外源基因在真核细胞中的表达系统
1. 真核生物表达的优越性和必要性① 真核生物具有转录后加工系统，可识别并删除基因中的内含子，剪切加工为成熟mRNA.②具备完善的翻译后加工系统，可进行糖基化、乙酰化等修饰，使蛋白形成正确的天然构型，因而真核生物表达系统产生的蛋白更接近天然状态，有利于其功能、生物活性的研究。③某些真核细胞可将基因表达产物分泌到细胞培养液中，简化了纯化工艺，降低了生产成本。另外，由于真核生物表达的调控方式非常复杂，有助于我们深入了解基因调控的机制。2. 真核基因组的复杂性与原核生物比较，真核生物的基因组更为复杂，可列举如下。（1）真核基因组比原核基因组大得多，大肠杆菌基因组约4×106bp，哺乳类基因组在109bp数量级，比细菌大千倍；大肠杆菌约有4000个基因，人则约有10万个基因。（2）真核生物主要的遗传物质与组蛋白等构成染色质，被包裹在核膜内，核外还有遗传成分(如线粒体DNA等)，这就增加了基因表达调控的层次和复杂性。（3）原核生物的基因组......阅读全文
λ噬菌体臂与外源基因组DNA片段的连接实验
当 λ 噬菌体臂与外源基因组 DNA 片段相连时，必须考虑到两个参数：噬菌体臂与潜在插入片段的摩尔比，以及在反应混合物中各类 DNA 的浓度。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理当 λ 噬菌体臂与外源基因组 DNA 片段相连时，必须考虑到两个参数：噬菌体臂与潜在插入片段的摩尔
动物细胞培养及外源基因导入的原理和方法
细胞培养是现代生物学研究中应用最为广泛的技术之一。它的突出优点，一是研究对象是活的细胞，可长时期地监控、检测甚至定量评估其形态、结构和生命活动等；二是可以人为地严格控制研究条件，便于研究各种物理、化学、生物等外界因素对细胞生长、发育和分化等的影响，有利于单因子分析；三是研究的样本可以达到比较均一性。
λ噬菌体臂与外源基因组DNA片段的连接实验
实验方法原理 当 λ 噬菌体臂与外源基因组 DNA 片段相连时，必须考虑到两个参数：噬菌体臂与潜在插入片段的摩尔比，以及在反应混合物中各类 DNA 的浓度。实验材料 噬菌体 T4 DNA 连接酶基因组 DNAλ 噬菌体包装混合物λ 噬菌体臂 DNA试剂、试剂盒 ATPSM 和 SM+ 明胶仪器、耗材
λ噬菌体臂与外源基因组DNA片段的连接实验
实验方法原理 当 λ 噬菌体臂与外源基因组 DNA 片段相连时，必须考虑到两个参数：噬菌体臂与潜在插入片段的摩尔比，以及在反应混合物中各类 DNA 的浓度。 实验材料
真核细胞基因组DNA的提取
实验概要高等动物，高等植物的基因组相当庞大，如人类细胞基因组由30亿个碱基对组成，果蝇基因组有1.4×108个碱基对，水稻基因组有1.4×109个碱基对。真核细胞基因组中，约1万－1.5万个可表达的结构基因，其它大量存在的是调控序列和内含子序列。可以说某特定物种的基因组，包含了该物种生长，发育，繁殖
什么是外源化学物的毒性
毒性与剂量、接触途径、接触期限有密切关系。评价外源化学物的毒性,不能仅以急性毒性高低来表示,有一些外源化学物的急性毒性是属于低毒或微毒,但却有致癌性,如,NaNO2;有些外源化学物的急性毒性与慢性毒性完全不同,如苯的急性毒性表现为中枢神经系统的抑制,但其慢性毒性却表现为对造血系统的严重抑制。
酵母表达外源蛋白（foreign－protein）（4）
15、菌体密度：菌体是在BMMY中培养的，可以不用BMMY做对照，在600nm处测OD值，培养基和PBS光吸收都很低，PBS更方便。麦芽浸提液培养酵母（不换液，补料），生长阶段结束后，密度可达到10-12，诱导培养结束后，密度可达到18左右。如果用1体积的BMGY，在生长阶段结束后，换液时，加入1/
简述外源凝集素的功能
1、有助机体Ca2+、糖输运、维系共生功能。在机体的Ca2+和糖输运中起作用。在贝类中，为它们同一些植物共生起维系作用。 2、共扼接合功能。与其他糖蛋白或糖发生共扼接合，就如高等动物中抗体与抗原体系中的相互作用。 3、清除杂物功能。在甲壳动物变态期间，参与清除机体不必要的细胞，组织片段或残余
酵母表达外源蛋白（foreign－protein）（5）
或者第5步和第6步改为丙酮洗:5.加入200ul冰冷的丙酮，用手指轻弹EP管，洗去管底和管壁残余的TCA。6.15000g,离心10－20分钟,倒掉上清，将EP管倒扣在吸水纸上轻轻控几下，除去残余在管口的液体。样品是酵母细胞超声后离心获得的上清，用Loading buffer溶解蛋白沉淀，始终不
概述外源凝集素的作用
凝集素中一大类动植物乃至微生物起源的多价非免疫蛋白或糖蛋白，一般被认作为外源凝集素—Lectins。它是Boyd于1963年提出，后被大家认可的。外源凝集素是非免疫起源的热敏蛋白质或糖蛋白，由于其多价构型及对特定细胞多糖具结合亲和力，它们选择凝集某些细胞(包括脊椎动物血球及一些病原微生物)和沉淀
外源化学物质的adme过程
简述外源化学物质的adme过程血液凝固可分为三个过程：1）凝血酶原激活物形成；2）凝血酶形成；3）纤维蛋白形成。内源性凝血途径特点：参与凝血的因子均在血浆中，启动因子是XII，当血管内膜受损或血液抽出体外后接触异物表面时被激活，再依次通过因子XI、IX的激活引起因子X激活。外源性凝血途径特点：由血管
酵母表达外源蛋白（foreign－protein）（2）
如果是用自己配置的培养基，如玉米浸提液、麦芽浸提液、麦麸浸提液等等，可以不用换液，采取添料来维持酵母对培养基的营养需要。用无机盐进行大规模发酵，更省钱。大规模发酵时，甲醇的流加速度增加不要太快。另外使用纯氧并不昂贵，在武汉买个钢瓶600元左右，一瓶纯氧20元。一个批次100h左右估计3－4 瓶氧气。
外源质粒DNA转化大肠杆菌
摘要： 转化是将外源DNA分子通过物理或化学的方法导入基因工程细菌中的过程,是基因工程等研究领域的基本实验技术之一. 外源质粒 DNA 转化 大肠杆菌 1 实验简介 转化是将外源DNA分子通过物理或化学的方法导入基因工程
酵母表达外源蛋白（foreign－protein）（3）
12、蛋白降解分泌表达的目标蛋白比胞内蛋白确实容易被降解。可以尝试以下几种办法：1、尽可能降低培养液的pH值减少酶活，酵母生长pH值比较广，4～7都可以试一下；2、多试几种蛋白添加剂，充当酶解底物（比如酵母酸）；3、摸索最适下罐（摇瓶也一样），宁可少表达点也别给降解光了。实在没办法，只好换菌株或做p
酵母表达外源蛋白（foreign－protein）（1）
1、 菌株用GS115表达不出蛋白，换KM71H后，大部分克隆能表达。2、温度： 在28度和室温下诱导表达，表达水平可能都不低。3、pH手册上用6.0，pH提高到6.8，不表达的蛋白可能就表达出来。BMMY的pH7.0-7.5比较合适。国内外做的最好的rHSA，最适pH大概 5-6左右。pH3的时候
动物细胞培养及外源基因导入的原理和操作步骤
实验概要通过本实验掌握传代细胞培养的基本方法，了解无菌操作的基本原则。掌握磷酸钙介导的贴壁细胞的通用转染方法。了解细胞凋亡的形态特征，掌握细胞凋亡DNA梯度（“DNA Ladder”）电泳检测法。实验原理细胞培养是现代生物学研究中应用最为广泛的技术之一。它的突出优点，一是研究对象是活的细胞，可长时期
实时荧光定量－PCR技术用于检测插入的外源基因拷贝数
自 1994 年，第一例转基因植物产品 Flavr Savr TM 西红柿在美国上市，到 2003 年底，世界范围内转基因作物已遍布 18 个国家和地区，种植面积达 167.2 万英亩 (6770 万公顷 )( Ewen SWB,1999; 北国网 ) 。大量实践使得植物转基因技术已有了
动物细胞培养及外源基因导入的原理和操作步骤（一）
实验原理细胞培养是现代生物学研究中应用最为广泛的技术之一。它的突出优点，一是研究对象是活的细胞，可长时期地监控、检测甚至定量评估其形态、结构和生命活动等；二是可以人为地严格控制研究条件，便于研究各种物理、化学、生物等外界因素对细胞生长、发育和分化等的影响，有利于单因子分析；三是研究的样本可以达到比较
动物细胞培养及外源基因导入的原理和操作步骤（二）
实验试剂细胞营养液（DMEM液体培养基，10％胎牛血清，双抗100单位/ml），消化液（0.05％胰酶，0.53mM EDTA·Na），Hank’s液。2. 2×HBS液（280mMNaCl, 10mMKCl, 1.5mMNaHPO4·2H2O, 12mM葡萄糖，50mMHepes，pH7.05,
研究揭示水稻RNA识别结构域蛋白抑制外源基因沉默的机制
植物是复杂的生物系统。植物体内基因的表达受到多种水平的调控，如转录水平、转录后水平、DNA甲基化/去甲基化等，从而对基因表达进行精密高效的调控。 中国科学院遗传与发育生物学研究所张劲松研究组筛选OsEIN2过表达材料的抑制子，鉴定到一个包含RNA识别结构域（RRM）的蛋白SOE。SOE可以与剪
关于外源凝集素的应用介绍
1)分离和纯化含糖高分子； 2)分离和纯化细胞； 3)鉴定微生物； 4)选择突变株细胞； 5)研究细胞表面的结构特征； 6)鉴定糖链的结构； 7)探索免疫反应的机理； 8)作为组织化学和细胞化学的试剂； 9)作为肿瘤细胞鉴定试剂和治疗剂； l0)临床上的其他用途。
关于外眼源性眩晕的原因分析
外眼源性眩晕的原因： 如眼肌麻痹产生复视，注意飞快行车或站立于悬崖等，引起头晕眼花及眩晕。 引起眩晕的疾病种类很多，大约有上百种病可以引起眩晕，不同的疾病的原因也是不一样的。按照病变部位的不同，大致可以分为周围性眩晕和中枢性眩晕两大类。中枢性眩晕是由脑组织、脑神经疾病引起，比如听神经瘤、脑血
关于外源凝集素的基本介绍
外源凝集素又称植物性血细胞凝集素，是一类可使红血球凝集的非免疫来源的多价糖结合蛋白或蛋白质。例如，类凝集素仅存在于豆科作物中，它们对糖结合的专一性较宽。
关于外源凝集素的组成介绍
外源凝集素由结合多个糖分子的蛋白质亚基组成，分子量为91000～130000u(道尔顿），为天然的红细胞抗原.外源凝集素比较耐热，80℃数小时不能使之失活，但100℃温度下1h可破坏其活性.外源凝集素对实验动物有较高的毒性.在小鼠的食物中加入0.5%的黑豆凝集素可引起小鼠生长迟缓.大豆凝集素的毒
简述外源凝集素的毒性机制
外源凝集素产生毒性的机制尚在争论中.实验动物食用生的大豆脱脂粉会导致其生长迟缓，一半原因应归于其中的外源凝集素.研究表明，外源凝集素摄入后与肠道上皮细胞结合，减少了肠道对营养素的吸收，从而造成动物营养素缺乏和生长迟缓.但去除外源凝集素的生大豆粉脱脂粉，其营养价值只有轻微的提高.生大豆粉除外源凝集
有机质谱仪中，除电子电离源外还有什么电离源
有机质谱仪，常见的电离源，一类是“硬电离”方式，主要是EI电子轰击，还有一类是“软电离”，有ESI电喷雾离子化、MALDI基质辅助激光解析电离、FAB快原子轰击等。
关于外眼源性眩晕的鉴别诊断介绍
1、脑血管性眩晕：夏冬季节由于血液粘稠度增加，容易发生各种脑血管意外，导致脑血管性眩晕的发生。应注意多饮水，不要突然改变体位，如夜晚上厕所时猛起，都容易引发脑血管性眩晕。一旦发生，应尽快到医院就诊，经确诊后可以适当给以扩血管药物、抗血小板聚集药物(如阿司匹林)、抗凝药物等。 2、脑肿瘤性眩晕：
关于外眼源性眩晕的缓解方法介绍
外眼源性眩晕的预防： 眩晕症临床表现复杂多样，涉及到多种学科，几十种疾病。患者应积极预防，控制原发病；一旦出现症状应尽快到医院诊治，以免耽误病情。
关于外眼源性眩晕的检查诊断介绍
1.应明确眩晕的性质：周围性眩晕，眼球震颤多有固定方向；阵发的、偶发的或严重的眩晕发作，间歇期无异常者提示周围性病因；单侧耳聋伴耳鸣是周围性病因；单侧耳聋伴耳鸣是周围神经病变的可靠标志。中枢性眩晕，眼球震颤方向不固定；持续的眩晕或失平衡状态，伴有眼球震颤与步态障碍者，提示中枢神经系统疾病；复视、
外源DNA和质粒载体的连接反应
外源ＤＮＡ片段和线状质粒载体的连接，也就是在双链ＤＮＡ５'磷酸和相邻的3'羟基之间 形成的新的共价链。如质粒载体的两条链都带5'磷酸，可生成４个新的磷酸二酯链。但如果质粒ＤＮＡ已去磷酸化，则吸能形成２个新的磷酸二酯链。在这种情况下产生的两个杂交体分子带有２个单链切口，当杂本导