰,因而提高了测定的精确性。 (2)快速省时。由于醋酸纤维薄膜亲水性较滤纸小,薄膜中所容纳的缓冲液也较少,电渗作用小,电泳时大部分电流是由样品传导的,所以分离速度快,电泳时间短,一般电泳45
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
实验概要血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳技术实验原理 带电粒子在电场中移动的现象称为电泳。电泳技术被广泛用于蛋白质、核酸和氨基酸等物质的分离和鉴定,电泳过程中带电粒子的移动速度与粒子荷电量、电场强度、粒子重量与半径及介质的粘度等有关。其中粒子荷电量又受周围介质的pH和离子强度的影响;电场强度
醋酸纤维素薄膜电泳法分离鉴定三种腺苷酸
一、目的掌握醋酸纤维素薄膜电泳法分离带电颗粒原理;观察核苷酸类物质的紫外吸收现象。二、原理带电粒子在电场中向着与其自身带相反电荷的电极移动的现象,称为电泳。控制电泳条件(如pH 等),使混合试样中的不同组分带有不同的净电荷,各组分在电场中移动的速度或方向各不相同,从而达到分离各组分的目的,这就是
关于醋酸纤维素薄膜电泳法的介绍
(1) 醋酸纤维素薄膜 取醋酸纤维素薄膜,裁成2cm×8cm的膜条,将无光泽面向下,浸入巴比妥缓冲液(pH8.6)中,待完全浸透,取出夹于滤纸中,轻轻吸去多余的缓冲液后,将膜条无光泽面向上,置电泳槽架上,经滤纸桥浸入巴比妥缓冲液(pH8.6)中。 (2) 点样与电泳 于膜条上距负极端2cm处,
醋酸纤维素薄膜电泳测定血清蛋白质有什么临床意义
血清蛋白电泳是用电泳的方法,测定血清中各类蛋白占总蛋白量的百分比。血清中的蛋白按照电泳时候的电泳速度不同,可以区分开来,分子量越小带电荷越多、泳动速度就会越快。一般可以粗略的分为清蛋白,α1球蛋白,α2球蛋白,β球蛋白和γ球蛋白。正常情况下白蛋白的数量是最多的,其次是γ球蛋白和β球蛋白。在骨髓瘤的用
醋酸纤维素薄膜电泳测定血清蛋白质有什么临床意义
血清蛋白电泳是用电泳的方法,测定血清中各类蛋白占总蛋白量的百分比。血清中的蛋白按照电泳时候的电泳速度不同,可以区分开来,分子量越小带电荷越多、泳动速度就会越快。一般可以粗略的分为清蛋白,α1球蛋白,α2球蛋白,β球蛋白和γ球蛋白。正常情况下白蛋白的数量是最多的,其次是γ球蛋白和β球蛋白。在骨髓瘤的用
分离血清样本方法和离心机操作步骤
我们把医院或者血站用来分离血液的离心机称之为血液离心机, 血液分离是医学和生物工程实验中经常要做的事情,而血液分离方法很多,所用到的设备和操作过程有所差异。较为常见的是血库通过血库离心机进行血液分离。大部分化验项目检查的并不是全血,而是血浆或血清。血浆是指去掉血细胞的血液,而血清则是去掉纤维蛋白原的