核酸蛋白转移电泳及杂交（SouthernBlot、NorthernBlot和...1
一、DNA Southern Blot及杂交 本技术可用于基因组DNA特定序列定位，尤其可分析某些基因的限制性内切酶长度多态性，对遗传性疾病的早期基因诊断、产前诊断或基因变异等方面的研究有应用价值，其过程包括：样品DNA内切酶水解、水解片断的琼脂糖凝胶电泳分离、分离后水解片断的转移(固定)、特异性DNA片断的分子杂交及放射自显影。 (一)样品DNA内切酶水解 限制性内切酶(RE)可裂解双链DNA，每种酶其特点是具有高度特异性的DNA裂解点和不同电离子强度的特殊反应条件。不同产品其反应条件不同，应根据说明书操作。单位(U)RE活性是在37℃ 1小时内能将1μg DNA所有特异性位点切断的酶用量。若用两种以上不同的内切酶，要注意RE的最适盐浓度，要由低向高逐级添加适量盐逐个进行DNA切割。 1、配液：10×限制性酶消化缓冲液 10×buffer O—无盐：100mmol/l Tri......阅读全文
核酸蛋白转移电泳及杂交（Southern－Blot、Northern－Blot和...1
一、DNA Southern Blot及杂交 本技术可用于基因组DNA特定序列定位，尤其可分析某些基因的限制性内切酶长度多态性，对遗传性疾病的早期基因诊断、产前诊断或基因变异等方面的研究有应用价值，其过程包括：样品DNA内切酶水解、水解片断的琼脂糖凝胶电泳分离、分离后水解片断的转移(固定)、特异
核酸蛋白转移电泳及杂交（Southern－Blot、Northern－Blot和...2
(10)倒去预杂交液，加入含探针的杂交液封口，42℃ 6h或过夜。 (11)取出转移膜，按以下条件洗膜 1×SSC，0.1%SDS室温2×15分钟 0.25SSC，0.1%SDS,42℃ 2×15分钟，气中干燥。 (12)将杂交后的膜曝光于X光片，暗盒中放射自显影2～
核酸杂交技术(Northern－Blot、Southern－Blot和探针标记）
（一）Southern Blot原理：将待检测的DNA分子用/不用限制性内切酶消化后，通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，继而将其变性并按其在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上，固定后再与同位素或其它标记物标记的DNA或RNA探针进行反应。如果待检物中含有与探针互补的序列，则二者通过碱基互补的原理进
Northern－Blotnorthern杂交
Northern BlotPreparation of Formaldehyde Agarose GelThe gel conditions (1% agarose, 1X MOPS, 6.3% formaldehyde) are designed for ~4 hours of electroph
Southern－blot杂交鉴定
1）取10ul待测DNA，于一定浓度的琼脂糖凝胶上进行电泳。(20mL,1.0%凝胶,)2) 凝胶用溴化乙锭染色，切掉凝胶四周多余部分，并在凝胶的一角作一记号, 拍照记录电泳结果(拍照时, 凝胶旁放一尺子)。3) 杂交用胶的制备 (做以下步骤两组合一)A.将凝胶浸没入30mL 0.25mol/L H
核酸蛋白转移电泳及杂交
一、DNA Southern Blot及杂交 本技术可用于基因组DNA特定序列定位，尤其可分析某些基因的限制性内切酶长度多态性，对遗传性疾病的早期基因诊断、产前诊断或基因变异等方面的研究有应用价值，其过程包括：样品DNA内切酶水解、水解片断的琼脂糖凝胶电泳分离、分离后水解片断的转移(固定)、特异性D
Southern－Blot杂交的原理、步骤及应用
原理Southern印迹杂交技术是分子生物学领域中最常用的具体方法之一。其基本原理是：具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件下，可按碱基互补的原 则形成双链，此杂交过程是高度特异的。由于核酸分子的高度特异性及检测方 法的灵敏性，综合凝胶电泳和 核酸内切限制酶分析的结果，便可绘制出DNA分子的限制图
Northern－Blot
Northern Blot Northern Blot 试剂、试剂盒 20XMOPS 缓冲液 20
Northern－Blot
试剂、试剂盒 20XMOPS 缓冲液 20XSSC 50XDenhardt 液 杂交液 10%SDS仪器、耗材 水平电泳装置 水浴 硝酸纤维素膜或尼龙膜 3 MM 滤纸 紫外交联仪 杂交管 杂交炉 [32P] 标记的 DNA 或 RNA 探针实验步骤 一、材料与设备1) 水平电泳装置2) 水浴3)
Southern－Blot
1. Run gel (0.8 -1.0% agarose is best). For yeast chromosomal Southerns, digest 20 μg DNA. Use 50 ml minigel for most purposes. Photograph gel, but mi
Northern－blot实验操作步骤（1）
一、经乙二醛和二甲基亚砜变性处理后进行的RNA电泳这一方法原于McMaster和Carmichael（1977）。含有乙二醛－DMSO的凝胶比含有甲醛的凝胶更难于进行电泳，因为前者泳动速率较慢而且需将电泳液时行循环以避免电泳过程中形成过高的H+梯度。尽管上述两种凝胶具有近乎相等的分辨率（Miller
原位杂交和核酸杂交是一种吗
核酸杂交方法是一种分子生物学的标准技术,用于检测DNA或RNA分子的特定序列（靶序列）.经典的核酸杂交方法是将DNA或RNA先转移并固定到硝酸纤维素或尼龙膜上,与其互补的单链DNA或RNA探针用放射性或非放射性标记,在膜上杂交时,探针通过氢键与其互补的靶序列结合,洗去未结合的游离探针后,经放射自显影
免疫印迹法和免疫捕获法的区别
免疫印迹实验和酶联免疫的区别如下：免疫印记一般是要把检测的样品转到膜上,再用抗体检测酶联免疫一般是把抗体固定在支持物上,再与要检测的样品反应,目标物就会与抗体结合而留在支持物上。WB所检测的一般是抗原，而Elisa抗原抗体都可以检测。WB只能用抗体去检测你的蛋白样品。ELISA可以固定抗原也可以固定
Northern－blot技术
经乙二醛和二甲基亚砜变性处理后进行的RNA电泳 这一方法原于McMaster和Carmichael(1977)。 含有乙二醛－DMSO的凝胶比含有甲醛的凝胶更难于进行电泳， 因为前者泳动速率较慢而且需将电泳液时行循环以避免电泳过程中形成过高的H＋梯度。尽管上述两种凝胶具有近乎相等的分辨率（Mill
Northern－blot技术
经乙二醛和二甲基亚砜变性处理后进行的RNA电泳 这一方法原于McMaster和Carmichael(1977)。 含有乙二醛－DMSO的凝胶比含有甲醛的凝胶更难于进行电泳， 因为前者泳动速率较慢而且需将电泳液时行循环以避免电泳过程中形成过高的H＋梯度。尽管上述两种凝胶具有近乎相等的分辨率（Mill
Northern－blot实验
Northern blot技术 Northern Blot 实验方法原理 将RNA样品通过变性琼脂糖凝胶电泳进行分离，再转移至尼龙膜等固相膜载体上，
Northern－Blot技术
[仪器、试剂、材料]（一）仪器恒温水浴箱，电泳仪，凝胶成像系统，真空转移仪，真空泵，UV 交联仪，杂交炉，恒温摇床，脱色摇床，漩涡振荡器，分光光度计，微量移液器，电炉（或微波炉），离心管，烧杯，量筒，三角瓶，等。 （二）材料总RNA样品或mRNA样品，探针模板DNA(25 ng)，尼龙膜（三）试剂N
Protocol－of－Northern－blot
Protocol of Northern blot质粒的转化和扩增质粒的鉴定目的基因片段的切割3.1样品双酶切(175μl水解体系)DW 115μlBuffer B(10×) 17.5μlBaM H 15μlPst I 17μlDNA(MMP-9) 16μlBSA 4.5μl37℃水浴，3h。3.2
Northern－blot实验
实验方法原理 Northern blot的基本概述是将RNA样品通过变性琼脂糖凝胶电泳进行分离，再转移至尼龙膜等固相膜载体上，用放射性或非放射性标记DNA或RNA特异性探针对固定于固相膜上的mRNA进行杂交，洗膜去除非特异性结合杂交信号，经放射自显影或现色反应，对杂交信号进行分析。将杂交的m
Genomic－Southern－Blot
SolutionsProtocol:Digest 5-10 μg genomic DNA overnight with restriction enzyme of choice.Run digested gDNA on 0.8% TAE gel with marker (with no ethidi
Southern－blot实验
实验方法原理 具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件下，可按碱基互补的原则特异性地杂交形成双链。利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线
Southern－blot实验
Southern blot可应用于：（1）检测重组DNA；（2）分析DNA样品中是否有与探针序列同源的DNA片段；（3）验证检测片段的分子量大小。实验方法原理具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件下，可按碱基互补的原则特异性地杂交形成双链。利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶
Southern－blot实验
实验方法原理 互补的核苷酸序列通过Walson-Crick碱基配对形成稳定的杂合双链分子DNA分子的过程称为杂交。杂交过程是高度特异性的，可以根据所使用的探针已知序列进行特异性的靶序列检测。杂交的双方是所使用探针和要检测的核酸。该检测对象可以是克隆化的基因组DNA，也可以是细胞总DNA 或总RN
Northern杂交、Southern杂交和Western杂交有什么区别
区别：研究的对象不同。southern主要的对象是DNA，northern研究的对象是RNA，而western研究的对象为蛋白质。1、Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段
Northern杂交、Southern杂交和Western杂交有什么区别
区别：研究的对象不同。southern主要的对象是DNA，northern研究的对象是RNA，而western研究的对象为蛋白质。1、Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段
Northern杂交、Southern杂交和Western杂交有什么区别
区别：研究的对象不同。southern主要的对象是DNA，northern研究的对象是RNA，而western研究的对象为蛋白质。1、Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段
Northern－blot实验方法
Northern blot 是一种通过检测RNA的表达水平来检测基因表达的方法，通过northernblot的方法可以检测到细胞在生长发育特定阶段或者胁迫或病理环境下特定基因表达情况。Northern blot 首先通过电泳的方法将不同的RNA分子依据其分子量大小加以区分，然后通过与特定基因
western－blot－的原理及操作步骤
原理Western Blot与Southern印迹杂交或Northern印迹杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素膜NC膜）上，固相载体以非共价键形式吸附
酶联免疫电泳转移分析法
该法是分析蛋白质的一种新方法，由southern blot衍化而来，后者是由Southern E.M. 所创建，即将在琼脂糖凝胶中电泳后的DNA，原位吸附于硝酸纤维素膜上，再用放射性同位素如32P等标记的单链RNA或DNA探针，与板上的核酸分子杂交，从而达到分析DNA中基因位置和顺序的目的。以后
Southern－Blot实验原理及方法
实验原理：Southern Blot是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线照射固定，再与相对应结构的标记探针进行杂交，用放射自显影或酶反应显色，